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副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立 总被引：2，自引：1，他引：1
【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌（Haemophilus Parasuis,HPS）外膜蛋白P5（outer-membrane protein P5,OMP5）,建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体 pET-32a(+)连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达。亲和层析法纯化蛋白,尿素梯度透析复性,Western blot鉴定表达产物。将超声破碎抗原和复性蛋白分别按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其它条件进行优化,最终建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的HPS OMP5蛋白做抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为 1:400,血清的最佳稀释度为1:160。用建立的间接ELISA 方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清,结果检出72份阳性,检出率为22.71%,与广东地区发病猪中的HPS分离率24%接近。同时,用该方法与用超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品,结果,该法检出27份阳性,检出率为34.62%,后者则检出31份阳性,检出率为39.74%,二者符合率为71.79%。【结论】本研究利用重组表达的OMP5蛋白作为抗原建立的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 方法,特异性好、重复性好,检出率与HPS临床分离率接近,可用于副猪嗜血杆菌的临床检测、流行病学调查和免疫监控。 相似文献
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Sibila M Pieters M Molitor T Maes D Haesebrouck F Segales J 陈善真 曹仁祺 饶雷 张居荣 陈海辉 林显站 王贵平 《中国猪业》2018,13(9):41-45
猪支原体是地方性肺炎的主要病原,地方性肺炎是一种主要影响育肥猪的慢性呼吸道疾病。尽管人们为了控制猪支原体感染和其造成的不利影响做了很多努力,地方性肺炎依然给全球养猪业造成严重经济损失。猪支原体被引入猪场主要是通过购买亚临床感染的动物,或者少数情况下通过近距离的空气传播。一旦侵入猪群,支原体可能通过与感染的母猪直接接触而传播给仔猪或在同圈猪只之间传播。细菌培养是诊断猪支原体感染的金标准,但因其方法费力,通常很少使用。ELISA和PCR方法以及以屠宰场监测或者田间解剖形式的死后检查,是调查支原体是否参与猪呼吸道疾病的最常用方法。这些技术已被用来监测受支原体影响的临床或亚临床感染猪群,免疫或非免疫猪群以及在不同生产和管理条件下的猪群支原体感染发病情况。在猪场水平上的地方性肺炎临床发病过程不同和支原体疫苗接种效果不同,提示不同支原体田间分离株的传播和毒力特征存在差异。总结了目前猪支原体流行病学的最新观点,包括传播、感染和血清转阳规律,同时比较了几种监测地方性肺炎的流行病学技术。 相似文献
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为了解广东省猪群中猪输血传播病毒(TTSuVs)的感染情况,采用Nest-PCR方法对广东省7个不同地区规模化猪场抽检采集的159份育肥猪血清进行检测.结果表明,TTSuVs的2个种——TTSuV1和TTSuV2的阳性检出率分别为54.72％和35.22％,二者的共感染率为29.56％,说明TTSuVs在广东猪群中有较为广泛的传播.挑选Nest-PCR检测TTSuV1和TTSuV2为阳性的样品,分别在病毒保守区设计引物,扩增病毒基因,测序验证后,与其它已发表的不同属种TTVs ORF1序列进行进化树分析.结果表明猪TTVs与人、犬、猫、猴的TTVs分别处在进化树的不同分枝,具有很大差异 ;本次研究获得的TTSuV1 ORF1序列与国内多株已发表的TTSuV1 ORF1序列相似性为72％～75％;获得的TTSuV2ORF1序列与现有测序的多株TTSuV2的ORF1序列相似性为88％～97％.此研究为进一步研究TTSuVs流行状况、血清学诊断方法和临床防治技术奠定基础. 相似文献
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中草药在养禽生产中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
中国加入WTO后,畜禽产品的国际市场化步伐进一步加快,我国畜禽产品面临的国际市场的冲击和竞争也日趋严峻.发展绿色畜牧业,生产绿色,无公害食品已成为我国畜牧业生产面临的关键问题.因此,中兽药的作用愈加明显.其中一个主要应用是作为饲料添加剂.中草药添加剂作为一种绿色添加剂,不仅可解决长期困扰畜牧业发展的抗生素残留问题,还可在一定程度上缓解由于添加抗生素引起的病原菌耐药性及滥用抗生素导致饲料成本加大等问题,提高我国畜禽产品的出口创汇力度,缩小我国畜牧业与发达国家之间的差距. 相似文献
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本文探讨聚合体形式的猪干扰素α真核表达质粒(p VAX1-PIFNα)对猪PRRSV弱毒疫苗免疫作用的增强作用。在猪免疫PRRSV弱毒疫苗的同时,注射p VAX1-PIFNα重组表达质粒与多聚赖氨酸(PLL)的聚合体(PLL-p VAX1-PIFNα),以研究聚合体状态的干扰素对PRRSV免疫的增强作用。将分泌表达干扰素α的重组真核表达质粒p VAX1-PIFNα与PLL聚合,同时免疫PRRSV弱毒疫苗和PLL-p VAX1-PIFNα聚合体,使用ELISA试剂盒检测PRRSV中和抗体;另外,分离培养猪外周血白细胞(PBMC)进行体外试验,分析PLL-p VAX1-PIFNα聚合体刺激淋巴细胞后IFN-γ的分泌情况。中和抗体的结果表明,PLL-p VAX1-PIFNα的使用可明显提高PRRSV活疫苗诱导产生PRRSV中和抗体的能力;细胞试验的结果表明,经PLL-p VAX1-PIFNα刺激后,明显提高了淋巴细胞分泌表达IFN-γ的水平。在PRRSV疫苗免疫中,聚合体状态的猪IFNα重组表达质粒可有效提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,这一结果也为干扰素或其他重组蛋白在疫苗免疫中的应用提供了新的思路。 相似文献
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中国加入WTO后,畜禽产品的国际市场化步伐进一步加快,我国畜禽产品面临的国际市场的冲击和竞争也日趋严峻。发展绿色畜牧业,生产绿色、无公害食品已成为我国畜牧业生产面临的关键问题。因此,中兽药的作用愈加明显。其中一个主要应用是作为饲料添加剂。中草药添加剂作为一种绿色添加剂,不仅可解决长期困扰畜牧业发展的抗生素残留问题, 相似文献
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