雄性育性基因RNA干扰载体的构建与鉴定(英文)     

王文锋  王红霞  穆灵敏 《（《农业科学与技术》）编辑部》2009,(3)

cDNA fragment of fertility gene MS2 from cotton was cloned by RT-PCR approach, it was highly homologous with relevant genes of Brassica napus and Arabidopsis thaliana. According to the principles of constructing RNAi vector, sense and antisense fragments of MS2 gene carrying restriction endonuclease recognition sites were amplified via PCR technique, ligated with the first intron of upland cotton chinase gene, then inserted into artificially modified plant expression vector pBI121, yielding RNAi vector pBGP12MSIn. The results showed that RNAi vector pBGP12MSIn harboring MS2 gene driven by anther specific promoter BGP was successfully constructed. Our results laid a foundation for studying the function of this gene and genetic transformation of plant male sterile lines.  相似文献   

香蕉Maasr1基因RNAi植物表达载体的构建及鉴定     

董凤英  杨超  陈焕雄  张建斌  徐碧玉  金志强 《热带作物学报》2009,30(3):332-337

以香蕉Maasr1基因为目的基因,载体pBS为中间载体,pBBB、pBI121为表达载体,分别构建含有Maasr1基因的RNAi植物表达载体DBBB-S-I-A和含有Maasr1基因正义片段的植物表达载体pBl121-S,并通过农杆菌介导的方式对构建的该RNAi载体沉默效果进行鉴定.结果表明:(1)利用中间载体pBS和植物表达载体pBBB成功构建了香蕉Maasr1基因的RNAi植物表达载体pBBB-S-I-A;(2)利用载体pBI121成功构建了1个含有Maasr1基因正义片段的植物表达载体pBI121-S:(3)构建的RNAi载体pBBB-S-I-A可以抑制Maasr1基因的表达,具有较好的沉默效果.  相似文献   

番木瓜果肉果胶裂解酶基因克隆及反义植物表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

申艳红  陈晓静  何玮毅  卢秉国 《热带作物学报》2009,30(1):59-63

采用cDNA末端快速扩增方法.获得了番木瓜果肉果胶裂解酶(Pectate lyase,PL)基因的完整3′端和部分5′端序列.然后,根据本实验室已经获得的PL基因5′端DNA序列及笔者得到的3′端序列设计上、下游引物,以番木瓜基因组DNA为模板扩增得到PL基因的开放性阅读框.该序列编码385个氨基酸,与草莓、桃、芒果、拟南芥氨基酸序列的同源性分别为83.38%、75.76%、73.68%、65.96%.根据PL基因设计特异引物,扩增其保守区片段,将其反向插入pBI 121的CaMV 35 S启动子和Nos终止子之间,成功构建反义植物表达载体pBP,并导入到根癌农杆菌EHA 105中.  相似文献   

抗冻蛋白基因AFP表达载体构建及转化紫花苜蓿初报   总被引：1，自引：1，他引：0  

郝凤  刘晓静  毛娟  于铁峰  张德罡 《草地学报》2009,17(6):779-783

以胡萝卜基因组DNA为模板,用PCR方法扩增目的基因,连接到PGEM-T Easy Vector载体上,经XbalⅠ和SacⅠ双酶切,将目的片段连接到PBI121工程质粒上,通过农杆菌介导法转化和田苜蓿,为提高紫花苜蓿的抗冻性奠定基础.结果表明,成功克隆出抗冻蛋白基因AFP,并构建成AFP植物表达载体.获得了具有卡那霉素抗性的苜蓿愈伤组织,和田苜蓿愈伤组织的最佳Kan筛选浓度为60 mg/L.经PCR技术鉴定,AFP抗冻蛋白基因已整合到苜蓿基因组中.  相似文献   

一种用高拷贝质粒载体制备BAC载体基本功能基因的新方法     

崔红玉  王亚萍  徐明举  薛永志  石星明  兰德松  王云峰  童光志 《农业科学与技术》2008,9(2):70-75

介绍一种改进的用普通高拷贝质粒pUC119来制备细菌人工杂色体（BAC）载体基本功能基因序列的新方法及其在构建分子克隆化病毒中的应用,该方法可使BAC载体基本功能基因序列的制备更为简易、高效。  相似文献   

拟南芥Flowering Locus T基因生物功能及其mRNA移动能力研究     

刘旭新  Steve Jackson  李春阳 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2008,36(10):179-185

