禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达     

任红玉  谢芝勋  谢丽基  王盛  黄娇玲  范晴  罗思思  张艳芳  曾婷婷  张明秀  谢志勤  邓显文 《黑龙江畜牧兽医》2019,(7):59-62

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糖蜜─尿素舔砖饲喂育成水牛的初步体会     

卢永  杨白云  关意寅  黄锋  方文远  唐小飞 《广西畜牧兽医》1995,(4)

糖蜜─尿素舔砖饲喂育成水牛的初步体会卢永，杨白云，关意寅，黄锋，方文远，唐小飞广西水牛研究所５３０００１前言广西农村养牛，冬春多数喂稻草等农作物秸秆和枯草，此时不仅营养摄入量不足，而且营养成分也不平衡，无法满足正常的生长、繁殖和泌乳的营养需要，牛的生...  相似文献   

基于石墨烯电化学免疫传感器检测牛病毒性腹泻病毒     

黄娇玲  谢芝勋  范晴  谢志勤  谢丽基  邓显文  罗思思  曾婷婷  张艳芳  王盛  张民秀  刘加波  庞耀珊 《动物医学进展》2019,40(12)

构建一种新型电化学免疫传感器用于检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV),为BVDV提供一种新型快速的检测方法。利用甲壳胺(Chi)修饰石墨烯(G)并负载金纳米粒子(AuNP),得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子(G-Chi-AuNP)纳米复合物用于修饰金电极,然后固定抗BVDV NS3蛋白单克隆抗体,构建BVDV电化学免疫传感器。所构建的电化学免疫传感器对BVDV的检测敏感度为10~(1.2) TCID_(50),特异性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒(BRV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛分支杆菌(MB)、牛冠状病毒(BCV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。研究建立的BVDV电化学免疫传感器具有特异性好和灵敏度高的优点,在BVDV快速检测领域具有良好的应用前景。  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒E2结构蛋白的原核表达、纯化及鉴定     

范晴  谢芝勋  谢志勤  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢丽基  罗思思 《广西农业生物科学》2014,(2):234-238

根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒囊膜糖蛋白E2基因设计1对特异性引物,以Oregon CV24株为模板,PCR扩增目的片断后与pET-32a原核表达载体连接,转化大肠杆菌Transetta（DE3）感受态细胞,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物,结果表明重组E2蛋白在体外得到较好表达,表达的融合蛋白分子量为57.7 ku。可溶性分析表明重组E2蛋白以包涵体的形式存在,经镍柱His标签蛋白纯化后进行western-blot检测。结果表明：E2重组蛋白均具有反应原性,能与BVDV的阳性血清进行反应。  相似文献   

鸭Ⅰ型肝炎病毒荧光定量RT-PCR方法建立及初步应用     

谢丽基  谢芝勋  庞耀珊  谢志勤  刘加波  邓显文  范晴 《中国家禽》2012,34(10):23-26

根据GenBank中鸭Ⅰ型肝炎病毒的基因序列,设计合成一对引物和一条Taq-Man探针。进行优化后,建立了能够检测鸭Ⅰ型肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。该方法敏感性好,检测敏感性达到20个模板拷贝数,比常规PCR灵敏度高100倍;该方法特异性强,对番鸭细小病毒、鸭圆环病毒和鹅细小病毒等6种病原体的检测全为阴性。对广西地区鸭群收集的118份病料进行检测,结果阳性率为1.69%。结果提示:在广西地区的鸭群中,存在鸭Ⅰ型肝炎病毒的感染,建立的荧光定量RT-PCR方法可用于鸭Ⅰ型肝炎病毒的临床快速检测。  相似文献   

