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据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（highly and lowly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP/LP-PRRSV）的非结构蛋白2（Nsp2）基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR（Real-time fluorescent quantitative RT-PCR）检测方法;对该二重实时荧光定量RT-PCR方法进行了敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与建立的HP/LP-PRRSV二重RT-PCR方法进行了对比试验。结果显示,成功建立了鉴别HP/LP-PRRSV的二重实时荧光定量RT-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈阳性反应,而对5个对照病原均呈阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92%,较普通二重RT-PCR方法阳性检出率高。 相似文献
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为研究核苷二磷酸激酶B（nucleoside diphosphate kinase B,NDPK B）蛋白表达对新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV） F48E9株复制与增殖的影响,本试验将真核表达重组质粒pEGFP-NDPK B转染Vero细胞,经G418压力筛选出了阳性细胞单克隆,并通过RT-PCR、Western blotting和倒置荧光显微镜观察鉴定了NDPK B mRNA和蛋白质的表达,在细胞系基础上,通过HA-HI、TCID50及实时荧光定量PCR检测NDPK B蛋白对NDV F48E9株复制和增殖的影响。结果表明,试验成功地构建了高表达NDPK B蛋白的Vero/NDPK B细胞系,并在此基础上,通过检测证明了NDPK B能抑制NDV F48E9株在Vero细胞中的复制与增殖,提示以NDPK B为基础有可能设计开发抗NDV的新药物或抗病毒增效剂,对NDV进行预防或治疗。 相似文献
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摘要：为了研究猪圆环病毒2型（PCV2）核酸疫苗,本研究采用重叠延伸PCR（splicing by overlap extension-PCR , SOE-PCR）方法通过一基因柔性接头（linker）(G4S)3将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2的成熟肽基因（PoIL-2）构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,对阳性重组质粒进行双酶切后回收嵌合基因亚克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中;筛选阳性重组表达质粒（rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2）瞬时转染COS-7细胞,分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2 )生物学活性;提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2免疫Balb/c小鼠,采用PCV2抗体ELISA检测试剂盒检测rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在小鼠体内的免疫效果,并与只含PCV2 ORF2基因的重组表达质粒pcDNA3.1/OFR2 (rpcDNA3.1/OFR2)进行免疫效果比较。结果表明：成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3.1(+)重组表达质粒;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞内进行了成功表达,表达的rCap-linker-PoIL-2蛋白存在于COS-7细胞的细胞浆内,可与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应,表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重生物学活性; rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠产生明显的抗PCV2抗体,且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3.1/OFR2。本研究为PCV2的核酸疫苗研制奠定了基础。 相似文献
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RT-PCR和核酸探针在IBV检测中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
用ＰＣＲ和核酸探针杂交检测了３种毒株（Ｈ１２０株,Ｍ４１株,ＨＫ株）在鸡胚中的繁殖动态及人工感染鸡和自然感鸡气管粘液及肾组织内的ＩＢＶ．结果表明：在鸡胚中繁殖３种毒株ＩＢＶ（Ｈ１２０,ＨＫ,Ｍ４１）,ＰＣＲ最早检出时间为２０～２４ｈ,克隆探针最早检出时间为２４～３０ｈ;用克隆核酸探针检测人工感染鸡,１２ｈ后能从肾脏中检出病毒。对７只就诊鸡的病变肾脏进行杂交检测和ＰＣＲ扩增,有５只均呈阳性反应。ＩＢＶ分离株ＨＫ株与标准株Ｍ４１株经ＰＣＲ扩增、ＨａｅⅢ和ＨｉｎｄⅢ酶切及ＲＦＬＰ分析,表明其属同一马萨诸塞血清型。ＰＣＲ和核酸杂交技术为生产上提供了直接从尿囊液和感染鸡组织中快速检测ＩＢＶ病毒及诊断ＩＢＶ的新方法,对ＩＢＶ的血清定型也有一定的实用价值。 相似文献
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为降低河南省家禽新城疫传播风险,推动家禽养殖业健康安全发展,为新城疫综合防控提供科学依据,按照《河南省2022年动物疫病监测与流行病学调查计划》要求,分阶段采集家禽血清学和病原学样品,采用HI试验和荧光RT-PCR方法进行新城疫专项监测,监测新城疫血清抗体和病毒核酸。结果显示,河南省新城疫抗体场群合格率和个体合格率均在97%以上,远超出国家70%免疫合格率的标准,检出3个场点40份病毒核酸阳性样品,场群阳性率为2.40%,个体阳性率为1.09%。结果表明：河南省新城疫整体防控效果较好,免疫抗体水平较高,建立了良好的免疫屏障,但检出少数病毒核酸阳性样品,感染风险仍存在,需要做好定期监测和流行病学调查,及时补免、补防和消除隐患。 相似文献
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PCV2可严重导致猪群产生免疫抑制,从而容易继发和并发其它传染病的发生;也可加重其它传染病的临床表现和病理过程,PCV感染可能干扰正常的免疫功能。猪圆环病毒属于单股DNA圆环病毒科,该科的共同特征为20面体对称,无囊膜,核酸为负链,是单股环状DNA,是迄今为止发现的最小的动物病毒。其中PCV1基因组大小为1759bp,包含7个阅读框;PCV2基因组大小为1767～1768bp,包含11个阅读框;目前诊断PCV的方法大致可分为两类:一类为血清学方法,另一类为病原学方法,本病尚无疫苗可用,目前主要采取综合防制措施对本病的防控。 相似文献
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弓形虫病是一种人兽共患疾病,广泛分布于世界各地,对人及家畜的危害非常严重.人的先天性弓形虫病在胎儿或婴幼儿可出现发育畸形、智力障碍、脑炎、脑膜炎甚至死亡等临床症状;许多畜禽如猪、牛、猫、犬、羊、马、骆驼、家兔、鸡、鸭等都可以感染弓形虫且出现病症,其中以猪的感染率较高,该病曾给养猪生产造成巨大经济损失.为此,主要就猪弓形... 相似文献
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从山东、河南、河北、北京、江苏、广东、广西、四川、吉林、辽宁、台湾11省42个不同鸡群收集临床有发病表现的828只病、死鸡的病理组织样品，用点杂交方法检测各个样品中马立克氏病病（Marek’s disease virus，MDV）、网状内皮细胞增生病病毒（Reticuloendotheliosis virus，KEV）、鸡传染性贫血病病毒（Chicken anemia virus，CAV）的感染情况。结果表明：828只病鸡中这3种病毒的检出率均相当高，分别为83．94％（MDV）、61．0％（CAV）和57．25％（REV），并且存在非常严重的双重感染（31．16％）和三重感染（44．69％）， 相似文献
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非洲猪瘟的扩散风险点及防控对策 总被引：2，自引：0，他引：2
为有效防控非洲猪瘟疫情,降低非洲猪瘟的扩散风险,本文结合非洲猪瘟流行现状及部分国际已发疫情,对非洲猪瘟扩散风险点进行简要分析。分析认为:养殖环节风险点主要是养殖场(户)生物安全水平低及饲喂餐厨剩余物(泔水);流通环节风险点主要存在于生猪及猪肉产品长距离调运、猪肉及其产品销售;屠宰环节关键风险点是私屠滥宰。因此,应严禁泔水及猪源性蛋白饲料产品饲喂生猪,加强生猪养殖场(户)生物安全措施,完善活畜禽长途调运监管,强化生猪屠宰企业管理等。 相似文献