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多重PCR方法快速检测粪样中产气荚膜梭菌 总被引:4,自引:0,他引:4
建立了多重聚合酶链反应 (multiplexPCR)检测产气荚膜梭菌的α_毒素和肠毒素 (enterotoxin)基因。该方法可以检测猪粪便样品或小肠内容物中肠毒性产气荚膜梭菌。首先猪粪便样品经前处理后 ,接种选择性培养基 ,再挑取单个菌落溶于超纯水中 ,煮沸提抽 ,制备样品DNA ,进行PCR检测。从实验中我们成功的扩增出 32 4bp的α毒素基因片段和 2 33bp的肠毒素基因片段。以人工污染样品 10倍系例稀释后进行检测 ,该方法的检测灵敏度达到 1.0× 10 4 CFU/g并对 5 8份猪粪便样品检测 ,获得 5 3株产气荚膜梭菌 ,分离率为 91%,其中 4株为带有肠毒素的产气荚膜杆菌 ,占整个分离菌株的 7.5 %。因此多重PCR方法在检测粪样中的产气荚膜梭菌是一种非常有用的方法并可以快速检出肠毒素 ,从而避免了使用动物作定型试验。 相似文献
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产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)LT和ST是导致人和动物腹泻的主要病原菌。利用PCR方法分别从pGEM-5Zf( )-STI、K88ab(LT ,ST )质粒中扩增到了STI、STII基因,然后通过三引物PCR实现了STI、STII基因的融合,再与LTB基因融合,并置同一阅读框。LTB基因的5′位于STII基因的3′端,并在ST基因和LTB基因之间插入7个氨基酸的连接肽。将融合基因STI-STII-LTB构建到带有核基质结合区序列(MARs)的植物表达载体pBI121-MARs中,并通过冻融法导入根癌农杆菌EHA105。 相似文献
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BAIJia-ning SUNYi-min BIANYan-qing ZHAOBao-hua 《中国农业科学(英文版)》2004,3(7):535-540
Thermostable enterotoxinⅠ (ST1) mutant genes and thermolabile enterotoxin B subunit (LTB) genes were amplified by PCR from plasmids of Eschenichia coli C83902. The recombinant expression plasmid pZST3LTB containing ST1-LTa fusion gene was constructed by recombinant DNA technique and then transformed into Escherichia coli BL21(DE3). The ST1-LTB fusion protein was highly expressed in recombinant strain BL21(DE3) (pZST3LTB) and the fusion protein was about 38.53% of total cellular protein by SDS-PAGE and thin-layer gel scanning analysis. More important, mice immunized with crude preparation containing the fusion protein inclusion bodies or inactivated recombinant strain produced antibodies that were able to recognize ST1 in vitro. These sera antibodies were able to neutralize the biological activity of native ST1 in the suckling mouse assay. Hence the ST1-LTB fusion protein was nontoxic and immunogenic, the constructed recombinant strain BL21 (DE3) (pZST3LTB) could be used as a candidate of vaccine strain. 相似文献
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采用PCR方法对引自美国俄亥俄州立大学芽孢杆菌遗传保存中心(BGSC)的45个苏云金芽孢杆菌(B t)进行了hblA、bceT及entS 3种蜡状芽孢杆菌(Bc)肠毒素基因的检测.结果表明,hblA、bceT及entS的检出率分别为60%、66.7%和44.7%.这45个准菌株涉及到44个B t亚种,说明Bc肠毒素的基因在B t中是普遍存在的,B t的安全性问题仍需继续关注. 相似文献
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本研究旨在测定断奶猪和未断奶同窝猪小肠对水分,钠,钾和氯的吸收以及确定这些值与小肠绒毛长度和隐窝深度的关系。80头猪的小肠均分为5段,每段前端注射产肠毒素肠大杆菌(ETEC),后端注射对照液,在断奶时和断奶后,4、7、11和14天测定吸收作用。未断奶猪对液体,钾和氯的吸收不随时间而改变,而猪断奶后4、7和14天对照肠段对水分的吸收明显减少,第4和7天牟氯的吸收低于未断奶对水分的吸收明显减少,第4和 相似文献
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用单克隆杂交技术检测了纽约州666头牛及57头猪分离的埃希氏大肠杆菌的肠毒素(STaP,STb,LT,SLT-1及SLT-Ⅱ)和粘着素(K88,K99,F41,987P)。有367株牛源分离株(45.2%)至少能与一个基因探针杂交,其中223株(33.2%)与F41、112株(16.7%)与K99、82株(12.2%)与987P,96株(14.3%)与STaP,7株(1.1%)与STb杂交。能与K 相似文献
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