副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的分段表达及其免疫原性分析     

辛伟  李郁  黄晓慧  魏建忠 《畜牧兽医学报》2011,42(12)

本研究旨在获得副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物(TbpA),并对其免疫原性进行分析鉴定.采用生物信息学方法预测HPS的TbpA抗原表位,根据GenBank上发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成3对引物,用PCR从安徽省HPS分离株(LJ3) tbpA中分段扩增出tbpA1、tbpA2和tbpA3,并连接到pET-32a(+)载体上,经BamH Ⅰ和EcoRⅠ双酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,进行IPTG诱导表达.利用SDS-PAGE检测目的蛋白,Western blotting分析重组蛋白的免疫活性;通过小鼠免疫攻毒保护试验和血清杀菌力试验,鉴定重组蛋白的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力.结果表明,从HPS(LJ3)tbpA中扩增出与预期设计的1140、897、666 bp大小相符的3个片段(tbpA1、tbpA2、tbpA3),扩增产物连接载体得到重组质粒,在大肠杆菌中实现表达,获得大小为62、54、44 ku的目的蛋白(rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3),均能与HPS阳性血清反应.rTbpA1与甲醛灭活菌体对小鼠免疫攻毒的保护率分别为20％和40％,但rTbpA1引起小鼠平均死亡时间显著延迟,兔抗rTbpA1与兔抗HPS(LJ3)血清具有同样显著的杀菌活性.结果显示,成功表达的rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3均具有良好的反应原性,其中rTbpA1更具有良好的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力,可望成为副猪嗜血杆菌病疫苗和血清学检测的候选成分.  相似文献   

安徽省正阳关鸡场鸡球虫感染情况调查   总被引：4，自引：0，他引：4  

魏建忠  汪义娟等 《安徽农业大学学报》2002,29(4):380-382

对安徽省正阳关鸡场200个粪样采用饱和白糖溶液漂浮法进行鸡球虫感染情况的调查,结果表明:肉鸡球虫感染率为46.1%(83/180),而肉种鸡球虫感染率为70.0%(14/20).所获虫种经鉴定为堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)和毒害艾美耳球虫(E.necatrix).用SAS系统对调查数据进行统计分析,肉鸡球虫感染率存在年龄差异,相同日龄肉鸡毒害艾美耳球虫感染率显著低于其他几种球虫.  相似文献   

源自合肥地区表观健康鸡的沙门氏菌耐药性与血清型、 基因型相关性分析     

王元兰  刘军军  邵颖  方艳红  魏建忠  王桂军  孙裴  李郁 《安徽农业大学学报》2013,40(4):540

为了解源自合肥地区表观健康鸡的沙门氏菌耐药性及其与血清型、基因型的相关性,在前期已鉴定血清型和ERIC基因型的基础上,采用K-B纸片法对21株沙门氏菌分离株进行21种抗生素药物敏感试验,利用PCR技术对耐药菌株进行32种耐药基因检测。结果显示,总耐药率为100%（21/21）,耐2种以上抗生素的菌株占76.19%（16/21）,多重耐药谱为青霉素-氨苄西林-阿莫西林-链霉素-复方新诺明,其中耐受β-内酰胺类抗生素的类别最多,耐药率最高达100%（21/21）。21株沙门氏菌均检出耐药基因,涉及bla_PSE、sul1、strA、bla_TEM、sul2、tetA、tetB、aph3-Ⅱa和catⅠ 9种,其中bla_PSE基因的检出率最高,为85.7%（8/21）。可见源自合肥地区表观健康鸡的沙门氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药性最强,与其携带bla_PSE基因有关;耐药表型测定结果与耐药基因检测结果基本一致;耐药性与具有相同来源的同一血清型、基因型相关。  相似文献   

猪丹毒丝菌SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立和评价     

姚焱彬  汪宗梅  殷一凡  李娟  孙裴  魏建忠  李郁 《中国预防兽医学报》2018,(3)

为建立猪丹毒丝菌的快速检测方法,本研究根据猪丹毒丝菌荚膜多糖的保守区域设计特异性引物,通过优化反应体系建立了检测猪丹毒丝菌SYBR Green I荧光定量PCR方法。并对人工感染小鼠和临床病例样品进行检测。结果显示,质粒标准品在5.52×10~8拷贝/μL～5.52×10~2拷贝/μL范围内呈良好的线性关系;该方法与其它6种猪常见细菌均无交叉反应;最低可检测到20拷贝/μL的阳性质粒标准品,比普通PCR方法敏感性高100倍;批内和批间变异系数均小于3%。本研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、稳定性好,可以用于猪丹毒的早期诊断和生产实际中大批量临床样品的猪丹毒丝菌检测。  相似文献   

