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犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其表达产物抗原性鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
参考GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列,用Oligo6．0软件设计一对特异性引物,从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA,经RT—PCR扩增得到1572bp的基因片段,将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDVN重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5a中,进行鉴定、测序。将目的基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDVN重组质粒,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。序列分析表明克隆的CDVN蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1572个核苷酸,与GenBank中发表的CDVN蛋白基因序列相比同源率达到93．9％～99．1％。Western-blotting分析显示表达产物为84kDa的融合蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的抗原性。 相似文献
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接种自生固氮菌对玉米根际土壤酶活性和细菌群落功能多样性的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为了探索玉米根际土壤微生态特征对接种自生固氮菌的响应机理,在盆栽实验条件下,研究了3株自生固氮菌褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum YCYS）、芸苔叶杆菌（Phyllobacterium brasssicacearum QL54）和类芽孢杆菌（Paenibacillus sabinae MX31）接种盆栽玉米（Zea mays L.）之后,玉米根际土壤酶活性和细菌群落功能多样性的变化。结果表明,接种自生固氮菌对玉米根际土壤酶活性和细菌群落功能多样性产生了一定的影响,而且不同自生固氮菌之间的接种效果有一定的差异。接种褐球固氮菌（A. chroococcum YCYS）和类芽孢杆菌（P. sabinae MX31）玉米根际土壤脲酶活性分别比对照高20.55%和9.58%。然而接种处理对玉米根际土壤碱性磷酸酶活性的影响差异不显著（P0.05）。BIOLOG结果显示,接种自生固氮菌可以提高细菌总代谢活性,其中接种褐球固氮菌（A. chroococcum YCYS）处理的AWCD是对照的1.8倍,并且细菌群落丰富度指数（R）显著高于对照（P0.01）。不同接种处理土壤根际细菌生理碳代谢优势群落结构不同。主成分分析（PCA）表明接种自生固氮菌可以调控根际土壤细菌群落功能多样性。 相似文献
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秦岭山区无机磷细菌筛选及其Biolog和分子生物学鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
为获得具有高解磷活性,可用于微生物肥料研制和生产的无机磷细菌菌株资源,采用平板溶磷圈法,从秦岭山区植物根际土壤样品中筛选获得3株高效无机磷细菌,命名为NO.9、NO.15、NO.17,根据钼锑抗比色法,培养5 d后,检测菌株发酵液,确定3株细菌的可溶性磷含量分别为98.12、80.37 mg/L和104.91 mg/L,微生物量磷含量分别为62.85、53.61、36.59 mg/L。生理生化特征、Biolog和16S rDNA鉴定结果表明,3株细菌均属于革兰氏阴性非肠道菌,NO.9菌株为Inquilinus ginsengisoli,NO.15菌株为醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus),NO.17菌株为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。 相似文献
