全文获取类型
收费全文 | 9584篇 |
免费 | 686篇 |
国内免费 | 1617篇 |
专业分类
林业 | 195篇 |
农学 | 832篇 |
基础科学 | 15篇 |
571篇 | |
综合类 | 4216篇 |
农作物 | 779篇 |
水产渔业 | 867篇 |
畜牧兽医 | 3167篇 |
园艺 | 724篇 |
植物保护 | 521篇 |
出版年
2024年 | 58篇 |
2023年 | 164篇 |
2022年 | 445篇 |
2021年 | 484篇 |
2020年 | 536篇 |
2019年 | 583篇 |
2018年 | 453篇 |
2017年 | 634篇 |
2016年 | 731篇 |
2015年 | 670篇 |
2014年 | 665篇 |
2013年 | 640篇 |
2012年 | 972篇 |
2011年 | 852篇 |
2010年 | 652篇 |
2009年 | 617篇 |
2008年 | 515篇 |
2007年 | 589篇 |
2006年 | 456篇 |
2005年 | 305篇 |
2004年 | 224篇 |
2003年 | 158篇 |
2002年 | 101篇 |
2001年 | 74篇 |
2000年 | 75篇 |
1999年 | 58篇 |
1998年 | 30篇 |
1997年 | 25篇 |
1996年 | 15篇 |
1995年 | 10篇 |
1994年 | 13篇 |
1993年 | 13篇 |
1992年 | 15篇 |
1991年 | 3篇 |
1990年 | 7篇 |
1989年 | 4篇 |
1988年 | 2篇 |
1987年 | 4篇 |
1986年 | 2篇 |
1985年 | 3篇 |
1982年 | 1篇 |
1980年 | 1篇 |
1963年 | 1篇 |
1962年 | 3篇 |
1956年 | 10篇 |
1955年 | 14篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 359 毫秒
31.
32.
33.
ZHANG Zhan-jun YING Kang WANG Zhong ZHANG Xiao-yan LIU Jian-xun HUANG Yan XU Li WEI Cui-e WANG Yong-yan 《园艺学报》2004,20(8):1427-1433
AIM: To investigate the genes differential expression in cortex during rat focal cerebral ischemia.METHODS: cDNA microarray chips containing numerous cDNAs were used to investigate the gene expression pattern between samples of focal cerebral ischemia and sham-control operation rats. RESULTS: Two hundred and eleven genes differentially expressed were screened out, among these genes, up-and down-regulated genes were 199 and 12, respectively. CONCLUSIONS: The analysis of gene expression pattern of focal cerebral ischemia based on cDNA microarray can realize high-throughput screening of the genes associated with the focal cerebral ischemia. The differential expression of genes may be related to the pathogenesis of focal cerebral ischemic diseases. 相似文献
34.
35.
AIM: To further investigate the role of PKARⅠβ in the growth-promoting effects of shuang long Jiegu pill (SLJGP), a Chinese medicine, on cultured osteoblasts. METHODS: pcDNA- antiPKARⅠβ, a recombinant expressing the antisense sequence of PKARⅠβ, was constructed and transformed HFOB1.19 by lipofectin. MTT was undertaken to assess the cell growth with the treatment of high dosage of SLJGP containing serum. RESULTS: Antisense gene blocked the growth-promoting effects of SLJGP containing serum on HFOB1.19. CONCLUSION: The function of SLJGP is closely related to cAMP-dependent protein kinase A. 相似文献
36.
秀丽纤杆线虫 (Caenorhabditis elegans)是一种模式线虫 ,目前广泛应用于寄生性线虫基因的功能研究 ,并且还被用于捻转血矛线虫等寄生性线虫疫苗侯选抗原基因的表达和耐药性产生机制方面的研究 相似文献
37.
鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。 相似文献
38.
家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2~ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0~ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右 相似文献
39.
鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用 总被引:4,自引:0,他引:4
利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景 相似文献
40.
从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80 0时仍为阳性 相似文献