猪YTHDF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备     

黄童  杜柳阳  张宇  顾金燕  周继勇 《畜牧与兽医》2019,(8):90-95

YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m~6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分析显示该基因在各物种间保守性较高。将猪YTHDF2编码基因克隆至原核表达载体pET-28a (+)中,重组质粒pET-28a (+)-YTHDF2在大肠杆菌BL-21菌株中进行原核表达,成功获得了大量带His标签的猪YTHDH2重组蛋白,大小约70 kD。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备猪YTHDF2多抗血清,ELISA结果表明制备的兔抗猪YTHDF2多抗血清效价为1:204 800,间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验均表明该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。猪YTHDF2基因序列的获得及多克隆抗体的制备为进一步研究YTHDF2在猪mRNA m~6A甲基化过程中的生物学功能奠定了基础。  相似文献   

杜波绵羊鲜胚生产的取胚试验初报     

《畜牧与兽医》2014,(7):58-60

为了研究杜波绵羊鲜胚胎的最佳方法,选取胴体性状相似、繁殖功能正常,性周期正常的供体母羊16只,进行鲜胚的采集与存活率试验。结果显示:排卵总数63枚,只均5.025枚;回收可用胚36枚,只均2.25枚。结果表明:杜波绵羊生产的鲜胚数量较少,明显低于其他绵羊或山羊品种。  相似文献   

鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域的应用及研究进展     

王婧  杨海峰  王妲妲  陈晓兰 《中国畜牧兽医》2020,47(11):3783-3791

鸡胚因发育过程清楚，长久以来作为基础和应用科学研究领域重要的实验模型，尤其在鸡胚发育早期绒毛尿囊膜阶段，因其血管丰富，是天然的免疫缺陷宿主，是病理学、药理学和肿瘤学等研究领域的理想实验模型。作者简述了发育早期的鸡胚组织结构，并介绍了鸡胚绒毛尿囊膜在肿瘤研究、血管生成、器官移植、烧伤等疾病机理研究中的应用，以及在鸡胚病理模型基础上进行的抗肿瘤药物筛选的应用。重点介绍了鸡胚及禽类细胞系在病毒繁殖和疫苗生产、治疗性蛋白和单抗生产方面的应用研究进展。多种人源病毒、禽源病毒、支原体等可在鸡胚及禽类细胞上增殖，并用于疫苗生产。作者对常用的禽类纤维原细胞和多能干细胞的发展和特点进行了阐述，并总结了商业化的禽类细胞系来源以及部分易感病毒。鸡胚表达系统能够在目的蛋白特定位点产生人源化糖基，减少目的蛋白对人的过敏反应，且禽蛋廉价易得，可作为生产人用单克隆抗体和治疗性蛋白的合适供体。作者介绍了鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域应用的最新进展，并对鸡胚作为动物模型在未来的应用进行了展望。  相似文献   

科尔沁奶牛防御素基因BNBD5原核表达产物的生物活性研究     

锡林高娃  韩甫鑫  任洪宝 《当代畜禽养殖业》2020,(3):5-7

目的:通过原核表达科尔沁牛防御素BNBD5获得纯化产物,研究其对牛乳腺炎致病菌的抑菌活性。方法:从牛外周血中分离中性粒细胞,提取牛总RNA,将克隆的牛抗菌肽BNBD5基因连接到原核表达载体pET-30a中,经IPTG诱导原核表达,SDS-PAGE鉴定表达结果,并通过大肠杆菌、金黄色葡萄球菌验证抑菌生物活性。结果:成功构建了pET-30a-BNBD5重组载体,经IPTG诱导,pET-30aBNBD5融合表达产物的相对分子质量约为10 ku,与预期的多肽分子质量大小相符,证实已得到重组表达产物,通过抑菌试验可知其对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌性。结论:获得科尔沁牛防御素BNBD5基因体外表达产物,其对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑制作用。  相似文献   

桑天牛卵啮小蜂各发育阶段虫态的显微观察     

苏筱雨  袁芳芳  田静  黄大庄 《中国森林病虫》2015,34(4)

为全面掌握桑天牛卵啮小蜂Aprostocetus prolixus各虫态的发育情况,显微镜下观察桑天牛卵啮小蜂的胚后发育,并采集图像。桑天牛卵啮小蜂卵期只有1 d,寄生桑天牛卵2 d时可见初孵幼虫,体小透明,卵圆形,淡黄色;寄生3~5 d时,幼虫逐渐变长呈梭状;寄生6~10 d时,体中部膨大尾部渐尖,分节明显,共13节;寄生15 d时,体色逐渐变白,体内已呈黑色;20 d时开始化蛹。雌蛹体长1.80~3.70 mm,雄蛹体长1.60~2.80 mm,预蛹乳黄色,近椭圆形。寄生30 d时,腹部、头部均变黑,触角展开,即将羽化成蜂。  相似文献   

