普通烟草铁氧还蛋白I的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析     

孙现超  李勇  周常勇  青玲 《中国农业科学》2010,43(19):3981-3987

【目的】构建普通烟草铁氧还蛋白I(ferredoxin I,Fdn-I)原核表达载体,表达可溶性Fdn-I蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-I在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况。【方法】以Fdn-I全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-I,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-I与GST融合表达载体pEGX-Fdn-I,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-I可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-I蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn-I的表达情况。【结果】在温度为28℃,IPTG诱导浓度为0.3 mmol?L-1条件下表达出大小为41.3 kD的可溶性融合蛋白。纯化获得约4 mg可溶性蛋白,免疫家兔制备了效价为1/6 400的多克隆抗体。Western印迹结果表明,该抗体可以与Fdn-I的原核和酵母表达产物特异性结合。分析表明Fdn-I在ToMV侵染后烟草叶片内含量明显低于其在健康烟草叶片内的含量。【结论】通过Fdn-I大肠杆菌中的可溶性表达,制备获得了其高效价特异性多克隆抗体,利用该抗体检测表明ToMV侵染烟草降低了Fdn-I的表达。  相似文献   

多抗技术对多种鱼类血清免疫球蛋白的研究     

王希龙  龚晖  林能锋  王凡  刘晓东  林天龙 《福建农业学报》2011,26(6):919-924

亲和层析纯化鳜鱼血清免疫球蛋白,制备针对鳜鱼血清免疫球蛋白的兔多克隆抗体,采集常见经济鱼类血清25种,利用优球蛋白法纯化血清,通过间接ELISA的方法筛选与兔抗鳜鱼Ig反应的鱼类血清,结合变性还原条件与非变性非还原条件下的蛋白印迹试验显示:制备的兔抗鳜鱼Ig识别鲈形目中鳜鱼、加州鲈鱼、卵形鲳鲹、尼罗罗非鱼、花鲈、红罗非...  相似文献   

Davana： A New Host Plant for Ralstonia solanacearum from India     

M. K. Prasannakumar  K. N. Chandrashekara  M. Deepa  A. Vani 《农业科学与技术》2011,(1):81-88

Ralstonia solanacearum infecting Davana （Artemisia pallens Wall.） from commercial nurseries in India was isolated on modified semi selective media （SMSA）. Here, we report a new host for Ralstonia solanacearum i.e. davana. It has huge demand in medicinal and aromatic industries. Isolate was confirmed as race-l, biovar-3 by morphological, physiological, biochemical and pathogenicity studies. Two sets of primers （OLI 1 ＆ Y2 and Y 1 ＆ Y2） were used in this study. Further, the identity of the isolate was confirmed by serological diagnostic kit obtained from International Potato Research Center, Lima, Peru and single chain variable fragment antibody specific to Ralstonia solanacearum used to confirm the casual organism.  相似文献   

牛整合素β7亚基片段的表达及多抗制备     

王海霞  杨正涛  陈媛媛  刘文博  张雯  张乃生 《中国畜牧兽医》2011,38(3):100-103

为制备牛整合素β7亚基片段的多克隆抗体,根据GenBank中牛整合素β7基因序列,合成了β7亚基 288 bp(140-427 bp）的cDNA片段,通过DNA重组法构建表达质粒,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。表达产物经Western blotting鉴定,结果证实成功表达了分子质量约为15 ku的β7蛋白。超声破碎细菌后,Ni-NTA树脂进行纯化,免疫兔子获得多抗。间接ELISA检测多抗效价为1∶32000,为进一步研究牛整合素α4β7的功能奠定基础。  相似文献   

检测鸡球虫四价弱毒疫苗抗体应答的ELISA方法的建立及初步应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

