猪传染性胃肠炎病毒南京株纤突S蛋白基因的克隆与序列分析     

张素芳  何孔旺  贾云  倪艳秀  华荣虹  赵玉军 《动物医学进展》2003,24(3):93-97

参考 Genbank收录的 TGEV- Miller株的基因序列 ,自行设计合成 1对引物 (TGEVP5 /P6 ) ,对不同代次的 TGEV疫苗弱毒 STC3及种毒 、种毒 进行了 RT- PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,均出现 1条大约 12 6 2 bp的目的条带 ,经 Eco R 酶切 ,都产生了 871bp和391bp左右的两个片段 ,与预期大小相符。将种毒 RT- PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18- T载体中 ,转化宿主菌 DH5 α,挑选阳性克隆 (命名为 PTs) ,提取重组质粒 ,用 Hpa 、Eco R 对重组质粒进行酶切鉴定以及 PCR扩增 ,然后进行序列测定 ,并进行了序列分析 ,证实与国外标准毒株 Miller、Fs772 / 70、Purdue、TO14等有较高的同源性  相似文献   

马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白D基因的分离克隆,定序及其在大肠杆…   总被引：1，自引：0，他引：1  

段玉友  殷震 《中国兽医学报》1997,17(6):544-550

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进行ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的Ｂａｍ ＨＩ－Ａ克隆中的Ａ  相似文献   

哺乳动物体细胞克隆研究进展   总被引：3，自引：0，他引：3  

马勇江  曹斌云 《中国牛业科学》2001,27(2):39-41

哺乳动物体细胞克隆技术是近年来才发展起来的技术，但体细胞克隆绵羊－多利的诞生却引起了世界轰动，充分显示了其重在的科学研究价值和潜在的应用价值。本文对哺乳动物体细胞克隆技术研究现状，理论基础研究，应用等方面作一综述。  相似文献   

耐盐碱高蛋白饲草新品--百腾鲁美     

周润健 《中国牧业通讯》2004,(6):69-69

近日 ,笔者从天津农学院植物细胞工程研究中心获悉 ,该中心以酸模植物为材料 ,利用植物细胞诱变克隆技术 ,培育出了耐盐碱高蛋白饲草新品种———百腾鲁美 ,经天津市科委专家委员会鉴定 ,其产量、品质、抗性等技术经济指标为国内领先水平 ,是一种适应性强、耐盐碱的高蛋白饲料作物。现由天津市百腾生物科技有限公司开发生产 ,已形成700公顷地的供种能力。据天津农学院农学系教授张磊介绍 ,这种牧草是一种高蛋白质饲料作物 ,富含18种氨基酸。在饲养动物的种类、青绿饲料供应时间、土壤及地域适应范围、耐盐碱能力、经济效益等方面 ,都远远超…  相似文献   

猪CD3∈分子的cDNA克隆与序列分析     

王建华  杨汉春  郭鑫  陈艳红  查振林 《中国兽医杂志》2005,(6)

应用RT-PCR和3′RACE技术,本研究从猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增克隆了猪CD3ε基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,猪CD3εcDNA序列长1241nt,其中5′非翻译区80nt,3′非翻译区570nt,开放阅读框591nt,该开放阅读框编码196个氨基酸残基的CD3ε前体蛋白(无糖基化位点);在猪CD3ε蛋白的胞外区,Cys49、Cys91、Cys108和Cys111为保守性氨基酸残基,它们与CD3ε免疫球蛋白样结构的形成有关。在猪CD3ε蛋白胞浆区,存在免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)、内质网潴留基序和1个SH3结合基序,其中ITAM基序含有2个SH2结合基序和2个潜在酪氨酸磷酸化位点Tyr177和Tyr188,这些基序是猪CD3分子参与T细胞活化信号转导和TCR-CD3复合体装配的结构基础。推导氨基酸序列分析结果表明,猪与人、鼠、狗、牛和绵羊CD3ε蛋白的氨基酸同源性分别为61.2%、58.7%、58.7%、65.1%和65.6%。  相似文献   

香蕉ACC氧化酶基因(MAO3)的克隆及其表达特性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

黄俊生  王华  张世清 《园艺学报》2005,32(5):807-811

 根据同源扩增得到香蕉(Musa acuminata) ACC氧化酶基因(MAO3) 的核心部分, 再通过3'和5'RACE扩增上、下游序列以及Genome-Walker的方法得到启动子部分, 共获得3 718 bp长度的序列。将所得结果进行聚类分析, 发现香蕉中ACC氧化酶的氨基酸序列非常保守, 各序列间的同一性高达99% ,与单子叶植物和双子叶植物中ACC氧化酶的氨基酸序列的同源性在66.7%～71.8%之间。组织原位杂交试验表明MAO3基因的表达具有组织特异性, 初步认为是在韧皮部筛管组织中特异表达。运用实时荧光定量PCR技术, 实时监测到了MAO3基因和香蕉乙烯受体基因ERS2受机械伤诱导的定量变化。  相似文献   

