表达鸡α干扰素重组酿酒酵母菌的构建与鉴定     

杜伟立  尹美辰  杨理凯  张涛  王令  路宏朝 《动物医学进展》2017,38(9)

通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基因插入真核表达载体,通过菌落PCR和DNA测序确定目标载体,构建成功后转化至酿酒酵母AH109,再通过营养缺陷培养、质粒提取和PCR鉴定带JMB440-ChIFN-α载体的重组酵母菌株。最终通过酵母培养、总蛋白收集、SDS-PAGE电泳和Western blot等,确定鸡α干扰素基因能够与酵母菌株重组,并表达α干扰素,蛋白条带大小约为23ku,与预期结果一致,表明成功构建了表达鸡干扰素基因的工程酵母菌株。  相似文献   

甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究     

陈利平  陈平华  陈忠伟  王恒波  许莉萍  刘迪  高三基  郭晋隆  陈如凯 《热带作物学报》2016,37(1):99-106

甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。  相似文献   

2种侵入型乳酸菌生物学特性的研究     

曾扬  尹文巧  高可丽  李鼎伟  刘晶  杨玉莹 《中国畜牧兽医》2021,48(10):3823-3833

本研究旨在选择性能优良的乳酸菌表达载体，为后期研发新型乳酸菌活菌疫苗奠定基础。试验对诱导型和组成型表达的2种侵入型乳酸菌NC8-pSIP409-FnBPA和NC8-pLc23-FnBPA的生物学特性进行研究，从酸耐受性、胆盐耐受性、生长曲线、质粒稳定性、抑菌试验以及药敏试验这6个方面进行鉴定。结果表明，这2种乳酸菌在pH为2.5的酸应激条件下，存活率均达到125%，在质量分数为0.5%的高胆盐溶液中，存活率高达200%。2种类型的乳酸菌均能在9 h时达到平台期，生长性能优良，其中组成型表达菌株NC8-pLc23-FnBPA达到平台期时的D_{600 nm}值为1.3，高于诱导型表达菌株，生长性能优于诱导型菌株。pH生长曲线结果表明，乳酸菌产酸性能无明显性差异，在10 h时，溶液中的pH均降为3.5，产酸能力较强。2种类型乳酸菌的菌体和上清对常见致病菌均有不同程度的抑菌作用，其中菌体的抑菌效果优于上清，且表达FnBPA蛋白的组成型菌体的抑菌效果强于诱导表达型。2种侵入型乳酸菌均对绝大多数的抗生素敏感性高，具有一定的生物安全性。2种类型的乳酸菌的质粒稳定性均>90%。本试验发现诱导型乳酸菌NC8-pSIP409-FnBPA与组成型乳酸菌NC8-pLc23-FnBPA具有相似的生物学特性，其中组成型乳酸菌表达蛋白更方便，无需添加诱导肽便可自主表达，更适合作为新型乳酸菌活菌疫苗的受体菌株，为后期乳酸菌活菌疫苗的研制提供便利。  相似文献   

鸡群发生腺病毒Ⅰ群感染的原因分析     

付功杰 《畜牧兽医科技信息》2021,(3):188-188

禽腺病毒Ⅰ群感染自2012年在我国首次报道至今,各地都有大面积流行发生,给养殖户造成了不小的经济损失。追踪发现,未免疫鸡群发病比免疫鸡群的发病死亡率高、造成损失较大。1未免疫鸡群发病特点一般出现在初养鸡场和去年没有发生腺病毒的鸡场。因为没有免疫疫苗,鸡群体内没有抗体,发病情况一般比较严重。  相似文献   