李仁良  袁子国  侯杰  谭志坚  林瑞庆  朱兴全  翁亚彪 《中国畜牧兽医》2011,38(8):52-55

本研究旨在建立检测鸡球虫四价弱毒疫苗(柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫)抗体应答的酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步阐明鸡免疫四价弱毒疫苗及攻虫后的抗体应答。将300羽岭南黄鸡分为A(免疫攻虫组)、B(不免疫不攻虫组)、C(不免疫攻虫组)共3个组。A组雏鸡在4日龄时进行首免,11日龄时鸡开始二免,二免完成后(17日龄时)对A组及C组的鸡进行攻虫(28万个4种球虫的混合卵囊/羽),7 d后检查A、C两组鸡的存活率。在鸡二免和三免完成后,分别对A、B组进行采血,通过优化最佳抗原包被浓度、酶结合物工作浓度及最佳血清稀释度,建立了ELISA方法来检测鸡体对球虫四价弱毒疫苗的抗体应答情况。A组鸡血清抗体的平均D值为0.870和0.904,明显高于B组鸡的平均D值0.261和0.270,证明了鸡体免疫疫苗后可以刺激产生相应抗体。免疫鸡攻虫后的存活率和抗体应答的检测结果,都充分说明了此鸡球虫弱毒四价疫苗具有良好的免疫原性,所建立的ELISA方法为今后评价鸡球虫弱毒四价疫苗的免疫效力提供了有效手段。  相似文献   

一种细胞因子检测新方法--ELISPOT技术   总被引：2，自引：0，他引：2  

张辉  潘志明  焦新安 《动物医学进展》2004,25(6):29-31

抗原特异性细胞毒T细胞在控制病毒感染和某些肿瘤中具有重要作用 ,如何准确地定量、定性抗原特异的T细胞反应及评价其作用 ,是细胞免疫学中的一项重要课题。ELISPOT技术是近年来正为众多研究者所认可的一项通过检测细胞因子 ,评价T淋巴细胞功能和特异性的新方法。与其他细胞免疫学方法相比较 ,该方法特异性强、灵敏度高、能够直接检测分泌细胞因子细胞 ,而无需体外扩增。ELISPOT技术对病毒性疾病和肿瘤的发病机制以及体内细胞免疫功能的了解具有重要的意义 ,也为这些疾病的细胞免疫治疗提供了理论依据。目前 ,有研究显示该方法不仅应用于肿瘤免疫及其治疗中 ,而且在细胞内感染微生物、自身免疫性疾病发病机制、治疗等方面均有巨大的发展潜力  相似文献   

中药复方提取物对免疫抑制雏鸡IBD疫苗的免疫增强效果     

朱买勋  唐红梅  闫志强  陈春林  翟少钦 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2019,45(3)

为探索中药复方提取物(由黄芪、女贞子、枸杞子、菟丝子按质量比2∶2∶1∶1制备而成)对免疫抑制雏鸡的免疫增强效果,将180羽3日龄SPF雏鸡随机均分为对照组、模型组、阳性药物组、中药复方提取物高、中、低剂量组,试验组雏鸡连续3 d每天肌肉注射环磷酰胺90 mg/kg,建立鸡免疫抑制模型,对照组注射等量的生理盐水,中药复方提取物高、中、低组每天分别在饮水中添加10.0、5.0、2.5g/L的中药复方提取物,阳性药物组每天添加200 mg/L的黄芪多糖粉,连续添加7 d。试验期38 d。结果显示:饮水中添加10.0、5.0 g/L中药复方提取物,免疫抑制雏鸡末体质量、日均增体质量和脾脏指数均显著高于模型组的(P0.05);添加14 d后,雏鸡血清IgM含量开始高于对照组,并维持在较高水平;21 d后,血清中IgA、IFN–γ和中剂量组的IgG含量显著高于模型组的(P0.05);在接种传染性法氏囊(IBD)疫苗后7 d,雏鸡传染性法氏囊病毒抗体效价提高,接种14 d后,还能维持较高的抗体效价水平,IBD疫苗的免疫效果增强。可见,在本试验条件下,在饮水中添加10.0、5.0 g/L的中药复方提取物能有效提高免疫抑制雏鸡的生长性能,改善其免疫功能,增强IBD疫苗的免疫保护效果。  相似文献   