鸡肉质鲜味特性相关基因的克隆及序列分析     

苏一军  季从亮  陈国宏  秦洁  束婧婷  张学余 《中国家禽》2005,9(Z1):6-8

本研究对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因的cDNA进行了克隆,并对序列进行了分析,共发现有6处碱基突变249 G→A(TH)、717 C→G(TH)、985 A→G(TH)仅在泰和乌骨鸡中出现;992 T→C(RW)、1400 C→T(RW)仅在隐性白羽肉鸡中出现;而在泰和乌骨鸡和隐性白羽肉鸡中均检测到突变1179 A→C(TH,RW).其中985 A→G(TH)、1400C→T(RW)处突变导致两处氨基酸突变Thr→Ala(305)、Ala→Val(443),其它4处碱基突变均为同义突变.另外对几种脊椎动物Adsl基因核苷酸序列水平、蛋白质水平同源性进行了比较分析.  相似文献   

微小牛蜱Bm86基因的克隆及真核表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

李文卉罗建勋  刘磊党志胜  高金亮关贵全刘志杰  刘爱红马米玲  任巧云殷宏 《中国兽医科技》2005,35(2):124-128

为了克隆微小牛蜱Bm86基因及构建该基因的表达载体，以微小牛蜱饥饿幼蜱的破解物提取的总RNA为模板，参照已发表的微小牛蜱Bm86基因的核苷酸序列，设计了1对引物，采用RT—PCR技术获得微小牛蜱Bm86基因；将Bm86基因克隆入载体，并进行序列分析，结果证明，克隆的Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因序列的同源性达97．4％，而且该序列包含完整的开放阅读框。将该基因克隆入真核表达载体pPIC9K，构建并获得了重组真核表达载体pPIC9K—Bm86。  相似文献   

月季切花乙烯受体ETR1 cDNA克隆及其序列分析^*   总被引：6，自引：0，他引：6  

刘青林  白双义  欧阳青  屈浩  蔡文启 《园艺学报》2002,29(4):363-366

 根据乙烯受体基因ETR1 保守区设计引物, 分别以瓶插寿命差异显著的月季切花品种‘德克萨斯’和‘维亚蒂’为材料, 通过RT-PCR 从花瓣中扩增出了797 bp 的cDNA 片段, 它编码265 个氨基酸。测序和序列分析表明,‘德克萨斯’重组质粒中插入片段的核苷酸序列之间完全相同, 命名为pRT-ETR1。而‘维亚蒂’所获得的重组质粒中插入片段的核苷酸和氨基酸序列之间存在差异, 同源性分别为85. 2 %和92. 1 % , 分别命名为pRV-ETR1-V4 和pRV-ETR1-V5。pRV2 ETR12V5 的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT2 ETR1 的同源性均达99 %以上; pRV-ETR1-V4 中的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT-ETR1 的同源性分别为85. 0 %和92. 5 %。上述插入片段与桃、苹果、天竺葵、拟南芥等植物的ETR1相应区域高度同源, 其氨基酸同源性均大于90 %。  相似文献   

对鳞翅目害虫有活性的cry1C基因的克隆和表达   总被引：2，自引：0，他引：2       下载免费PDF全文

宋福平  张杰  韩岚岚  高继国  黄大昉 《植物保护学报》2003,30(2):161-165

在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上，构建了Btc001菌株质粒DNA HindⅢ片段的文库，并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCIR-RFIP)方法筛选出含有crylC6全长基因的13．5kb大片段，酶切分析得到该片段的物理图谱，BamHI和EcoRI切完成了6．5kb含全长基因的亚克隆，并对这条6．5kb片段亚克隆、测序，序列在国际核酸序列数据库(GenBank)登记(AY007686)，并由Bt杀虫晶体蛋白基因国际命名委员会命名为cry1Cb2基因。根据序列设计了一对用于扩增全长基因的引物S581CB和S381CB，扩增产物插入表达载体pET-21b中，诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达。表达产物对小菜蛾(Plutella xylostella)表现出较高活性，LC50达到7．9μg/ml。  相似文献