搞好企业重组合并中“人”的工作     

胡文辉 《中国禽业导刊》2004,21(18):22-22

往往是细节而不是战略问题让轰轰烈烈的企业在重组合并中一败涂地。  相似文献   

环形泰勒虫裂殖体表面蛋白基因高免疫原性区片段的克隆及其表达     

党志胜罗建勋  蒋锡仕黄孝玢  白启殷宏 《中国兽医科技》2004,34(1):22-26

根据环形泰勒虫TaA1272-1株裂殖体表面抗原(TaSP)基因的序列设计了1对引物，用PCR扩增出该基因长为393bp的高免疫原性区片段(SBxp)。将扩增产物连接到pGEM-T Easy载体上，转化入大肠埃希氏菌JM109中进行克隆。随后将重组质粒pGEM-SBxp和表达载体pGEX-4T-1分别以BamHⅠ、XhoⅠ酶切后，将酶切的目的片段SBxp亚克隆到原核表达载体中构建了重组表达载体pGEX-4T-1-SBxp，并将其转化到BL21宿主菌中。提取重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ酶切、PCR鉴定和测序确证后，阳性克隆用IPTG诱导表达。收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳和Western blotting检测。结果，SBxp基因在大肠埃希氏菌中成功表达，其表达产物为分子质量43ku的融合蛋白，该产物能被牛环形泰勒虫阳性血清所识别。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡Ⅱ型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达   总被引：5，自引：3，他引：5  

孙永科  田占成  王云峰  童光志  智海东  刘胜旺  王玫  杨增岐 《畜牧兽医学报》2005,36(8):800-806

将鸡Ⅱ型干扰素（ChIFNγ）基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插人到鸡痘病毒转移载体中，构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY—ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞（CEF），经过8轮蓝斑筛选，得到纯化的能够同时表达鸡Ⅱ型干扰素和鸡传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒rFPV—ChIFNγS1。rFPV—ChIFNγS1接种28日龄的SPF鸡1周后，可以检测到针对传染性支气管炎病毒S1基因的ELISA抗体，重组病毒接种鸡的CD4^＋、CD8^＋和γδTCR阳性T淋巴细胞的百分比含量显著高于非免疫对照鸡（P％0．05）；免疫4周后用传染性支气管炎LX4强毒株攻击，rFPV—ChIFNγS1免疫组仅有1只出现轻微的呼吸道症状（1／16），而非免疫对照组则有16只发病（16／16），并有2只出现死亡（2／16），表明rFPV—ChIFNγS1对接种鸡可以产生良好的保护效果。  相似文献   

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达     

覃宗华  谢明权  蔡建平  艾哈迈德  彭新宇  魏文康  吴惠贤 《中国兽医学报》2005,25(1):22-25

根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物，用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后，克隆至质粒表达载体pET-32a( )，成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3)，并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10．8％，其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后，用E．necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析，结果为阳性。  相似文献   

出血性大肠杆菌O157eae-stx1/2B融合基因的构建和表达     

陈萍  刘军  祝令伟  孙洋  郭学军  齐翀  冯书章  郑明光 《中国兽医学报》2005,25(3):270-272

构建表达eae和stx1／2B的融合基因，克隆eae基因的C端280个氨基酸残基(Int280)基因部分，以正确地阅读框定向插入到含有stx1／2B融合基因的质粒，构建重组质粒，将其转化于BL21(DE3)，用IPTG进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测，该融合蛋白获得了高效表达。薄层扫描分析表明：目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的50．67％。由于该融合蛋白由eae、stx1B、stx2B等三部分抗原组成，可刺激机体产生针对紧密素和StxB的抗体，在EHEC O157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。  相似文献   

