Optimization of Cryoprotectant for Attenuated Salmonella Cholerae C500     

YANG Shuai  ZHOU Di  ZHANG Xinxin  HU Xiangwei  YANG Liguo 《中国畜牧兽医》2007,47(11):3696-3704

The purpose of this study was to optimize the antifreeze protectant of attenuated Salmonella Cholerae C500 and improve the survival rate of C500.The effect of four types of cryoprotectant (permeating,semi-permeating,non-permeating cryoprotectants and antioxidants) on the survival rate of C500 before and after cryopreservation was investigated by single factor test.Each cryoprotectant was set at different concentrations and mixed in equal volume of C500.After two weeks of cryopreservation in liquid nitrogen,becteria plate count was carried out to calculate the survival rate,and the best one of the permeating cryoprotectant,semi-permeating cryoprotectant,non-permeating cryoprotectant and antioxidants and their optimal concentrations were beneficial to the preservation of bacteria was initially selected.Finally,the four protectors selected were tested by orthogonal test of four factors and three levels to get the optimal combination formula.The results of single factor test showed that the best permeating,semi-permeating,non-permeating cryoprotectants and antioxidants were glycol,sucrose,PVP and glycine,and the corresponding preservation concentrations were 15%,6%,6% and 0.25%,respectively.The orthogonal test showed that each factor had a significant impact on the survival rate of C500.The optimal combination formula was 17% glycol,9.0% sucrose,6.0% PVP and 0.35% glycine.The optimal combination had the optimal effect at -80 ℃,the survival rate was 88.34% in 6 weeks,followed by liquid nitrogen group,-20 ℃ group and 4 ℃ group.The results showed that the formulation of the protective agent obtained in this experiment greatly improved the antifreeze ability of C500 and its survival rate.  相似文献   

猪霍乱在俄国南部传播     

《中国猪业》2008,3(8):77-77

近期，俄国——在北奥塞梯的俄国北高加索地区爆发了非洲猪霍乱病毒（ASR），到目前为止造成1076头猪死亡。声明说：“在过去的24小时总共死了27头猪。”从疾病爆发以来截止到2008年6月30目已经登记了3400多头被感染的猪。  相似文献   

一种新型肠粘膜保护剂——载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能影响的研究     

郭彤  许梓荣  赵晶晶 《中国预防兽医学报》2007,29(1):75-80

以蒙脱石（MMT）为原料，通过阳离子交换反应合成载铜蒙脱石（MMT-Cu）。为探讨载铜蒙脱石对肠粘膜屏障功能的影响，采用体外培养的单层Caco-2细胞模型为研究对象，以细菌易位数量和肠绒毛损伤程度做为指标进行研究。结果表明：MMT-Cu可明显减少（P〈0．01）E．coilK88、S．choleraesuis侵入到Caco-2细胞内的数量，与对照组相比，下降了2logCFU／mL～3log CFU／mL；并能显著降低（P〈0．01）LDH的释放量。扫描电子显微镜下观察可见，加入MMT-Cu一段时间后，当E．coil K88和S．choleraesuis粘附Caco-2细胞时，微绒毛依旧排列整齐、致密，可见肠上皮细胞保持完好。结果表明，MMT-Cu对肠粘膜具有屏障作用，可作为一种消化道粘膜保护剂。  相似文献   

严防高致病性蓝耳病     

周彬 《北方牧业》2007,(22)

<正>高致病性蓝耳病,不分年龄季节均可感染,病猪临床主要表现为体温升高、精神沉郁、食欲不振或废绝,呼吸困难、喘气,部分猪伴有皮肤发红变紫等症状,少数毛孔有出血点。病原主要为多种病毒和细菌、  相似文献   

