对鳞翅目害虫有活性的cry1C基因的克隆和表达   总被引：2，自引：0，他引：2       下载免费PDF全文

宋福平  张杰  韩岚岚  高继国  黄大昉 《植物保护学报》2003,30(2):161-165

在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上，构建了Btc001菌株质粒DNA HindⅢ片段的文库，并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCIR-RFIP)方法筛选出含有crylC6全长基因的13．5kb大片段，酶切分析得到该片段的物理图谱，BamHI和EcoRI切完成了6．5kb含全长基因的亚克隆，并对这条6．5kb片段亚克隆、测序，序列在国际核酸序列数据库(GenBank)登记(AY007686)，并由Bt杀虫晶体蛋白基因国际命名委员会命名为cry1Cb2基因。根据序列设计了一对用于扩增全长基因的引物S581CB和S381CB，扩增产物插入表达载体pET-21b中，诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达。表达产物对小菜蛾(Plutella xylostella)表现出较高活性，LC50达到7．9μg/ml。  相似文献   

一个与稻瘟病菌无毒基因AVR-Pik~m连锁的SCAR标记的分离   总被引：6，自引：2，他引：6  

刘俊峰  张国珍  马秋娟  彭友良 《植物病理学报》2003,33(2):151-155

 本研究将以前在稻瘟病菌菌株S1522获得的与决定对水稻品种梅雨明无毒性的基因(AVR-Pik^m)相连锁的1个RAPD标记OPO12₁₀₀₀进行了克隆和鉴定。核苷酸序列测定与分析结果表明:OPO12₁₀₀₀的大小为946个碱基,不含有与已报道的稻瘟病菌Mg-SINE、Fosburry、Magyy、Grasshopper、Pot2以及Pot3等同源的重复序列。根据OPO12₁₀₀₀的核苷酸序列,设计了1对24个核苷酸的特异引物,对无毒表型亲本S1522和毒性表型亲本S159、无毒表型群体基因池、毒性表型基因池以及有性杂交后代108个菌株进行了PCR扩增,所有无毒表型的菌株均能特异性地扩增出1条与OPO12₁₀₀₀大小相同的DNA条带,而毒性表型的菌株除5个重组个体外,均不能扩增出这条特异带。此结果表明,与稻瘟病菌无毒基因AVR-Pik^m连锁的RAPD标记OPO12₁₀₀₀被成功地转化为SCAR标记,为进一步通过染色体步移克隆该无毒基因奠定了基础。  相似文献   

转基因水稻对稻瘟病的抗性研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

杨祁云  许新萍  朱小源  冯道荣  李宝健 《植物病理学报》2003,33(2):162-166

 采用苗期初筛、复筛、抗谱测定和田间自然诱发试验等不同鉴定方法,对经分子检测证明已整合有碱性几丁质酶基因和β-1,3-葡聚精酶基因的22个转化系的转基因水稻植株进行稻瘟病抗性鉴定研究,筛选出对稻瘟病的抗性比原种对照七丝软占有明显提高的一系列转基因水稻品系,其中表现高抗的有来自F4-9转化株系的7个品系。高抗材料的R7代品系,经室内抗谱测定及田间病圃试验结果,仍然表现高抗稻瘟病。本研究通过转基因技术,成功地将优质感病品种改良成高抗品系,研究结果证明了利用基因工程手段培育抗病水稻新品种是一个非常有希望的育种途径。  相似文献   

利用PCR技术同时鉴定番茄抗根结线虫和抗斑萎病毒基因   总被引：7，自引：1，他引：7  

李君明  宋燕  徐和金  周永健  Carole Caranta  冯兰香 《园艺学报》2003,30(6):678-682

 利用同一PCR反应体系，对分别与番茄抗根结线虫的 基因和抗斑萎病毒(1w V)的Sw一5基因紧密连锁的SCAR标记进行了同时扩增筛选，扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合，其中与基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记，抗感试材均产生750 bp的特异片段，纯合和杂合抗病基因型试材存在 I酶切位点，酶切后分别产生了570 bp、160 bp和750 bp、570 bp、160 bp的不同特异性片段，而感病基因型试材无 I酶切位点；与Sw一5基因紧密连锁的SCAR2标记为显性标记，只有抗病试材扩增出400 bD的特异性片段。经反复验证，结果稳定准确可靠，可用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。  相似文献   

