应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭海龙  童光志  仇华吉  周艳君  兰文生  王云峰  吴东来 《兽医大学学报》2003,23(3):278-280

运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段，经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段，将余下的2个较大片段连接，并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物，从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体，重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定，验证无误后作为竞争性模板内对照，一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR，产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD)，经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴，取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴，绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明，本方法操作简单，结果可靠，稳定性高，适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。  相似文献   

诺沃克病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立     

邱杨  赵丽  卢小雨  陈进会  兰文生  刘建丽  王伟 《中国动物检疫》2012,29(12):29-31

本文建立了一种用于诺沃克病毒实时荧光RT-PCR检测的引物和方法.分析已报道的诺沃克病毒基因组序列,分别设计引物和荧光探针.通过实时荧光RT-PCR检测,得到诺沃克的特异性荧光曲线,检测结果准确、可靠.  相似文献   

应用竞争PCR定量检测猪IFN-γmRNA   总被引：2，自引：0，他引：2  

郭海龙  童光志  仇华吉  周艳君  兰文生  王云峰  吴东来 《中国兽医学报》2003,23(3):278-280

运用RT-PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ-干扰素(IFN-γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段.将其纯化后克隆于pMD18-T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线.应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN-γ mRNA的定量检测.  相似文献