HBV/HAV复合抗原基因在CHO细胞中的表达     

万家余  张玉静  张蕾  韩烨  高建邦  孙博兴  肖安东 《中国兽医学报》2005,25(3):273-275

为探讨HBV／HAV复合疫苗的可行性，利用DNA重组技术将HBsAg与HAW复合多表位抗原基因VPX进行融合，插入到真核表达质粒pVAX1多克隆位点，构建成核酸表达疫苗pVAX1／SVPX，将其转染CHO细胞。转染细胞培养48h后，进行RTPCR、Western-blot、ELISA分析，结果表明HBV／HAV复合抗原基因SVPX能够在CHO细胞内转录、表达，融合蛋白具有HBV和HAV抗原的特性。  相似文献   

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病病毒的构建   总被引：4，自引：1，他引：4  

周国辉  倪健强  田志军  仇华吉  李海燕  童光志 《畜牧兽医学报》2005,36(10):1043-1048

将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒（SIV H3N2）的HA基因插入到伪狂犬病病毒（PRV）通用转移载体pBdTK-Uni中，获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞，经过10代蓝斑筛选、纯化和PCR鉴定获得了一株插入SIV HA基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rPRV-HA。Western blotting和间接免疫荧光试验证实HA基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞（PK-15、IBRS-2、Vero和鸡胚成纤维细胞）对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较，未见显著差异，对第30代重组病毒的HA基因进行序列分析，表明该重组病毒遗传性状稳定。  相似文献   

柔嫩艾美耳球虫重组IL-2-EtMIC-2质粒的免疫效力研究     

李蕴玉  张召兴  李佩国  张香斋  贾青辉  闫艳娟  常超越 《中国兽医杂志》2018,(2)

为了确定鸡IL-2对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株Et MIC-2质粒的免疫增效作用,将构建的pcDNA3.0-IL-2、pcDNA3.0-EtMIC-2和pc DNA3.0-IL-2-EtMIC-2质粒分别免疫雏鸡,研究其对E.tenella攻毒后的免疫保护效果。结果显示,pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2重组质粒的免疫剂量为100μg、150μg时,抗E.tenella攻击的保护率均高达95%,抗求虫指数(ACI)分别为163和165,比免疫pcDNA3.0-IL-2和pcDNA3.0-EtMIC-2组分别提高了91.99%、94.35%和31.88%、33.50%。  相似文献   

家蚕条件基因打靶技术的建立及应用研究进展     

龙定沛  郝占章  刘丹丹  代静  向仲怀  赵爱春 《蚕业科学》2018,44(1):1-15

条件基因打靶技术是通过借助位点特异性重组酶和预先引入宿主基因组的重组酶特异识别位点,在宿主特定发育阶段的组织或细胞中实现目标基因时空特异性定点插入、删除、替换和倒位等突变操作的技术。目前条件基因打靶技术已被广泛应用于拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)、小鼠(Mus musculus)和果蝇(Drosophila melanogaster)等高等真核模式生物的功能基因研究,并逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具。近年来,国内外多个研究机构系统地开展了家蚕(Bombyx mori)条件基因打靶技术的开发研究,目前已经建立了较为完善的基于多种不同位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶技术平台。本文较为全面地介绍目前最为常用的位点特异性重组系统的组成和作用原理,系统概述基于位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶策略及其应用,并对家蚕条件基因打靶技术存在的主要问题和发展趋势进行讨论。  相似文献   

重组猪α干扰素对猪蓝耳病临床治疗效果的研究     

王中明 《当代畜禽养殖业》2018,(2)

目的:评定重组猪α干扰素在猪蓝耳病中的临床疗效。方法:重点筛选本兽医站2015年1月~2016年1月救治的63头蓝耳病病猪,以不同治疗方法分组。分试验组(32头,以重组猪α干扰素救治)和参照组(31头,以常规药物救治),对比两组临床效果。结果:经不同方法救治后,试验组"显效"、"好转"、"无效"、"有效率"95.24%,均高于参照组"显效"、"好转"、"无效"、"有效率"78.05%(P0.05)。结论:临床治疗猪蓝耳病时,以重组猪α干扰素救治,能够大大提升临床有效率,具有较高的临床应用价值。  相似文献