Effects of Monoclonal Antibody Against Adipocyte-Specific Membrane Protein on Lipid Metabolism in Pigs     

GAO Shi-zheng  LIU Ling-yun  ZHAO Su-mei  HU Hong-mei  GE Chang-rong  LIU Yong-gang  ZHANG Xi 《中国农业科学(英文版)》2008,7(2):232-238

This study was to investigate the regulation of monoclonal antibodies against adipocyte membrane proteins （McAb） on lipid metabolism in pigs. Forty Landrace x Saba pigs were randomly divided into eight groups; the control group was given 10 mL saline and the treat groups were given monoclonal antibody against adipocyte-specific membrane protein with 0.1, 0.5, and 1.0 mg kg-I body weight at 15 and 60 kg body weight, respectively, by intraperitoneal injection. The results showed that McAb could increase, significantly, serum lipoprotein lipase activity and reduce serum nonesterified fatty acid （NEFA） content. Meanwhile, McAb increased content of serum lipid, triglyceride （TG）, cholesterol （CHO）, high density lipoprotein （HDL）, and low density lipoprotein （LDL） both at 15 and 60 kg body weight. However, McAb affected more significantly the lipid metabolism at 15 kg body weight than at 60 kg body weight. Moreover, this effect of McAb on lipid metabolism exhibited dose-dependent effect. These results suggested that this monoclonal antibody increased lipase activity, promoted lipolysis, and utilization of lipid so that McAb could be applied to restrain excessive fat deposition in porcine production through the regulation of fat metabolism.  相似文献   

左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响     

杨永珍  王新卫 《勤云标准版测试》2008,(12)

为探讨免疫增强剂左旋咪唑对新城疫灭活疫苗抗体滴度的影响,将20只20日龄雏鸡,随机分成A、B、C、D4组,每组5只。分别皮下注射新城疫灭活疫苗0.5ml/羽,同时注射A组雏鸡高(0.6mg)、B组中(0.3mg)、C组低(0.15mg)剂量的左旋咪唑,对照组D不加。免疫后0天、7天、14天、21天和28天,翅下静脉采血并检测新城疫抗体滴度。结果显示:免疫前4组抗体水平基本一致,无统计学意义;免疫后7天,14天,21天,高、中、低3组抗体水平基本一致,4组的抗体水平相差均在2个滴度以内,统计分析无明显差异;免疫后28天,B组抗体水平较高。统计分析显示,对照组与高、中、低3组均有显著差异,但无剂量差异;在高、中、低3组中,以中剂量添加最佳,抗体效价高(7.2log2),但中剂量组与高、低组的差异不显著。这表明,左旋咪唑的添加提高新城疫抗体滴度,并且与免疫后时间长短有关系。从趋势看,随着时间的推移,添加组的抗体水平好于对照组。  相似文献   

茶毛虫核型多角体病毒ph基因抗体的制备与利用     

WANG Li-zhong  肖强  ZHANG Chuan-xi 《茶叶科学》2008,28(4)

以茶毛虫核型多角体病毒(EupsNPV)的基因组DNA为模板,PCR扩增出全长为741bp的ph基因编码区片段。将Ep-ph编码区插入pET-28-a,构建了原核表达载体pET-28-a-Ep-ph,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行了高效的表达。以经表达纯化的目的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,制备了EupsNPV的ph抗体,测得的抗体效价为6.4×104。Western blotting检测表明制得的抗体对核型多角体病毒有良好的特异性。利用制备的抗体用间接ELISA方法对茶毛虫病毒样品进行了定量分析,得到线性回归方程为y=0.4152x-0.8299,相关系数r=0.9897(P<0.01)。间接ELISA方法表明该抗体可以用于核型多角体病毒生物农药的定量检测,从而为核型多角体病毒的检测农药制剂提供了一种准确有效的方法。  相似文献