两歧双歧杆菌体外抑制断奶仔猪肠道病原菌的研究及其机理探讨   总被引：4，自引：1，他引：3  

郭彤  许梓荣 《畜牧兽医学报》2004,35(6):664-669

为探明两歧双歧杆菌对仔猪肠道病原菌的抑菌机理,通过两歧双歧杆菌与大肠杆菌K88、猪霍乱沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌分别进行6、12、24、48h共培养,判断抑菌效果并研究其抑菌机理。结果表明,两歧双歧杆菌在体外对仔猪肠道3种病原菌的生长均有显著的抑制作用,而病原菌并不影响两歧双歧杆菌的生长。通过原子力显微镜照片可见,两歧双歧杆菌不能与致病菌大肠杆菌K88、猪霍乱沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌发生共凝集现象。  相似文献   

减毒沙门菌介导防御素-3乳腺表达及对乳腺炎主要病原菌的抗菌效果     

陈慧敏  李银聚  张鹏  程相朝  张春杰  余宁  杨惠  王晓利 《兽医大学学报》2014,(7):1169-1175

探讨减毒沙门菌介导的人HNP-3原前肽和前肽基因乳腺表达及其表达产物对牛乳腺炎主要病原菌的抗菌效果。构建人HNP-3原前肽和前肽基因的乳腺表达载体pEGFP-WAP-prepro-HNP-3和pEGFP-WAP-pro-HNP-3,电转化导入减毒沙门菌ΔcrpC78-1,构建重组菌ΔcrpC78-1（pEGFP-WAP-prepro-HNP-3）和ΔcrpC78-1（pEGFPWAP-pro-HNP-3）,重组菌分点注射到怀孕后20~22d母兔腹部乳腺分布区,收集兔分娩后不同时间的泌乳,Western-blot和荧光检测乳中HNP-3融合蛋白表达情况,ELISA检测乳中HNP-3融合蛋白的表达水平,常规方法分离乳腺炎主要病原菌,活菌计数法检测泌乳中HNP-3融合蛋白抑菌效果。结果显示,乳汁中分别在40 000和35 000处有prepro-HNP-3和pro-HNP-3融合蛋白阳性杂交信号,且在488nm处有黄绿色荧光;母兔在分娩后第5dHNP-3融合蛋白表达量最高,分别可达584μg/L和470μg/L,及至第25天表达量仍可达到277μg/L和213μg/L。活菌计数法结果表明分娩后第5d含prepro-HNP-3融合蛋白兔乳对牛乳腺炎主要病原菌大肠埃希菌、溶血巴氏杆菌、无乳链球菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌率分别为92.0%、54.8%、46.4%、48.8%、86.9%和74.9%;含pro-HNP-3融合蛋白乳的抑菌率分别为84.9%、46.5%、40.6%、40.4%、71.1%和58.4%。结果表明,减毒沙门菌能够介导人HNP-3融合蛋白基因在乳腺上皮细胞中定位表达,表达的preproHNP-3和pro-HNP-3具有较强的生物学活性,对牛乳腺炎主要病原菌具有明显的抑制作用,为乳腺炎的生物防控及生物源性抗菌肽的研究提供了参考。  相似文献   

