应用逆转录套式PCR检测新城疫病毒核酸   总被引：7，自引：1，他引：6  

黄庚明  辛朝安 《中国预防兽医学报》2001,23(4):295-299

选择DNV融合蛋白保守的编码区域,设计并合成了一对外引物和一对内引物,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCRI地,通过检测NDV感染的实验客观存在病料和临床病料,结果表明,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约0.3pg的NDV RNA,攻毒后第8天还能从非免疫鸡和SPF鸡泄殖腔拭子中检出DNV,第8天非免疫鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为5/10,第8天SPF鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为6/10,对非免疫鸡和SPF鸡的泄殖腔中NDV最佳检出时间均在攻毒后第5天。逆转录套式PCRY应运地临床样品中DNV的最大检出率为6/7,经核酸杂交验证,该法具有很高的特异性和敏感性,也比较简便快速,为从分子水平探讨NDV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。  相似文献   

含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH3T3细胞的表达   总被引：2，自引：0，他引：2  

王凤阳  孟庆文  扈荣良  池海英  张茂林  于康震  殷震 《中国预防兽医学报》2001,23(5):329-331

构建了含有3．7kbLacZ的重组逆转录病毒载体,转染包装细胞系PA317后,经G418筛选,得到了G418的抗性的产毒细胞系,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清,感染NIH3T3细胞。经X-gal染色检测,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。  相似文献   

鸡CD4蛋白基因的克隆及其mRNA在淋巴器官中的表达     

刘胜旺  孔宪刚  丁忠庆  刘永刚  童光志  马云燕 《中国兽医学报》2001,21(5):482-484

从鸡胸腺、脾脏、哈德氏腺、外周血液和法氏囊等免疫器官中分离淋巴细胞,应用RT-PCR对这些免疫器官中鸡CD4分子mRNA的表达进行了研究。同时,用RT-PCR对鸡脾淋巴细胞CD4分子cDNA进行了克隆和序列测定。结果表明,在上述器官中,法氏囊淋巴细胞不表达鸡CD4分子mRNA,其他器官中均有表达。通过序列分析表明,本试验扩增得到的基因为编码鸡CD4分子的基因。  相似文献   

水稻主要抗瘟基因对福建稻瘟菌群体的抗性分析   总被引：9，自引：0，他引：9  

刘文德  阮志平  郑士琴  赵长江  郑武  鲁国东  王宗华 《植物病理学报》2005,35(6)

用1995～2003年间在福建省水稻产区采集的稻瘟菌代表菌系的108个分离菌,它们在CO39近等基因系上测定被划分为30个毒性类型,用它们在30个水稻抗稻瘟病近等基因系或单基因系品种上进行抗病性测定.结果表明水稻抗稻瘟病基因Pi-kh抗性最强,抗性频率高达98.15%,Pi-1和Pi-9(t)也具有较高的抗性频率,是较好的抗源;对2个和3个Pi基因的联合抗性频率的分析,发现一些联合抗性频率极高,甚至有达到100%的组合,表明抗瘟育种采用多个Pi基因聚合,易于获得抗性强的品种.根据抗病基因与供试菌株互作的亲和性,对供试30个Pi基因可能的系统关系分析得到的初步信息可为抗病基因的聚合与布局策略提供参考.  相似文献   

表达猪链球菌溶血素基因的减毒沙门氏菌的构建及鉴定   总被引：3，自引：1，他引：3  

马有智  戴贤君  李肖梁  方维焕 《中国兽医学报》2005,25(5):478-480

将猪链球菌溶血素（suilysin，SLY）基因克隆入原核表达栽体pBV220，将重组质粒再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SV4089株，经PCR和酶切鉴定，构建成携带猪链球菌溶血素基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。结果表明：该减毒株具有相对安全性；用酶切和PCR鉴定法证实在无抗生素存在的条件下携带重组质粒的减毒株比较稳定；SDS-PAGE显示SLY能在宿主菌中进行表达。该结果为进一步研究制备猪链球菌口服活疫苗奠定了基础。  相似文献   

O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达   总被引：9，自引：0，他引：9  

郑敏  金宁一  鲁会军  韩松  金扩世  李昌 《中国兽医学报》2005,25(6):561-563

首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP1基因的3个抗原袁位，与另外扩增的流行毒株VP1基因末端273bp片段相连,构建出O型VP1嵌合基因片段（VP1O）。然后，将VPIO基因连接到原核表达载体pET28a上，构建了重组表达质粒pET28a-VP1O，转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达。SDS-PAGE电泳表明。VP1O基因在大肠杆菌中获得表达。Western blotting检测证实表达的VP1O蛋白具有良好的生物学活性。对表达蛋白通过包涵体洗涤的方法进行初步纯化，获得了较高纯度的VP1O蛋白。  相似文献   

对虾白斑综合征病毒研究进展   总被引：2，自引：0，他引：2  

魏克强  许梓荣 《中国兽医杂志》2005,41(5):39-41

白斑综合征(white spot syndrome，WSS)是全球对虾养殖业所面临的危害性最大的病害之一，是国际兽医局(OIE)、联合国粮农组织(FAO)及亚太地区水产养殖发展网络中心(NACA)规定报告的重要水生动物疾病。自20世纪90年代初首先在我国台湾地区发生以来，至今已席卷了世界各国的对虾养殖地区，造成了巨大的经济损失，  相似文献   

猪流行性腹泻病毒中国地方流行株LJ/B03 M基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

范京惠  郎景华  吴凌  张海峰  李一经 《中国兽医杂志》2005,41(7):7-9

从黑龙江某猪场疑似猪流行性腹泻猪的粪便中提取总RNA，采用RT—RCR方法扩增，首次获得中国地方流行株PEDVM全基因序列，将其克隆到pMD18-T载体中进行测序，克隆的M基因核苷酸序列由681个核苷酸组成，含有一个完整的开放阅读框架，编码226个氨基酸。与国外已发表的其他毒株进行基因进化分析，GenBank中的6PEDV形成的基因进化树具有3个分支。其中分离株LJB／03形成一个独立的分支，说明LJB／03的M基因序列与其他毒株相比，发生了一定的变异。  相似文献   

猪圆环病毒2型GD株ORF2基因的序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

宋长绪赵亚华  蒋智勇王贵平 高向阳 《中国兽医杂志》2005,41(8):6-9

根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV2）0RF2基因序列，设计一对引物，应用PCR从本室鉴定分离的PCV2 GD株的细胞培养物中扩增出ORF2基因（702bp）。将此基因片段克隆入pMD18-T载体，筛选获得重组质粒pMD—ORF2并对其测序，结果表明所克隆的ORF2基因与其他PCV2的0RF2基因核苷酸序列同源性在92．1％～99．9％之间，推导的氨基酸序列同源性在90．2％～99．5％之间。  相似文献   

鸡染色体标本制备技术条件的优化   总被引：3，自引：0，他引：3  

汉丽梅潘英树  张玉静 《中国兽医杂志》2005,41(8):19-20

染色体是基因的载体，细胞的染色体数目和结构是重要的遗传学指标，基因定位的染色体原位杂交；染色体组型分析；受精过程中染色体的行为；核型观察等这些研究，制备染色体标本无疑是这些实验成功与否的先决条件。  相似文献