基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究     

陈伟业  葛金英  肇慧君  胡森  温志远  曹文雁  王喜军  黄克和  步志高 《畜牧兽医学报》2008,39(1):123-128

为了探索并建立快速、敏感、准确的Ⅰ型干扰素生物学活性定量分析方法,本研究克隆了鸡Mx启动子（Mxp）,并在其下游连接荧光素酶（Luciferase,luc）报告基因,构建鸡Ⅰ型干扰素活性检测质粒pMxp-luc。以pMxp-luc瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,24 h后用鸡IFN-α/β处理细胞,结果荧光素酶基因在Mx启动子的作用下获得转录表达;荧光素酶的表达量与干扰素的抗病毒活性有着良好的线性相关性,并在干扰素处理细胞6 h后就可以检测;对鸡IFN-α和IFN-β检测的敏感性分别约为抗病毒活性定量检测方法的10和100倍。该检测系统与传统抗病毒定量检测方法相比,具有快速简便、准确敏感、便于高通量检测等优势,在禽类乃至哺乳动物干扰素生物学基础和应用研究及产业化过程中具有重要应用价值。  相似文献   

上海地区奶牛产后低钙血症及酮病发病率调查     

边四辈  黄克和 《中国畜牧杂志》2018,(1)

本研究对上海地区9个牧场奶牛产后低钙血症和酮病的发病率进行了调查,结果表明:奶牛产后12 h内的低钙血症发病率平均为86.1%,血钙平均浓度为(1.82±0.02)mmol/L,产后3~7 d低钙血症发病率平均为35.2%,血钙平均浓度为(2.05±0.01)mmol/L,表明随着泌乳天数的增加,低钙血症有缓解趋势。奶牛产后12 h内酮病发病率平均为5.5%,血液β-羟丁酸(BHBA)平均浓度为(0.68±0.04)mmol/L,产后3~7 d酮病发病率平均为16.3%,血液BHBA平均浓度为(0.98±0.07)mmol/L,表明随着泌乳天数增加能量负平衡有加重趋势。奶牛产后12 h内高游离脂肪酸(NEFA)发生率平均为49.4%,血液NEFA平均浓度为(0.76±0.03)Meq/L,产后3~7 d高NEFA发生率平均为41.3%,血液NEFA平均浓度为(0.71±0.03)Meq/L,表明泌乳初期高NEFA发生率远高于酮病发病率,随着泌乳天数增加血液NEFA浓度有下降趋势。奶牛产后血液中钙的浓度与NEFA浓度呈极显著负相关(P0.01),血液中NEFA浓度与BHBA浓度呈极显著正相关(P0.01)。  相似文献   

猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法的建立     

潘群兴  何孔旺  段治涛  黄克和 《江苏农业学报》2007,23(6):588-592

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列设计特异性引物,进行PCR反应,回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,再定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta,进行原核表达.表达产物经His-Bind蛋白纯化试剂盒纯化,平均浓度为1.10 mg/ml.以1.8 μg/ml蛋白包被酶标板,建立ELISA检测方法.建立的ELISA方法与北京世纪元亨公司试剂盒比较,两者检测结果符合率达85%以上.用该方法对常州某猪场36份母猪和156份10～160日龄猪群血清样品进行了检测,检测结果显示母猪阳性率为81.4%,仔猪阳性率随着日龄的增加而逐渐降低,之后由于受PCV-2的感染,阳性率逐渐升高.本试验建立的ELISA方法,具有较好的特异性、重复性和敏感性,可用于猪群PCV-2抗体的大规模检测.  相似文献   

重叠片断PCR方法构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ C突变载体pBSCA(-)     

焦淼  黄克和  王贵平  李春玲 《江苏农业科学》2007,(5):133-136

通过PCR克隆得到了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型完整的apxⅡC基因和部分apxⅡA基因约2 000 bp,通过重叠片段PCR方法使apxⅡC基因缺失,并将该DNA片段克隆到PBS-T载体中构建了apxⅡC基因失活的转移载体pBSCA(-),为构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清I型apxⅡC缺失菌株打下基础。  相似文献   