海兰褐蛋鸡痘病毒的分离与鉴定     

姜绍全  王金亮  秦燕 《山东畜牧兽医》2015,(1):36-37

<正>禽痘病毒病主要发生于鸡和火鸡,鸽子偶有发病,鸭、鹅不易感。不同性别、年龄、品种的鸡均易感染。本病一年四季均可发生,尤以秋季和冬季多发。病鸡脱落的痘痂,为病毒散播的主要形式,皮肤或者粘膜上的伤口、蚊虫叮咬亦可传染该病,但不经健康皮肤及口腔感染。鸡群过于拥挤,鸡舍通风不良、阴暗潮湿,鸡群打架、啄毛、交配等造成的外伤,鸡群感染寄生虫,营养不良,维生素缺乏,饲养管理差等皆可导致该病的发生。若继发其他感染可引起大批死亡,尤其对雏鸡可造  相似文献   

Study on Antiviral Effect of Polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.on NDV in vitro     

ADELIJIANG Wusiman  DELIBAIER  NUERAILI Maitiniyazi  BUHELIQIANMU Yiming  SAIFUDING Abula 《中国畜牧兽医》2016,43(7):1869-1875

To research on polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.against Newcastle disease virus (NDV).Total polysaccharide and four different solvent extractions of Lagenaria siceraria (Molina) Standl.were extracted by the methods of hot water extraction and ethanol precipition in this study.The content of polysaccharide was measured by phenol-sulfuric acid method and infrared spectroscopy method.The safe concentration and growth of chick embryo fibroblast (CEF) were assayed by MTT method,in order to facilitated the comparison under the same level,the safe concentration was united as 78.125 μg/mL.Under the safety range of concentration,detected the block-virus activity,anti-virus activity and virus-killing activity of polysaccharides through the ways of pre-adding polysaccharides,post-adding polysaccharides and adding polysaccharides with NDV.The results showed that the direct inactivation and propagation inhibition activity of total polysaccharide and four different solvent extractions were stronger than anti-absorption function.Anti-virus inhibition rate of 70%,80% gradient alcohol precipitation of polysaccharides from Lagenaria siceraria (Molina) Standl.(LSP₇₀,LSP₈₀) and total polysaccharide (LSP_t)were 40.41%,44.54% and 61.85%,virus-killing inhibition rate were 44.74%,58.76% and 59.38%.LSP₈₀ had the highest virus inhibition rate as 37.14% in the block-virus activity of those five polysaccharides.In summary,70%,80% gradient alcohol precipitation and total polysaccharide in polysaccharides possessed better activity and would be as the materials for further research.  相似文献   

猪博卡病毒VP1蛋白抗原表位分析及其克隆表达     

《畜牧与兽医》2016,(9):96-99

为研究猪博卡病毒(PBo V)VP1蛋白在血清学诊断中的作用,用DNAStar软件预测了PBo V NP08株(Gen Bank登录号KR014255.1)VP1蛋白的主要抗原表位,确定1-334个氨基酸为优势抗原表位区,构建重组质粒p ET32a-VP1,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为56.7 ku的重组蛋白VP1,主要以包涵体形式存在。纯化后蛋白的Western blot结果表明,表达的VP1蛋白与临床阳性血清具有良好的反应性。用该蛋白包被ELISA板,检测10份临床感染PBo V的猪血清样品和3份未感染猪的血清,结果表明其具有很好的特异性,不与未感染猪的血清发生反应,为建立PBo V感染血清学诊断方法奠定了基础。  相似文献   

牛坏死杆菌溶血素基因克隆、表达和抗原性分析     

孙东波  吕思文  高晶  郭东华  王建发  武瑞  王洪斌 《黑龙江畜牧兽医》2015,(1):140-142

为了研制新型有效安全的牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂,试验利用PCR扩增技术获得了牛坏死杆菌H05菌株hly基因的全长及5个相互重叠的截短片段的核苷酸序列,并利用原核表达载体p ET-32a对hly基因的5个截短片段进行了表达和抗原性分析。结果表明:hly-2、hly-3和hly-4片段获得了成功表达,且hly-2(aa 278~567)、hly-3(aa 566~888)和hly-4(aa 887~1163)重组蛋白能够与牛坏死杆菌多克隆抗体反应。说明hly-2、hly-3和hly-4可以用于研制新型牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂。  相似文献   

“鲁加5号”柱型苹果胚状体再生体系优化     

周爱琴  祝军  杨庆山  王振猛  李永涛  魏海霞 《北方园艺》2017,(10)

利用胚状体再生植株,可以获得遗传稳定性好且数量多的再生植株,这对于建立高频稳定的遗传转化体系具有重要意义。该试验以苹果新品种"鲁加5号"为试材,采用叶片再生方法,研究了其胚状体再生体系,为建立遗传转化体系奠定了基础。结果表明:MS+6-BA1.0mg·L~(-1)+NAA 0.20mg·L~(-1)为"鲁加5号"最适宜的继代增殖培养基。叶片的最佳放置方式为近轴面接触培养基。胚胎发育阶段最佳暗培养时间为10d。最佳体细胞胚诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg·L~(-1)+NAA 5.0mg·L~(-1)+TDZ 0.5mg·L~(-1)。胚胎发育阶段,通过胚状体不同时期形态学组织学观察,显示胚状体发育时期经历原胚、球形胚、心形胚、鱼雷形胚、子叶胚和成熟胚阶段。  相似文献