【目的】研究拟南芥FT(Flowering Locus T)基因在拟南芥植物开花过程中的重要作用及其mRNA的长距离运移能力。【方法】将FT基因功能序列及其突变序列mFT(起始密码子突变为终止密码子)连接入马铃薯X病毒(Potato Virus X,PVX)载体和去除外壳蛋白(Coat Protein,CP)序列的芜菁缩叶病毒(Turnip crinkle virustruncated coat protein,TCV△CP)载体中,经体外反转录得到病毒目的片段RNA,然后分别用PVX-FT侵染烟草,TCV△CP-FT侵染拟南芥。【结果】人工接种PVX-FT可以诱导烟草开花;TCV△CP-FT和TCV△CP-mFT人工侵染拟南芥叶片后,经RT-PCR检测发现,在侵染的叶片中与其上部新生叶片中有TCV△CP-FT和TCV△CP-mFT序列,表明FTmRNA序列可以帮助失去细胞间移动能力的TCV△CP恢复移动能力,并且在顶芽中检测出明显条带,经测序证实为FT基因序列。【结论】FT可以诱导短日照品种烟草在长日照条件下开花,而且FTmRNA功能序列可以协助因失去CP序列而没有细胞间移动能力的TCV△CP恢复移动能力。  相似文献   

秦烟遗传转化体系的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

孔娜  朱锦辉  陈耀峰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2008,36(9):71-75

【目的】优化烟草的高效遗传转化体系。【方法】以陕西地区广泛种植的烟草品种秦烟98为试材,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将从酿酒酵母细胞中克隆到的具有较强耐盐表型的HAL1基因进行遗传转化,对农杆菌介导的遗传转化条件及其影响因素进行研究。【结果】用50 mg/L卡那霉素(Kan)筛选转化外植体用800 mg/L羧苄青霉素(Cb)除菌可以获得理想的筛选和除菌效果。以优化的农杆菌介导烟草叶片的遗传转化条件为:将未经过预培养(预培养0 d)的外植体用稀释150倍的农杆菌菌液(OD600=0.5)浸泡1min,转至MS1培养基上共培养48 h,用无菌水冲洗后于体积分数2%NaClO中浸泡15 min,用无菌水冲洗4~5次,置800 mg/L Cb+质量分数0.1%的甘露醇中浸泡约12 h除菌。【结论】获得了农杆菌介导烟草叶片遗传转化的最佳优化条件,有效地减少了外植体的污染率,提高了抗性芽分化率。  相似文献   

蝴蝶兰·文心兰遗传转化体系的初步研究     

满若君  卜朝阳  李杨瑞 《安徽农业科学》2008,36(8):3129-3131

[目的]优化蝴蝶兰和文心兰的遗传转化条件。[方法]以培养3周的蝴蝶兰原球茎和文心兰愈伤组织为试材,以大肠杆菌为生长培养基,研究3种农杆菌菌株的侵染力,以及菌液浓度、侵染时间、酚类诱导物(AS)和共培养时间对转化的影响。[结果]以蝴蝶兰原球茎为农杆菌介导的外植体进行遗传转化的优化条件为:预培养时间3d,菌液侵染浓度OD600=0.3,菌液侵染时间10min,pH值5.4,菌液侵染后,与农杆菌共培养5d并添加100μmol/LAS,此条件下的瞬间表达率最高。将蝴蝶兰遗传转化的条件运用于文心兰,得到的转化率较低。3种农杆菌菌株中,EHA105菌株侵染力最强,其次是AGL1,LBA4404最弱。[结论]该研究为进一步研究蝴蝶兰和文心兰的遗传转化体系提供理论依据。  相似文献   

简易快速高效制备T载体     

徐锋  武晓丽 《安徽农业科学》2008,36(2):460-461

[目的]制备成本廉价、使用方便、效率高的T载体。[方法]用PstI充分酶切纯化的质粒pUC19,再用T4DNA聚合酶消化15min,电泳得到T载体,进行质量检测,并与商品化的T载体pMD18-T进行对比。[结果]自制的T载体自连检测只发现2个菌落与PCR扩增片段连接。经转化大肠杆菌JM109,pMD18-T的平均白斑率为99.4%,转化菌落为3.55万个/μg,自制T载体的平均白斑率为99.7%,转化菌落为3.38万个/μg,完全可以与商品出售的T载体媲美。[结论]该研究自制的T载体自连率低,假阳性率低,克隆效率高,可替代商品化的T载体用于TA连接,而且制备时间短,成本低廉,技术简单,值得推广。  相似文献   

Follistatin Related-gene在小鼠成肌细胞中表达的研究     

杨晓宇  郝文博  董顺义  谷文峰  杨剑杰  胡兰 《沈阳农业大学学报》2008,39(2):243-246

利用分子克隆技术,采用RT-PCR扩增follistatin related-gene全长cDNA序列,克隆入真核表达载体pEGFP-N1后测序鉴定,并通过脂质体瞬时转染小鼠成肌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE方法鉴定FLRG蛋白表达情况.结果表明,成功构建的真核表达载体pEGFP-N1-FLRG能成功转染小鼠成肌细胞,RT-PCR和SDS-PAGE电泳证实pEGFP-N1-FLRG在成肌细胞中表达出FLRG蛋白,为深入研究follistatin related-gene奠定了基础.  相似文献