安徽省仔猪腹泻5种病毒感染情况的调查研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

秦谷雨  杨勇  李郁  魏建忠  孙裴 《动物医学进展》2012,33(12)

为了解安徽地区仔猪病毒性腹泻流行病学特点,对从安徽省37个规模化猪场采集腹泻仔猪的粪便或病死猪肠段共计186份,用RT-PCR和PCR技术进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(RV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)等5种病毒的检测.结果表明,PEDV阳性病料数占59.1％,阳性猪场占75.7％;TGEV阳性病料数占5.4％,阳性猪场占8.1％;RV阳性病料数占2.7％,阳性猪场占2.7％;PRV阳性病料数占8.1％,阳性猪场占21.6％;PCV-2阳性病料数占25.8％,阳性猪场占54.1％.PEDV与TGEV混合感染占4.3％,PEDV与PCV-2混合感染占18.8％,PEDV与PRV混合感染占10.8％,PRV和PCV-2混合感染占4.8％;其他病因50例,占26.9％.结果表明,PEDV、PCV-2 、PRV的单纯或混合性感染是近年安徽省仔猪腹泻的最为重要的3种病毒性病因,说明在今后的仔猪腹泻病防控过程中,应该着重加强对该3种疾病的综合防控.  相似文献   

禽巴氏杆菌病的研究进展     

吴忆春  魏建忠 《猪业科学》2003,20(10):40-41

本文从病原学、诊断与防制以及疫苗的研究等方面对禽巴氏杆菌病的最新研究进展做一综述。  相似文献   

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离及其N基因片段的克隆和测序   总被引：4，自引：0，他引：4  

魏建忠何长生  李郁吴忆春  王桂军朱启运 《中国兽医科技》2005,35(3):199-202

通过形态学观察、动物回归试验、鸡胚接种试验、病毒干扰试验以及血凝试验分离鉴定了1株肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)。在透射电子显微镜下，病毒粒子多呈球形，直径为80～120nm，有囊膜，表面有冠状突起。鸡胚连续盲传至第1～2代，开始出现死亡或出现侏儒胚；分离株可显著干扰NDV在鸡胚中的增殖；病毒尿囊液无凝血活性，但经5g／L胰蛋白酶处理后。能够凝集10mL/L的鸡红细胞。利用RT—PCR技术对分离株的N基因进行了扩增，经克隆、序列测定和分析比较，证实分离株为肾型IBV，命名为AH3—04株。  相似文献   

鸭疫里氏杆菌病研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

李春芬  李郁  魏建忠  张小飞  周勇岐  黄显明 《动物医学进展》2007,28(8):64-67

鸭疫里氏杆菌病是一种主要侵害雏鸭、雏火鸡等多种禽类的急性或慢性传染病.2周龄～7周龄雏鸭最易感,主要引起小鸭纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎,发病率为5%～90%,病死率高达90%.鸭疫里氏杆菌为革兰氏阴性、不运动、不形成芽孢、无鞭毛的小杆菌,有21个血清型,且各血清型缺少交叉保护.鸭疫里氏杆菌病已成为危害养鸭业最为严重的细菌性疾病之一,造成了巨大的经济损失.文章对鸭疫里氏杆菌生物学特性、实验室诊断、血清型鉴定和疫苗免疫方面进行了较为系统的综述.  相似文献   

应用PCR快速检测鸭疫里默氏杆菌的研究     

李春芬  李郁  魏建忠  张小飞  黄显明 《中国家禽》2008,30(1):18-20

根据鸭疫里默氏杆菌（RA）16SrDNA基因序列设计引物,对1株RA阳性株、9株临床分离鉴定的RA、3株大肠杆菌、1株多杀性巴氏杆菌和1株沙门氏菌进行PCR扩增,结果所有RA均出现643bp特异性扩增条带,其余非RA则均未扩增出特异性条带,表明该对引物及建立的PCR具有很强的特异性。优化的PCR反应体系能检出RA的最低DNA量为20pg。菌落直接PCR是增强RA快速检测鉴定的手段。应用PCR对病料组织直接进行RA检测,脑组织为首选检测对象,具有良好的实际应用意义。  相似文献   

猪源肠外致病性大肠杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立     

程家园  李亮  邢刚  刘雪兰  孙裴  魏建忠  李郁 《养猪》2022,(2):89-94

利用制备的猪源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)全菌体蛋白建立一种检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法.将2株猪源ExPEC SDjie18-10(O38)、HByan18-2(O127)超声裂解的全菌体蛋白作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立检测猪源ExPEC抗体的间接ELISA方法,并进行临床应用与评价.该方...  相似文献