肿瘤型马立克氏病临床病例的自由基生物学研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

黄克和  陈万芳 《南京农业大学学报》1995,18(2):90-94

本文报道了肿瘤型马立克氏病（ＭＤ）鸡血清、全血或组织中的总超氧化物歧化酶（Ｔ－ＳＯＤ）、锰超氧化物歧化酶（Ｍｎ－ＳＯＤ）、铜锌超氧化物歧化酶（ＣｕＺｎ－ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）牧谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活性以及血清丙二配合（ＭＤＡ）含量。统计结果表明，与健康鸡相比，肿瘤型ＭＤ鸡血清中Ｔ－ＳＯＤ、Ｍｎ－ＳＯＤ与ＣｕＺｎ－ＳＯＤ活性以及红细胞中的ＣＡＴ活性均极显著降低（Ｐ＜０．０１）；肿  相似文献   

不同含水率对奶牛TMR发酵过程中饲料品质的影响     

徐晓明  黄克和  徐国忠  张克春 《上海交通大学学报(农业科学版)》2011,29(1):81-87

试验研究不同含水率(40%、45%、50%、55%和60%)奶牛TMR发酵过程中饲料品质的动态变化.试验将不同含水率(40%、45%、50%、55%和60%)TMR装入发酵袋(28 cm×42cm)内抽真空后保存室内,第0d、第2d、第4d、第8d、第16d、第32d和第70d开袋后进行感官评定、营养物质含量和发酵指标...  相似文献   

高钙与高蛋白日粮诱发鸡痛风的尿液临床病理学研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭小权  黄克和  唐建霞 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2005,26(4):8-11

将120羽35日龄伊沙蛋鸡随机均分为对照组、高钙组、高蛋白组和高钙高蛋白组,进行30d的饲养试验。50日龄时测定分析鸡的尿液和尿沉渣。结果表明：高钙高蛋白组鸡发生了典型的内脏型痛风;与对照组和高蛋白组相比,高钙组和高钙高蛋白组鸡尿量显著增加,尿液pH值升高,尿液中钙、钠、钾和镁相对含量和24h尿钠总量显著降低;高钙组和高钙高蛋白组鸡尿液中尿酸、钙、无机磷、钾和镁的24h总量和高蛋白组尿液无机磷的相对含量以及尿酸和无机磷的24h总量显著高于对照组;对照组和高蛋白组鸡尿沉渣以球状晶体居多;高钙组鸡尿沉渣中以针状晶体较多;高钙高蛋白组鸡尿沉渣中针状及球状晶体含量相当。与对照组相比,高钙组尿沉渣中钙、磷含量升高,而钾、钠和镁含量均下降;高蛋白组和高钙高蛋白组尿沉渣中磷含量升高,而钙、钾和钠含量均下降。  相似文献   

伪狂犬活/灭活病毒接种小鼠诱导免疫效力及差异因子比较     

章晨昕  于晓明  侯立婷  张元鹏  乔绪稳  侯继波  黄克和  郑其升  陈瑾 《南京农业大学学报》2023,(1):106-111

[目的]本研究旨在比较活/灭活病毒进入体内后对免疫系统活化的差异，为免疫增强剂的筛选和评价建立高效动物模型。[方法]本试验利用伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株建立小鼠伪狂犬人工感染模型，筛选活/灭活病毒接种小鼠后免疫相关差异因子。将PRV Bartha-K61活毒以不同剂量、不同方式感染小鼠，通过计算小鼠存活率确定最佳感染剂量与感染方式；将筛选的最佳剂量的伪狂犬病毒活毒与相同剂量下灭活病毒按照前述筛选的最佳感染方式接种小鼠，利用ELISA试剂盒检测免疫7 d后小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IFN-β和IL-6水平；利用PRV gB ELISA检测免疫7 d后小鼠血清PRV特异性gB抗体水平；利用灭活PRV作为特异性抗原进行淋巴细胞增殖试验并计算各组淋巴细胞刺激指数(SI)。[结果]在保证小鼠存活的前提下，6～8周龄小鼠的PRV的安全感染剂量为5×10⁴ TCID50;同等剂量下，相比于肌肉和腹腔注射，皮下注射为最安全的感染方式；同等剂量的活毒和灭活病毒接种小鼠后，与灭活病毒组相比，活病毒感染7 d后小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IFN-β水平显著...  相似文献