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11.
根据基因库中鸡γ-干扰素的基因序列设计了1对特异性引物，应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，从ConA诱导培养的广西10个地方优质品种鸡外周血淋巴细胞RNA中扩增了γ-干扰素基因，结果，均得到了大小为520 bp的特异性片段。将扩增产物纯化并克隆到pMD18-T载体上，获得重组质粒，经PCR和EcoRⅠ＋SalⅠ双酶切鉴定后测序。序列分析结果表明，广西10个地方优质品种鸡γ-干扰席基因均编码145个氨基酸的成熟蛋白，分子质量约为16．8ku，与哺乳动物和其他品种鸡的核苷酸序列同源性分别为38．8％～39．0％和99．2％～100％，氨基酸序列同源性分别为23．69／6～24．8％和97．6％～99．4％。 相似文献
12.
用设计合成的1对跨越禽呼肠孤病毒（ARV）P17非结构蛋白基因完整开放阅读框（ORF）的特异性引物，对ARVS1133株进行了RT-PCR扩增。扩增产物与pGEX-4T-1原核表达载体连接后，转化大肠杆菌BL21感受态细胞。经0．2mmol／LIPTG诱导，表达的融合蛋白分子质量为42.4ku，占茵体总蛋白的34％。表达产物P17蛋白经不同浓度尿素纯化后，纯度达到85％。Western-blotting显示，纯化的P17蛋白能与感染ARV的阳性血清反应，说明其具有抗原性。以此重组蛋白为包被抗原初步建立了用于鉴别检测ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的SPF鸡血清的ELISA。 相似文献
13.
根据GenBank登陆的新城疫病毒L基因序列,设计了3对引物(L1和L2、L3和L4、L5和L6)。用RT-PCR技术对3株新城疫病毒广西分离GX7/02、GX9/03、GX11/03的L基因进行了分段扩增和克隆,并对克隆出来的3个片段进行序列测定,用DNAstar软件比较分析后进行拼接,得到长约为6.8 kb、包含有L基因全长的核苷酸序列。L基因的RNA全长为6 704 bp,拥有一个6 615 bp的开放阅读框,推导其编码的氨基酸数为2 204个。氨基酸同源性分析表明广西分离株之间同源性为98.6%~98.7%;与ZJ1株同源性为98.8%~98.9%;与La-Sota、B1、F48E9、HB92同源性为92.0%~94.2%。 相似文献
14.
雏鸡绿脓杆菌病是一种由条件性致病菌绿脓杆菌引起的传染病。通常细菌经免疫注射的伤口或脐带进入雏鸡体内并大量繁殖而发病,造成雏鸡大量死亡。近年来该病常有发生,造成严重的经济损失,已引起养禽业者的重视。１９９７年１１月南宁某鸡场饲养的Ｂ４蛋用雏鸡,暴发一起... 相似文献
15.
16.
从广西各地患禽巴氏杆菌病急性死亡的鸡、鸭肝脏分离出５６株禽巴氏杆菌强毒株，经培养特性和生化特性试验鉴定，从中选出１５株典型禽巴氏杆菌菌株。Ｃａｒｔｅｒ荚膜抗原分型鉴定，１５株菌均为荚膜Ａ型，间接血凝滴度为１∶１６０～１∶６４０。通过毒力和免疫原性测定，从中选择毒力较强、免疫原性较好的Ｂ２５、Ｂ２６、Ｂ２７３菌株进行人工致弱，其中Ｂ２６菌株在０．１％裂解全血马丁汤中，通过物理诱变方法致弱，即在传代过程中，把培养温度由３７℃逐渐提高到４５℃，每１２ｈ传１代而成功致弱，传至１２００代时，毒力显著减弱，且仍保持其良好的免疫原性和培养特性，从而获得了禽巴氏杆菌Ｂ２６－Ｔ１２００弱毒菌株 相似文献
17.
为建立微滴式数字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）定量检测鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum,MG）方法,以MG的mgpc基因序列为目的序列,在其保守区域内设计合成了1对特异性引物和1条探针,通过各反应条件优化,建立了检测MG的ddPCR方法,并测定了建立方法的特异性、敏感性以及重复性。结果显示：建立方法的最佳引物浓度为20 μmol/μL,探针浓度为10 μmol/μL,退火温度为55 ℃;该方法只检出MG,没有检出鸡滑液囊支原体、禽衣阿华支原体、禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽脑脊髓炎病毒、禽偏肺炎病毒、禽呼肠孤病毒、鸡沙门氏菌和鸡大肠杆菌,且相互间没有交叉反应;本方法最低检测MG重组质粒标准品的检测限为3.9拷贝/μL。重组质粒标准品浓度在3.9~41 025拷贝/μL范围内,绘制的ddPCR绝对定量曲线与测得值呈良好的线性关系（R2 = 0.999）;3次重复检测试验结果的变异系数均小于5%。对采集的60份病鸡喉拭子、气囊拭子及肺样品进行MG检测,结果ddPCR方法的阳性检出率（15.0%）高于荧光定量PCR方法（13.3%）。结果表明,本研究建立的ddPCR方法定量检测MG特异性强,灵敏度高,重复性好,为绝对定量检测MG提供了技术手段。 相似文献
18.
对虾WSSV和IHHNV多重PCR检测试剂盒的研究与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
在对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)二温式PCR检测技术前期研究的基础上,将这2种病原的特异性引物与PCR基础反应液一起组装成快速检测试剂盒。通过对试剂盒敏感性、稳定性和保存期等技术指标的测定以及对临床样品的检测试验,该试剂盒对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板均能特异性地扩增出2条与实验设计相符的593 bp(WSSV)和356 bp(IHHNV)的DNA片段,而对其它对虾病原的扩增结果均为阴性;该试剂盒最低能检测到102pg的WSSV DNA和10 pg的IHHNV DNA。对WSSV和IHHNV DNA的检出量分别为102~103pg和10~102pg。 相似文献
19.
分别针对桃拉综合征病毒（TSV）基因、传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）基因,设计了2对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测TSV和IHHNV的二温式多重RT-PCR技术.特异性和敏感性试验结果表明,该技术只对TSVRNA和IHHNVDNA进行扩增,分别得到1条231bp的TSV特异性cDNA扩增片段和1条356bp的IHHNV特异性DNA扩增片段,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性,该技术最低能同时检测到10pg的TSVRNA和IHHNVDNA,具有高度的特异性和敏感性.临床应用试验证明,该技术可以用于对虾养殖业中TSV和IHHNV的快速检测和鉴别诊断. 相似文献
20.