中西结合治疗犬传染性肝炎     

崔丽  王红杰 《兽医导刊》2015,(3):74-75

<正>犬传染性肝炎是由犬腺病毒Ⅰ型引起的一种急性败血性传染病,在犬主要表现为体温升高、肝炎、黄疸、贫血、角膜混浊等特征,部分犬的角膜变蓝,又称"蓝眼病"。在临床上,该病不是单独感染,而是常与犬瘟热发生混合感染,这样便使病情变得更加复杂,更加严重,不易控制。本病几乎在世界各地都有发生,是一种常见的犬病。(一)流行病学发病的初始阶段,病毒主要存在于患病犬的血液中,其次在各种分泌物、排泄物中都存在大量病毒,并可排出体外,造成外界环境  相似文献   

油用亚麻可溶性糖、脂肪含量与硬脂酰-酰基载体蛋白脱氢酶基因表达相关性分析     

王树彦  韩冰  周四敏  徐军 《作物杂志》2016,(4):56-61

为研究油用亚麻叶片、果球4个发育阶段硬脂酰-酰基载体蛋白脱氢酶基因(sad)表达水平与可溶性糖含量、脂肪含量之间的关系,以3个已知亚麻酸含量相对不同的油用亚麻品种为试验对象,应用q RTPCR技术对不同发育时期组织中sad基因的相对表达量与可溶性糖含量以及脂肪含量之间的关系进行分析。结果表明,在油用亚麻叶片和果球的不同发育阶段sad基因的表达模式符合正态分布,在品种和时期之间表达量差异明显。可溶性糖的含量在果球和叶片中差异明显,相关性分析结果显示,在sad基因表达量增加时,可溶性糖含量相对减少;脂肪含量与sad基因的表达量呈极显著正相关。油用亚麻中sad基因表达直接影响油用亚麻可溶性糖和脂肪含量,进而影响亚麻油的品质。  相似文献   

探讨彭阳县节水载体建设存在问题及发展建议     

李占智 《种子科技》2016,(11)

要以提高用水效率和效益为目标,以建立高效的节水管理体制和运行机制为主要内容,加强水资源合理配置,并通过节水载体建设及节水减排项目的实施,为彭阳县经济社会的持续发展提供水资源支撑。  相似文献   

经济欠发达地区种子市场面临的难题与对策     

屈剑锋 《种子科技》2011,29(2):9-11

“国以农为本，农以种为先”，种子是万物之源，是不可替代的农业生产资料，是农业科学技术的有效载体，它直接关系到农业安全、农村稳定和农民增收。《中华人民共和国种子法》（以下简称《种子法》）颁布实施十年来，种子市场空前活跃，从事种子经营人员骤增，销售环节缩短，经销渠道增多，购买方式多样，在一定程度上方便了广大农民群众选种购种，促进了良种推广应用。但是，种子市场依然存在着不少问题难点。  相似文献   

水牛Sox2基因原核表达载体的构建与诱导表达     

伏彭辉  刘庆友  王玲  邓彦飞  鞠静丽 《黑龙江畜牧兽医》2011,(5):50-52

水牛Sox2基因对体内胚胎的早期发育至关重要,它是重要的多能性干细胞(iPS细胞)标记基因之一,试验通过双酶切重组质粒pMD18-T-Sox2,将水牛Sox2基因定向克隆入原核载体pET-32a(+),成功构建了原核表达载体pET-Sox2,然后利用IPTG诱导,获得诱导表达蛋白,并经过SDS-PAGE电泳分析和Wes...  相似文献   

携带AIV HA基因鸭肠炎病毒转移载体的构建     

乌伊罕  刘晓玫  王君伟  邢明伟  韩先杰  马波 《黑龙江畜牧兽医》2011,(6):18-21

为了获得携带禽流感病毒(AIV)HA基因鸭肠炎病毒转移载体,试验采用基因工程方法构建了带有CMV启动子、多克隆位点(MCS)及牛生长因子转录终止信号和加poly(A)信号(BGHpA)等真核表达元件的载体pET-3.1,将H5N1亚型禽流感病毒HA基因插入pET-3.1,再将携带真核表达元件的HA基因插入鸭肠炎病毒通用...  相似文献