菜豆普通花叶病毒长豇豆分离物外壳蛋白基因的序列分析及原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑红英  陈炯  程晔  陈剑平  侯明生 《植物病理学报》2003,33(1):95-96

 根据普通生物学和血清学特性,长豇豆病毒病的病原被鉴定为黑眼豇豆花叶病毒(Blackeye cowpea mosaic virus,Bl CMV)、豇豆蚜传花叶病毒(Cowpea aphidborne mosaic virus,CABMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus,CMV)。  相似文献   

优势高产蔬菜生产的关键技术——科学施肥 第七讲 蔬菜营养缺乏和过量障碍的诊断与防治     

田吉林 《上海蔬菜》2003,(3):46-47

同其它高等植物一样 ,蔬菜正常生长发育需要按一定比例吸收利用 16种必需营养元素 ,这些必需营养元素在植物体内具有各自独特的无可替代的生理功能 ,当土壤中缺乏某种必需元素或土壤本身不缺乏 ,但植物吸收不足时 ,会造成植物体内一系列物质代谢和运转的障碍 ,严重时可在外观形态上表现出一些特殊症状。同样 ,某种元素过量 ,造成植物体中毒时 ,也会出现形态异样症状。一般也把营养缺乏和过量造成的植物生长发育异常叫生理性病害。营养诊断是生理病害防治的前提 ,而在诸多的营养诊断方法如土壤分析、植株诊断、组织诊断、代谢诊断和外观形态…  相似文献   

家禽DNA疫苗研究进展(下)     

张小荣  焦新安 《中国家禽》2004,26(1):31-33

5影响DNA疫苗免疫应答的因素5.1载体本身的因素对于载体本身而言,启动子强弱是决定免疫应答强度的最主要因素。由于DNA疫苗载体由细菌质粒DNA衍生而来,而细菌的DNA中富含CpG基因序列,因此,载体序列中CpG基因序列的有无及数量多少也成了影响免疫应答的因素。此外,质粒的存在形式也可能会对免疫应答造成影响,例如仅有Schubbert的一篇研究报道表明,将NDVF基因克隆入CMV极早期启动子和鸡β肌动蛋白基因启动子的下游,构建NDVDNA疫苗,环状质粒DNA肌肉接种1周龄小鸡并不能诱导产生针对F蛋白的抗体,也没有任何保护效果,而线性化质粒D…  相似文献   

芽孢杆菌绿色荧光蛋白标记及其在小麦体表定殖的初探   总被引：17，自引：0，他引：17  

田涛  亓雪晨  王琦  梅汝鸿 《植物病理学报》2004,34(4):346-351

 将来自质粒pAD4412的启动子和绿色荧光蛋白基因gfpmut3a插入大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pBE2,构建成芽孢杆菌表达载体pGF P4412,用其转化野生型生防芽孢杆菌83-6和A-47等8个菌株,均得到良好的发光表型。质粒稳定性实验表明重组质粒pG FP4412稳定性为92%。借助荧光显微镜对gfp标记的菌株A-47-gfp在小麦体表的定殖进行初步的研究。结果表明:A-47-gfp能够在小麦根际及小麦体表定殖(包括根表和茎叶表面);相对于在茎叶表面定殖的A-47-gf p在根表定殖的菌体与根的结合更为牢固;从根基到根尖A-47-gfp的定殖量有明显的减少趋势。  相似文献   

秀丽纤杆线虫在寄生性线虫抗原研究中的应用     

韩春来  汪明 《中国兽医寄生虫病》2004,12(1):33-36

秀丽纤杆线虫 (Caenorhabditis elegans)是一种模式线虫 ,目前广泛应用于寄生性线虫基因的功能研究 ,并且还被用于捻转血矛线虫等寄生性线虫疫苗侯选抗原基因的表达和耐药性产生机制方面的研究  相似文献   

鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化   总被引：2，自引：0，他引：2  

贺云霞  王君伟  王立群  Ulrich Neumann 《中国兽医学报》2004,24(2):126-128

将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。  相似文献   

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化   总被引：4，自引：0，他引：4  

施振旦  邵西兵  方梅霞  于迎春  刘颖  陈楠 《中国兽医学报》2004,24(3):258-260

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右  相似文献   

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

宫强  刘思国  王牟平  王春来  彭永刚  沈国顺 《中国兽医学报》2004,24(4):340-342

以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础  相似文献   

鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用   总被引：4，自引：0，他引：4  

孙蕾  吴艳涛  张体银  陈素娟  刘秀梵 《中国兽医学报》2004,24(5):429-432

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景  相似文献   

鼠层粘蛋白α5链E3、LG4、LG5片段的克隆及表达     

孙兆增  张玉静  展德文  张艳宇  连继勤 《中国兽医学报》2004,24(5):467-469

从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80 0时仍为阳性  相似文献