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[目的]构建犬细小病毒(CPV)VP2基因真核表达质粒,为研究核酸疫苗奠定基础.[方法]根据CPVVP2基因序列设计特殊引物,采用PCR方法从疑似"犬细小病毒"的患犬粪便基因组中扩增VP2基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达VP2基因,8 h后取小白鼠肝脏提取总RNA,进行RT-PCR扩增.[结果]在病犬粪便基因组中扩增得到1 755 bp的VP2基因片段,并构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-VP2,从瞬时表达的小白鼠肝脏总RNA中可扩增到目的条带.[结论]成功构建了犬细小病毒VP2基因真核表达重组质粒,并在小白鼠体内进行了瞬时表达. 相似文献
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[目的]以期建立犬细小病毒巢式PCR诊断方法.[方法]根据基因库已发表的CPV VP2基因序列设计二对巢式引物,以临床上疑似CPV感染的犬粪样品中提取的总DNA作为模板,用巢式PCR方法扩增出CPV VP2基因的目的条带.[结果]扩增出的目的基因与国际标准序列的同源性为99.3;～ 100;.特异性试验发现该引物不能启动犬其它常见病毒基因的扩增.敏感性试验表明该引物能检测到10-9的CPV总RNA量.重复性试验显示该引物具有良好的稳定性.对采集的26份样品进行CPV巢式PCR检测,20份样品为阳性,阳性率为76.9;.[结论]建立的CPV的RT - PCR检测方法可于临床CPV的快速诊断和小规模的分子流行病学调查. 相似文献
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产气荚膜梭菌又称魏氏梭菌,是一种重要的人畜共患致病菌,可分为A、B、C、D、E型,在猪群中主要流行A、C型,A型主要产生α-毒素,产生肠毒血症,导致中、大猪的突然死亡; C型主要产生α、β-毒素,是造成仔猪红痢的主要病因。其普遍存在于人畜粪便、土壤、水、尘埃中,加之夏季高温高湿气候、雨水多等因素,加快了细菌、病毒繁殖扩散和传播速度,极易造成产气荚膜梭菌等一些自然疫源性疫病的流行。产气荚膜梭菌常与巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌混合感染,使病情更加严重。 相似文献
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紫穗槐种子萃取物对小菜蛾活性及毒理学初探 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究紫穗槐萃取物对小菜蛾的杀虫活性及毒理学作用,本试验采用浸叶法和栖息法测定了紫穗槐种子石油醚、乙酸乙酯、乙醇萃取物对小菜蛾的生物活性,并测定了各萃取物LC_(50)浓度处理下,小菜蛾谷胱甘肽S-转移酶和酯酶活力的影响。结果表明,3种紫穗槐提取物对小菜蛾二龄幼虫均具有胃毒活性,石油醚、乙酸乙酯、乙醇萃取物对小菜蛾的LC_(50)分别为0.768,0.928和2.738mg/mL,各萃取物LC_(50)浓度处理下可抑制小菜蛾幼虫的谷胱甘肽S-转移酶(抑制率最高可达59%),并可激活酯酶活力。表明紫穗槐种子石油醚及乙酸乙酯提取物对小菜蛾具有良好的胃毒活力,并能抑制酯酶活力,为杀虫剂的进一步开发利用提供理论依据。 相似文献
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为了提高犬细小病毒VP2基因在大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中的表达量,通过改变诱导温度、诱导时间及诱导剂浓度等条件对表达量产生影响,以SDS-PAGE电泳分析证明VP2基因蛋白表达的最佳条件,并通过Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱法纯化目的蛋白。结果表明,重组质粒E.coliBL21（DE3）在35℃,1.0 mmol/mL IPTG诱导6 h时条件下蛋白表达量最高。SDS-PAGE电泳检测的纯化目的蛋白约为90 kDa,与预计大小一致。VP2基因融合蛋白的优化表达和纯化为研究犬细小病毒亚单位疫苗奠定了基础。 相似文献
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放空排气是离心泵启泵前必不可少的操作步骤,离心泵在放空排气的过程中易出现油污喷溅、污油槽内污油及放空原油损耗量过大的问题。以新疆塔石管道某输油站为例,通过对其生产运行实际情况进行分析,得出放空原油损耗量过大的主要原因是排污导油槽深度过浅且长度过长、放空管道内含有气泡。调研了国内外离心泵启泵放空排气现状,依据离心泵的启动步骤及注意事项,基于该输油站现场实际情况,提出了改进措施:采用加装三通漏斗的方式可解决污油槽深度过浅且长度过长而造成的原油损耗;通过将放空管道的位置由离心泵侧方移至其后方(移动长度约47 cm),并将其与三通漏斗连接,能够避免因放空管道内存在气泡而造成的原油喷溅。经过实例验证表明,该方法可以有效降低离心泵启泵前放空原油的损耗,放空原油的单次损耗量由79 g降为0。改进措施操作简单、安全,可以满足现场实际需求,对优化及提高离心泵的整体性能具有重要的现实意义。(图3,表5,参20) 相似文献