伪狂犬病病毒Ea株gK基因的真核表达     

徐引弟  陈焕春  肖少波 《中国畜牧兽医》2009,36(11):57-59

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猪沙门氏菌病的诊断和预防控制     

郭爱珍  涂玲玲  陈焕春 《猪业科学》2009,26(12):40-41

猪沙门氏菌病是由沙门氏菌属细菌引起的以肠炎和败血症为特征的传染性疾病.及时准确的诊断和合理的预防控制能有效地降低该病造成的损失.本文主要就沙门氏菌的临诊诊断、病理诊断和实验室诊断以及预防控制做简要介绍.  相似文献   

胸膜肺炎放线杆菌apxⅡCA基因的克隆、表达及ApxⅡ-ELISA检测方法的初步建立   总被引：4，自引：2，他引：4  

徐晓娟  何启盖  徐高原  陈焕春 《中国兽医学报》2004,24(4):335-337

根据国外已发表的胸膜肺炎放线杆菌 (APP) Apx 的基因序列设计了 1对引物 ,从我国 APP武汉株扩增出约3.5 kb的 apx CA基因。测序结果表明 ,该基因的大小与国外已报道的 1型和 9型 APP的 apx CA基因大小一致 ,同源性达 99%。将该基因连接到原核表达载体 p ET- 17b,构建了原核表达质粒 p ET- apx CA,并在大肠杆菌 BL 2 1(DE3)中表达出了大小约 10 5 0 0 0的 Apx 蛋白。提取包涵体蛋白作为抗原包被 EL ISA酶标板 ,对已知阳性、阴性血清和临床送检血清样品进行了 EL ISA检测 ,从而为最终建立 Apx - EL ISA检测方法奠定了基础  相似文献   

RT-PCR快速诊断禽流感   总被引：10，自引：0，他引：10  

王贵华  金梅林  陈焕春 《中国预防兽医学报》2004,26(1):67-70

目前,禽流感检测方法较多,但均费时费力,且灵敏度不高.本研究立足于临床实际,选择A型流感病毒核蛋白(NP)基因序列保守区,设计了一对特异性引物,从临床病料中提取RNA,建立了一步法单管逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)快速诊断方法,该方法快速、灵敏,为RT-PCR用于禽流感的临床早期确诊和分子流行病学调查奠定了基础.  相似文献   

胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型标准抗血清的制备及初步临床应用   总被引：4，自引：0，他引：4  

陈凡  何启盖  陈焕春  刘正飞  张震亚  张迎  Ross Bowle  Pat Blackall 《中国预防兽医学报》2004,26(6):458-461

用十三种血清型的胸膜肺炎放线杆菌标准菌株免疫家兔,制备了标准抗血清,通过玻片凝集试验,琼脂扩散试验和免疫电泳试验,对抗血清的特异性、效价和保存期进行了监测,结果表明,制备的抗血清有较好的特异性,在4℃可以保存一个月、-20℃和、-80℃下保存一年无明显变化.用抗血清对从湖南,安徽,河南等地分离的胸膜肺炎菌株进行分型鉴定,分别为血清2,3,8型;而PCR检测均为阳性,说明抗血清可用于野生株的鉴定和流行病学调查.  相似文献   

应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法   总被引：13，自引：1，他引：13  

琚春梅  陈焕春  刘正飞  曹胜波  何启盖 《畜牧兽医学报》2004,35(6):689-693

根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820)，设计1对引物，并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板，扩增出含ORF2全基因的片段(709bp)，回收PCR产物，将其克隆入pMDl8-T载体，获得重组质粒pTORF2，并对其进行序列测定。重组质粒经Bal I和Sal I双酶切，回收ORF2基因，将其插入pGEX-KG的Sma I和Sal I位点间，构建原核表达质粒pGEXORF2，阳性重组质粒转化E．coli BL21(DE3)，进行原核表达。用此表达产物包被酶标板，建立EUISA诊断方法，并对临床676份送检血清进行了检测，结果表明其总阳性率为62．7％(424／676)，仔猪阳性率为38．9％(74／190)，肥猪阳性率为63．2％(84／133)，母猪阳性率为74．6％(249／334)，公猪阳性率为89．5％(17／19)。  相似文献   