大白菜细胞核雄性不育基因向自交系97A407的转育   总被引：9，自引：0，他引：9  

许明  白明义  魏毓棠 《中国蔬菜》2003,1(2):8-10

根据复等位基因遗传假说 ,利用大白菜核不育系 9810 9和已知基因型的甲型两用系可育株 99135 2作为不育源 ,以大白菜自交系 97A40 7为目标亲本 ,经过 5个世代的转育 ,获得了具有 97A40 7遗传基因型的新甲型两用系、临时保持系和雄性不育系。  相似文献   

差异显示法研究不同锌源对组织基因表达的影响     

虞泽鹏  乐国伟  施用晖 《畜牧与兽医》2004,36(4):4-6

选用Avine肉用仔鸡作为试验对象 ,饲喂硫酸锌和蛋氨酸锌 2种锌源。采用银染差异显示技术进行差异基因的初步筛选。结果成功回收扩增差异条带 2 6条 ;其中加锌组 (硫酸锌组和蛋氨酸锌组 ) 2 3条 ,3条为缺锌组所特有。在加锌组的 2 3条中 ,6条为蛋氨酸锌组所特有 ,1 3条为硫酸锌组所特有 ,其余 4条为 2组所共有。这些初步筛选得到的差异基因尚需进一步进行克隆、测序和杂交进行验证。  相似文献   

猪大肠杆菌水肿毒素SLT-IIeA基因的克隆和序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘国平  吴斌  刘梦元  何启盖  陈焕春 《动物医学进展》2004,(1)

研究以本地猪水肿病大肠杆分离物ED1株为材料 ,利用 PCR克隆了含猪水肿病大肠杆菌 (VTEC) slt-IIe A基因 987bp的片段 ,并测定了含该克隆片段的 Bam HI、Hind 酶切片段的核苷酸序列。结果表明 ,slt-IIe A基因的编码区全长 960 bp,编码 3 1 9个氨基酸的蛋白质 ,序列与国外报导的 S1 1 79株进行比较发现其核苷酸同源性为 98.9%。经推导的氨基酸序列的同源性为 99.7%。这为进一步研究 slt-IIe A的生物学特性、水肿病的分子诊断及其防制打下基础  相似文献   

百合花发育相关MADS box基因的克隆   总被引：2，自引：1，他引：2  

张云  刘青林  欧阳青  蔡文启 《园艺学报》2004,31(3):332-336

 利用RT-PCR的方法，从百合中克隆得到了3个接近全长的花发育相关MADS box基因片段 LfMADS1-3。其中LfMADS1和LfMADS3以往未见报道，分别与多种作物的AG、SEP同源基因具有较高的同源性；LfMADS2与已发表的LMADS2对应区段的氨基酸同源性高达98.99%，推测可能是同一个基因。  相似文献   

真空渗入法转pinⅡ基因菜薹外源基因的遗传与表达     

徐恒戬  刘凡  王秀峰  赵泓  曹传增  罗晨 《园艺学报》2004,31(4):511-513

 本研究对利用真空渗入法获得的转bar基因及pinⅡ基因菜薹，进行了外源基因的遗传及表达情况分析。结果表明通过该方法获得的转基因植株，外源基因能够稳定遗传。bar基因在 代的分离大部分符合孟德尔遗传规律，但也有不符合的群体；pin II基因在 代中稳定表达，但各个株系之间的表达水平差异较大，因而各个株系的抗虫效果也具有显著差异，即使具有相同外源基因拷贝数的各个株系，其PIN I／蛋白表达量和抗虫效果也具有显著差异。  相似文献   

农杆菌介导的蝴蝶兰基因转化系统的建立   总被引：9，自引：1，他引：9  

柴明良  金斗焕 《园艺学报》2004,31(4):537-540

 针刺后的蝴蝶兰‘White Hikaru’的类原球茎(PLB)，与含绿色荧光蛋白基因( )和潮霉素磷酸转移酶基因(^p￡)的pCAMBIA 1300一SmGFP的根瘤农杆菌LBA4404 共培养，培育出了转基因的蝴蝶兰。经绿色荧光蛋白检测和Southern印迹，证实了再生植株中含cop基因和hpt基因。  相似文献