H5亚型AIV HA抗原表位重组蛋白McAbs的制备及应用     

庞耀珊  谢芝勋  邓显文  谢志勤  谢丽基  刘加波  范晴 《中国动物检疫》2012,29(10):34-39

目的以H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的血凝素(HA)抗原表位重组表达蛋白为抗原,探索H5亚型AIV单克隆抗体制备的简便有效途径。方法利用H5亚型AIV的HA抗原表位原核表达重组蛋白为抗原,4次免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法筛选能分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特性及初步应用价值进行测试。结果得到一株能稳定分泌针对H5亚型AIVHA抗原表位的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,单克隆抗体ELISA效价达1:5×104,为具有IgK轻链的IgM亚类。该单克隆抗体能特异性地与H5亚型AIV产生肉眼可见的WesternBlot免疫印迹反应,与其它供试的禽病抗原无反应。H5N1亚型AIV阳性血清能有效阻断辣根过氧化酶标记的单克隆抗体与HA抗原表位重组蛋白的结合。结论本研究探索出一条利用H5亚型AIV的HA抗原表位重组表达蛋白为抗原的单克隆抗体制备的简便、高效途径,所制备的单克隆抗体稳定性好、效价高、特异性强,在H5亚型禽流感病毒及其血清学检测中有较高的应用价值。  相似文献   

贝类折光马尔太虫半套式PCR检测方法的建立及初步应用     

谢丽基  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  范晴 《中国动物检疫》2012,29(12):26-28

根据Genbank中折光马尔太虫的基因保守序列,设计了3条特异性引物,通过对半套式PCR扩增条件的优化,研究建立了检测贝类折光马尔太虫的半套式PCR方法.该方法对折光马尔太虫模板进行扩增,得到与实验设计相符的228 bp的特异性扩增带,而对单孢子虫、派琴虫、副溶血弧菌、溶藻弧菌和河弧菌等病原体的扩增,结果全为阴性.敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到0.01 fg的折光马尔太虫质粒DNA.用该半套式PCR对福建沿海的贝类样品进行检测,结果从溢蛏中检出折光马尔太虫7份,结果提示福建沿海养殖的贝类中存在折光马尔太虫感染,建立的半套式PCR方法可以用于贝类折光马尔太虫的临床快速检测.  相似文献   

白鹭源新城疫病毒的分离与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈安莉  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  谢丽基  范睛 《动物医学进展》2012,33(7):119-121

从1只患病的白鹭的咽喉、泄殖腔棉拭子中分离到1株病毒,经血凝、血凝抑制试验和RT-PCR法鉴定为新城疫病毒。根据该毒株对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、鸡胚半数感染量的测定和新城疫强弱毒鉴别的RT-PCR检测,表明该分离株为新城疫强毒株。  相似文献   

H1和H3亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立     

郭捷  谢芝勋  彭宜  刘加波  谢志勤  庞耀珊  邓显文  谢丽基 《动物医学进展》2012,33(12)

为建立简便、快速同时检测H1和H3亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的方法,根据GenBank中H1亚型AIV-HA基因和H3亚型AIV-HA基因的序列,分别设计了2对针对H1AIV和H3 AIV的保守基因序列的引物.应用这2对引物对混有H1 AIV和H3 AIV的模板进行二重PCR扩增,得到了2个特异性扩增条带,大小与试验设计相符的302 bp(H1 AIV)和626 bp(H3 AIV),而对其他亚型AIV和禽呼吸道病原体的PCR扩增结果均为阴性,敏感性测定结果表明,该二重PCR技术能同时检出50Pg的H1 AIV模板和26 pg的H3 AIV模板.  相似文献   

禽流感病毒RT-LAMP检测技术的建立     

彭宜  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  谢丽基  范晴  罗思思 《动物医学进展》2012,33(12):43-46

根据GenBank中禽流感病毒(AIV)M基因序列,设计针对所有亚型AIV的通用检测引物,并对反应条件进行优化,建立了检测AIV的逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化检测方法。结果表明,建立的检测方法对禽流感病毒总RNA最小检出限为10fg,灵敏度为RT-PCR的1 000倍,能特异地检测出所有不同的HA亚型禽流感病毒,对其他禽呼吸道病原体无扩增反应;本方法快速,在常规水浴锅或金属恒温槽中50min就可完成,反应结束后不需开盖即可直接用肉眼根据反应液的颜色变化对结果进行判定。本研究建立的禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法具有操作简便、仪器设备要求简单、灵敏、快速、特异等优点,适合在基层进行AIV的快速早期筛检。  相似文献