猪伪狂犬病和传染性胸膜肺炎混合感染的诊断与防制     

王贵平  何启盖  刘军发  刘正飞  吴斌  陈焕春  石勇  冷光敏 《中国兽医杂志》2004,40(4):21-22

1　发病情况　某场存栏生产母猪 5 93头 ,2 0 0 2年 4月份产仔 347头 ,其中弱仔 4头 ,占 1.2 % ,木乃伊 18头 ,占 6 .95 % ,死胎 5 1头 ,占 14 .7%。新生仔猪一周龄内死亡 5 7头 ,占 16 .4 % ,断奶 (30天 )前死亡 81头 ,占 2 3.3% ,共计损失 2 11头。育成率为 39.2 %。母猪返情率 2 0 %。 2 0 %左右育肥猪发病 ,死亡 8头。2　临床症状　新生仔猪表现为被毛粗乱、体表苍白 ,精神委靡不振、消瘦、喘气、腹泻 ,拉黄色水样粪便 ,体温升高 (40～ 4 1.5℃ )。少数仔猪出现转圈、发抖、四肢呈划水状等神经症状。育肥猪呈犬坐式、腹式呼吸、喘气、体温升高 (39～ 4 2℃ ) ,全身发绀 ,严重的病猪口吐白沫、四肢呈划水状、鸣叫 ,最终衰竭而死亡。3　病理变化　现场共剖检了 6头仔猪 ,主要表现为 :濒死仔猪脑膜充血、肿胀和出血。鼻黏膜肿胀、出血 ,有黏液流出 ;扁桃体肿大、充血直至溃疡。气管内有大量的渗出液。肺脏呈紫黑或暗红色变化、水肿、充血 ,表面出现大小不一的灰白色的化脓灶 ,横切面出现血样泡沫 ;胸腔积液 ,...  相似文献   

猪传染性胸膜肺炎新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究   总被引：8，自引：2，他引：8  

刘建杰  陈焕春  何启盖  吴斌  李冲  徐晓娟  陈汉阳 《畜牧兽医学报》2005,36(2):177-180

利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ，提取表达产物包涵体，再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌，和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗，免疫BALB／c小鼠，间隔2周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素I、Ⅱ、Ⅲ的EuSA抗体和7型菌的血凝抗体，第2次免疫2周后用5LDso的猪胸膜肺炎放线杆菌1型、7型菌株进行攻毒。结果发现第2次免疫后抗体水平显著升高，用2种血清型进行攻毒后其保护力分别为83．3％和91．7％，从死亡小鼠的体内分离到了攻毒菌株，初步的动物试验表明此种新型亚单位菌苗对同型和异型的APP菌株具有较好的保护力，为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。  相似文献   

抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定   总被引：7，自引：2，他引：7  

陈美玲  陈焕春  黄红亮  琚春梅  宋云峰 《中国兽医学报》2005,25(6):567-569

利用本室构建的质粒PGEX-ORF2特化BL21（DE3）．经IPTG诱导表达．得到PCV2-ORF2的重组蛋白，经复性纯化后作为免疫原．采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与Sp2／0的骨髓瘤细胞融合．经间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选，获得了2株抗PCV2-ORF2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞．分别命名为382F4和9C3132，其细胞培养上清效价分别为1：1024、1：512，小鼠暖水效价分别为1：204800、1：102400。ELISA结果显示，382F4和9C3D2仅与融合表达的PCV2-ORF2蛋白反应，而与PGEX-KG表达的蛋白、猪细小病毒（PPV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）不反应．说明此2株单抗特异性好。间接免疫荧光结果显示．382F4和9C3D2能与PCV2发生反应，而不与PCV1发生交叉反应．表明所获得的2株单抗是PCV2型特异性的。这2株单抗的获得为进一步研究PCV2-ORF2基因的功能．及建立准确快速的鉴别PCV1和PCV2的诊断方法提供了强有力的手段。  相似文献   

猪细小病毒的分子生物学研究进展   总被引：10，自引：0，他引：10  

周锐  陈焕春 《国外兽医学(畜禽传染病)》1998,18(3):15-19

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