浅谈如何做好农田水利建设施工过程中的水土保持工作   总被引：1，自引：1，他引：0       下载免费PDF全文

高立 《现代农业研究》2021,(11):41-42

可持续发展的理念和做法成为人类社会发展持续关注的焦点。随着人们环保意识的增强，越来越重视可持续发展，如何做好农田水利建设施工过程中的水土保持工作成为经济社会可持续发展必须要注重的环节。本文就农田水利建设施工中水土流失的危害和做好水土保持工作的重要性做出相关的讨论，并对如何做好农田水利建设水土保持工作提出一些粗浅的建议。  相似文献   

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株VP2基因突变对细胞嗜性改变的研究     

高立  祁小乐  高玉龙  高宏雷  秦立廷  邓小芸  李凯  王笑梅 《中国预防兽医学报》2010,32(10)

为研究鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV)细胞嗜性改变的分子基础,本研究通过定点突变、重叠延伸PCR(SOE-PCR)等技术,以vvIBDV HLJ-0504株为骨架构建了两组感染性克隆,并借助已建立的反向遗传操作技术进行病毒拯救。IFA检测、电镜观察及RT-PCR鉴定均显示:Q253H/A284T双点突变的pCAGGHLJ0504A889/980HRT和pCAGGHLJ0504BHRT共转染DF1细胞成功拯救出重组病毒(rHLJ0504HT),而未进行双点突变的pCAGGHLJ0504AHRT和pCAGGHLJ0504BHRT共转染组未获得重组病毒。上述结果表明,双点突变Q253H/A284T能使vvIBDV HLJ-0504适应非允许细胞CEF,但未进行Q253H/A284T双点突变的vvIBDV HLJ-0504不能感染非允许细胞CEF,因此,该研究表明VP2的Q253H/A284T两个氨基酸突变是vvIBDV细胞嗜性改变的分子基础。  相似文献   

禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备     

李凯  高宏雷  祁小乐  高玉龙  高立  邓小芸  王笑梅 《中国预防兽医学报》2010,32(10)

为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。  相似文献   

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株HLJ-0504 VP5基因缺失株感染性克隆的构建及鉴定     

高立  祁小乐  秦立廷  高宏雷  高玉龙  李凯  王永强  王笑梅 《中国兽医寄生虫病》2010,18(2):1-7

利用体外定点突变技术,缺失vvIBDV HLJ-0504株VP5基因,通过多重PCR在基因组两端分别引入锤头状核酶序列（HamRz）和丁肝病毒核酶序列（HdvRz）。将带有核酶序列的IBDV基因组插入载体pCAGGs的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV感染性克隆pCAGGHLJ0504A△VP5HRT,将该感染性克隆与pCAG—GHLJ0504BHRT共转染DF—Ⅰ细胞。IFA,RT—PCR,电镜观察均显示获得重组病毒,将其命名为rHLJ0504HT△VP5。vvIBDVVP5基因缺失感染性克隆的成功构建为我们利用反向遗传操作技术快速致弱vvIBDV,构建IBD的候选疫苗株奠定了基础。  相似文献   

14株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征   总被引：1，自引：0，他引：1  

邓小芸  祁小乐  高玉龙  秦立廷  高立  吴关  王永强  高宏雷  王笑梅 《农业科学与技术》2011,(12):1954-1957

[目的]研究十四株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征。[方法]对分离于我国不同商品蛋鸡场的14株REV的表面囊膜基因gp90进行了扩增和序列测定。[结果]序列分析表明,这14株REV不同于我国早期分离毒株与亚型3毒株亲缘关系较近。另外发现,这14株REV与美国和我国台湾的流行毒株同源性较高。[结论]本研究对深入研究我国REV的流行和遗传演化意义重大。  相似文献   

J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达     

徐延伟  高宏雷  高玉龙  李凯  高立  秦立廷  祁小乐  王永强  王笑梅 《中国畜牧兽医》2012,39(4):42-46

为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经Sal Ⅰ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40 mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选     

王念  陈玉明  张礼洲  高立  卢珍  高玉龙  王永强  高宏雷  刘长军  崔红玉  王笑梅  祁小乐 《中国畜牧兽医》2015,42(2):317-323

VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白与宿主细胞的相互作用,本研究将IBDV VP4基因克隆入pGBKT7,构建诱饵载体pGBGtVP4,自激活试验证明其无自激活活性,对酵母细胞没有毒性。运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)文库中筛选VP4的互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得22个候选互作宿主细胞蛋白,为深入研究IBDV VP4与宿主互作的效应和机制奠定了基础。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒超强毒株衣壳蛋白的可溶性表达、纯化与活性分析     

高祥  李辉  张礼洲  卢珍  王永强  高立  吴甜甜  高玉龙  刘长军  王笑梅  祁小乐 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2096-2102

为获得高质量的病毒衣壳蛋白VP2,本研究克隆了传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）超强毒株Gx的VP2基因,并亚克隆至载体pCold-Ⅰ,进而获得重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-GxVP2,在Transetta（DE3）工程菌中优化条件进行IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达,运用Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤两种技术串联的方法进行蛋白纯化,运用单克隆抗体介导的Western blotting技术鉴定纯化蛋白的特异性,免疫SPF鸡鉴定纯化蛋白的免疫活性。结果显示,在冷休克条件下,IBDV衣壳蛋白VP2在Transetta（DE3）工程菌中实现了可溶性表达;通过纯化获得了高纯度的VP2,浓度为542 μg/mL;该蛋白不仅能与VP2单克隆抗体特异性反应,还能刺激鸡产生特异性免疫应答,具有良好的免疫活性。本研究在IPTG为1 mmol/L,15℃、120 r/min,诱导时间为24 h的条件下,实现了有免疫活性的IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达和纯化。高纯度、可溶、具有功能活性的衣壳蛋白的制备,为深入开展IBDV致病机制研究奠定了基础。  相似文献   

浠水县优质中稻品种大田比较试验分析     

高立  乐向荣  黄大明  范旭东  陈曼菲 《农业与技术》2018,(10)

为了突出优势作物和特色作物,引领产业发展方向;要积极与粮食绿色增产行动有效对接,充分展示新品种的优良特性和生产潜力;要积极与科研育种单位、种子企业和新型经营主体进行合作,强化技术支撑,增强新品种展示试验的影响力、带动力。浠水县于2017年引进一批产量高、米质优的品种,进行了大田比较试验。  相似文献   

适于板料激光冲击成形的弹塑性本构模型   总被引：1，自引：0，他引：1  

高立 《农业机械学报》2006,37(11):129-132

基于几种经典的弹塑性本构模型理论,利用ABAQUS软件对TA2板料进行了激光冲击的仿真研究,并做了冲击试验。比较试验和仿真结果,以期找到板料在激光冲击的高应变率情况下,表征材料力学性能的本构模型。结果表明,硬化行为和应变率效应对板料激光冲击下变形有比较显著的影响,基于Johnson-Cook本构模型的仿真结果与试验结果最为接近。  相似文献