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71.
棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。 相似文献
72.
应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA 总被引:1,自引:0,他引:1
运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。 相似文献
73.
74.
本试验旨在研究禽胰多肽(APP)对肉鸡肝脏和小肠组织中APPR mRNA表达量的影响.试验以APP粗提液及层析APP制品为材料,选取90只1周龄艾维菌肉鸡随机分为5组,每组3个重复,每个重复6只鸡.Ⅰ设为对照组,Ⅱ、Ⅲ设为饲饮组,Ⅳ、Ⅴ设为注射组.在第7周末,屠宰取其肝脏、小肠组织,运用SYBR Geen Ⅰ实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对肝脏和小肠中APPR mRNA的表达进行相对定量分析.结果发现:注射组与饲饮组肝脏及小肠中APPR mRNA的表达水平与对照组相比均呈下降趋势,且注射组降低程度大于饲饮组降低程度;其中,注射组与饲饮组中均是层析APP制品比APP粗提液的下降较明显.提示在外加APP情况下可对APPR mRNA的表达呈现抑制作用.本研究结果为进一步探讨APP与其受体之间的关系,从而为阐明其生理功能和作用机制提供一定的理论依据. 相似文献
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76.
77.
1986、87两年分别采用上一年无病种薯28个品种/系各3块,取中部切决于切面上蘸接近等量和等浓度的黑疤病(Ceratocystis fimbriata)孢子悬液,恒温、恒湿培养,定期取样作侵染区组织徒手切片、乳酚油封片用BHZ型0lympus荧光显微镜(B+G滤镜激发)观察,取得以下资料。 相似文献
78.
3 森林的保土作用 森林的保土作用,首先研究以下几个单项保土作用。 3.1 增强土壤抗剪切力的作用 土壤的抗剪切力可以通过对含有树木根系的土层,进行剪切力试验求得。远藤等1969年对含有幼树根系的小土柱进行剪切力试验。其结果是,随着土壤含根量的增加土壤抗剪切力增大。这种抗剪切力增大,是由于树根抗剪切力和树根抵抗从土层中 相似文献
79.
确定感染禽群是努力防止肠炎沙门氏菌(SE)经蛋源传播给人的一个关键步骤。本实验中.从肠炎沙门氏菌(SE)和鼠伤寒沙门氏菌(ST)的多糖中分离的脂多糖作为抗原,建立FP方法和含SE鞭毛抗原的ELISA方法来检测卵黄样本中的特异抗体。在两个实验中每组SPF蛋鸡经口腔接种10^6或10^8CFU的SE(噬菌体型为13a)或10^8的ST。在接种后5周内采集禽蛋,各组的大多数禽蛋样本都用FP方法和ELISA进行特异抗体的检测。结果表明:尽管特异性的不足限制了抗体检测数据的使用,FP方法相对于传统的血清学方法更为简单和快速。 相似文献
80.
单抗酶联试剂盒与PCR方法快速检测沙门氏菌的比较 总被引:18,自引:1,他引:17
本文对单抗酶联试剂盒与PCR方法快速检测沙门氏菌进行了比较。将沙门氏菌与大肠杆菌以不同比例混合后 ,分别用ELISA和PCR法检测 ,在 1∶1 0 0的比例时 ,用这 2种方法均能检测出阳性样品 ;在 1∶1 0 0 0的比例时 ,用ELISA法检测为阴性 ,而用PCR法则能检测出。检测鲜牛奶、龙虾、虾仁、熟食制品等样品 ,2种方法的符合率达 97 6 %。对冻虾仁、人粪便样品的前增菌、选择性增菌、后增菌过程进行同步检测 ,在样品的前增菌液 ,直接ELISA法检测的OD值小于 0 5 ,而PCR法扩增能出现特异条带 ,经国标方法验证为阳性 ,证实PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,而在选择性增菌液和M 肉汤后增菌液中 ,2种方法均能检出阳性样品。 相似文献