1株跨属感染猪霍乱沙门菌和大肠杆菌烈性噬菌体的分离及其生物学特性   总被引：2，自引：2，他引：0  

张玉宇  张敏  黄赞  林焱 《畜牧兽医学报》2020,51(8):2032-2038

从健康猪肠道内容物分离鉴定猪霍乱沙门菌（Salmonella choleraesuis,S.choleraesuis）的烈性噬菌体,并对其进行生物学特性分析。以S.choleraesuis 13122为宿主菌,用双层平板法从猪肠道黏膜和食糜样品中分离噬菌体,用电镜形态观察和基因组测序确定其分类,用点滴法和双层平板法测定其在大肠杆菌上的宿主谱,用浊度法测定其裂菌效力。分离到1株猪霍乱沙门菌噬菌体,命名为沙门菌噬菌体L6jm（Salmonella phage L6jm）。L6jm头部呈正多面体直径约75 nm,具有非收缩性的尾部,长约190 nm,其基因组无整合酶基因和细菌基因组,故判定为烈性噬菌体;L6jm可感染S.choleraesuis 13122并跨属感染1株大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）244,同时,可裂解9株大肠杆菌,包括1株产肠毒素大肠杆菌（ETEC）;L6jm在S.choleraesuis 13122和E.coli 244上的最佳感染复数分别为0.01和0.001;潜伏期均为15 min,暴发期分别为145和125 min;L6jm在≤50℃,pH为3~11时稳定;L6jm在液体培养基中对S.choleraesuis 13122有显著（P<0.05）的抑菌效果,对ETEC104在MOI 100时也可产生显著（P<0.05）的抑菌效果。L6jm可跨属感染S.choleraesuis和E.coli,且能裂解1株ETEC,具有防治沙门菌和大肠杆菌感染的应用潜力。  相似文献   

浅析猪烂肠瘟及其防治     

《农技服务》2015,(4)

随着人民生活水平的提高,肉类消费量日益增加,而猪肉又是我们国家的一个主要消费品种,因而生猪生产规模逐渐扩大,养殖技术和标准也日益提高。养殖数量的扩大导致饲养管理和疫病防治上的落后,如影响最为严重的猪瘟(俗名猪烂肠瘟又名猪霍乱),就是严重的传染病之一,如果防治不到位,给生猪养殖场(户)带来巨大的经济损失。今天笔者从建场的选址,饲养管理和预防注射等方面,做了一个总结,仅供参考。  相似文献   

芽孢杆菌对体外肠上皮细胞黏附和细胞膜完整性的影响     

黄琴  白洁  汪启翰  黄怡  李雅丽  余东游  李卫芬 《中国兽医学报》2013,33(3):376-380

以Caco-2细胞作为体外模型研究芽孢杆菌对细胞黏附、细胞存活率及细胞膜完整性的影响.采用荧光标记法探究芽孢杆菌、大肠杆菌K88和猪霍乱沙门菌对Caco-2细胞的黏附特性,并通过排斥、竞争和置换试验测定其对病原菌黏附的阻断作用.采用台盼蓝染色法测定Caco-2细胞存活率和细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活性来反映细胞膜的完整性.结果表明:芽孢杆菌对Caco-2细胞的黏附率均低于病原菌、且对病原菌的黏附无阻断作用,大部分芽孢杆菌不会影响细胞存活率及细胞膜的完整性,对细胞无毒.  相似文献   

猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗的稳定性及免疫安全性     

韩国全  郭万柱  林华  王印  颜其贵  徐志文  朱玲  王小玉  王利娜 《畜牧与兽医》2010,42(3)

为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗的稳定性与免疫安全性,将表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15、pCI-ME2-IL-15及pCI-neo转入S.C500,采用体外增殖试验考察不同表达载体在S.C500中的稳定性;采用携质粒S.C500对ST细胞的粘附、侵袭力和增殖试验研究不同表达载体对运载体生物学特性的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性和运载体对小鼠的安全性。结果显示:体外增殖中pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15稳定性好于pCI-neo,说明外源目的基因正调表达质粒在运载体内的稳定性;空运载体S.C500对ST细胞的粘附率和侵袭率均高于4组含不同质粒的菌株,而4组含不同质粒的菌株之间亦有差异;空运载菌在ST细胞内的增殖能力与4组含不同质粒的菌株之间亦有显著性差异;分别对携带表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15菌株以每只2×108CFU/0.2 mL的剂量进行小鼠口服免疫,腹泻率依次为0%、8.33%和25%。在第7和14天,使用DHL/Amp琼脂培养平板,均可从肝脏、脾脏、十二指肠和新鲜粪便样品中分离到重组菌。试验提示采用猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗免疫BALB/c小鼠具有相对稳定性和免疫安全性。  相似文献