CELO病毒fiberl基因部分片段的原核表达及抗原性鉴定     

王凤雪王云峰  智海东王玫 童光志 《中国兽医科技》2005,35(6):468-471

根据鸡胚致死孤儿(CELO)病毒Phelps株的fiberl基因(GenBank序列号u46933)序列设计了1对引物，采用PCR扩增CELO病毒fiberl基因C端(包含Knob—S区)的部分片段，并将其克隆到质粒表达载体pGEX-6P—1，获得的阳性克隆命名为pGEX—AF807。序列分析表明，所获得的DNA片段核苷酸序列与CELO病毒Phelps株的fiberl基因序列完全一致。将pGEX—AF807转化大肠埃希氏菌DH5a，经37C、0．6mmol／L IPTG诱导表达5h，SDS—PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀。结果显示，目的蛋白以包涵体形式存在，蛋白分子质量约为54．6ku，目的蛋白量占菌体总蛋白的35．7％。用CELO病毒多克隆血清做Western blotting试验，结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。  相似文献   

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护作用   总被引：10，自引：2，他引：8  

田占成  孙永科  王云峰  智海东  刘胜旺  孙惠玲  王玫  童光志 《畜牧兽医学报》2006,37(6):580-586

将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IBVS1)以5×106PFU剂量翅皮下注射接种4周龄的SPF鸡。血清抗体检测表明,该重组鸡痘病毒能刺激鸡体产生特异性抗体,外周血液中CD4 、TCRγδ T淋巴细胞比例显著高于对照组,而CD8 T淋巴细胞比例低于对照组。免疫后4周用1×103.0EID50的传染性支气管炎病毒LX4株进行攻毒,结果表明,重组鸡痘病毒免疫组与IB弱毒疫苗免疫保护率分别为12/16和13/16;攻毒后喉拭子IBV分离结果表明,IB弱毒疫苗和重组鸡痘病毒免疫组的IBV气管排毒时间比对照组缩短了2 d,病毒的分离率显著低于对照组;肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾和肝脏的病理损伤也较对照组轻,而且病变持续时间缩短。  相似文献   

禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定     

石星明  张晶  赵妍  王玫  魏秀英  胡顺磊  全炎铭  闫帅  崔红玉  王云峰 《畜牧兽医学报》2011,42(9)

为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株.经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8.2株细胞培养上清的效价均在1:4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上.亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为k链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性.利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100％和90％.作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础.  相似文献   

林地香菇覆土栽培技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

王文治  张志军  刘连强  周永斌  王玫 《天津农林科技》2007,(3):15-17

本文主要根据天津市气候特点介绍林地覆土栽培香菇的技术要点,包括栽培季节、品种选择、培养料配方、灭菌接种、菌丝培养、覆土转色、覆土出菇管理等。  相似文献   

灵芝设施化栽培关键技术   总被引：2，自引：0，他引：2  

周永斌  张志军  訾惠君  刘连强  王玫 《天津农业科学》2010,16(1):65-67

对设施大棚下袋料栽培灵芝的生产工艺,特别是关键技术环节进行了较为详尽的阐述。  相似文献   

传染性造血器官坏死病毒毒株核蛋白基因片段的克隆及序列分析     

韩硕  赵前程  吴斌  李叶  王玫 《大连水产学院学报》2011,26(3):232-237

利用RTG～2细胞对传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的敏感性对IHNV-DL进行扩增,采用TR—Izol法提取病毒RNA,用IHNV核蛋白基因的一对通用引物进行RT-PCR扩增,将扩增出的一条786bp的基因纯化、克隆至pMD18－T载体中进行序列测定,并与国内外已公布的病毒核蛋白基因进行比对和分析。结果表明：此病毒的核酸序列与标准毒株RB－1、代表毒株WRAC的同源性分别为96．3％和93．6％;翻译出的氨基酸序列与标准毒株RB－1、代表毒株WRAC的同源性分别为96．1％和93．5％。系统进化树分析结果表明,此毒株与中国近期公布的毒株zyx有密切的亲缘关系。  相似文献   

中国海洋生态补偿机制研究     

居占杰  王玫 《河北渔业》2015,(3):55-59

协调海洋开发与保护,维持海洋生态平衡,实现海洋经济的可持续发展,迫切需要用生态系统方法对海洋活动进行综合管理。本文从海洋生态补偿机制的概念入手,运用生态系统方法构建了生态补偿机制的运行框架,并审视了我国在海洋生态补偿机制方面存在的诸多问题,提出了完善我国海洋生态补偿机制的具体措施,为解决海洋生态补偿问题提供了理论指导。  相似文献   

表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定     

闫帅  崔红玉  李巧玲  赵妍  石星明  赵晓岩  胡顺磊  王玫  高明  李越  王云峰 《中国预防兽医学报》2012,(6):423-427

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。  相似文献   

万寿菊生物熏蒸对连作苹果幼苗和土壤微生物的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

王晓芳  徐少卓  王玫  段亚楠  王海燕  盛月凡  毛志泉 《土壤学报》2018,55(1):213-224

以苹果(平邑甜茶)幼苗为试验材料,盆栽条件下以万寿菊植株风干粉末拌土熏蒸老苹果园土壤,为环境友好型熏蒸措施防控苹果连作障碍提供理论依据。试验设置老龄苹果园土壤对照(未作处理,CK)、覆膜(未拌入万寿菊,F)、万寿菊1.5 g kg~(-1)+覆膜(1.5T+F)、万寿菊6.0 g kg~(-1)+覆膜(6.0T+F)、万寿菊15.0 g kg~(-1)+覆膜(15.0T+F)。结果表明,与对照相比,万寿菊生物熏蒸处理能显著提高连作土壤中平邑甜茶幼苗的生物量,促进根系生长,提高土壤酶活性,土壤真菌减少、细菌增多。6.0 g kg~(-1)处理的效果最明显,幼苗地上部及根系干重分别为对照的8.1倍、13.1倍,根表面积及根体积分别增加了333.0%、548.4%;脲酶、磷酸酶活性分别较对照高103.6%、77.6%,蔗糖酶活性高出200.4%,过氧化氢酶活性升高64.6%;土壤细菌/真菌比值为219.9,是对照的5.6倍;真菌多样性、均匀度和丰富度指数均降低,优势度指数增加;层出镰孢菌基因拷贝数较对照降低57.9%。主成分分析(PCA)结果显示,万寿菊生物熏蒸处理对连作土壤真菌群落多样性有显著影响,能够显著减少层出镰孢菌的数量。综上,连作土壤中添加6.0 g kg~(-1)万寿菊进行生物熏蒸可提高连作平邑甜茶幼苗生物量,改善连作土壤环境,有效缓解平邑甜茶的连作障碍。  相似文献   

我省将从美国引进鲑鱼孵化设备     

王玫 《黑龙江水产》1987,(4)

为增殖我省大麻哈鱼资源,农牧渔业部根据国家计委的批准,今年下达了在我省建设一处鲑鱼孵化放流站的计划,现在正在筹建中,需要引进先进的孵化设备与技术。省水产总公司根据省政府领导的指示,以副经理崔明时为团长,组成了一行四人的鲑鱼孵化设备与技术考察组,于1987年8月  相似文献