牛传染性鼻气管炎间接ELISA诊断方法的建立   总被引：7，自引：0，他引：7  

朱远茂王海燕  薛飞辛九庆  赵立平童光志 郭巍李兆利  相文华 《中国兽医科技》2005,35(12):959-963

以牛肾细胞系（MDBK）培养牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）Bartha Nu/67株,经超速离心纯化病毒,再经超声破碎处理后作为诊断抗原,建立了检测牛血清IBRV抗体的间接酶联免疫吸附试验.该ELISA的判定标准为：血清D490 nm值大于0.369的判为阳性,小于0.295的判为阴性,在0.295与0.369之间的为可疑.特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性高、重复性好.与法国进口ELISA抗体诊断试剂盒比较,其符合率为96.3%;与中和试验比较,符合率为95.8%,且敏感性更高.应用该诊断方法调查了我国部分地区IBRV的感染情况,结果显示,这些地区的IBRV感染率为67.1%.  相似文献   

马传贫驴白细胞弱毒疫苗株基质蛋白基因的克隆与表达   总被引：5，自引：0，他引：5  

薛飞  朱远茂  王晓钧  杨建德  相文华  刘志英  赵立平  吕晓玲  沈荣显 《中国预防兽医学报》2003,25(1):1-4

从感染驴白细胞的马传贫驴白细胞弱毒疫苗株前病毒DNA中克隆了编码基质蛋白（p15)的基因，并在大肠杆菌中进行了表达，所表达的蛋白是一种可溶性的融合蛋白，其氨基端带有6个组氨酸的标签，因此可以用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下进行纯化，在间接ELISA和免疫印迹试验中，重组的基质蛋白可与马传贫阳性血清样品发生反应，而与健康马血清无任何反应，这表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性，可用于马传贫弱毒疫苗株在体内外复制及在接种马体人免疫应答的研究中。  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的表达与多克隆抗体制备     

王雪枝  朱远茂  史鸿飞  严昊  蔡红  王姝  马磊  薛飞 《黑龙江畜牧兽医》2014,(5):4-8

为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得阳性重组质粒后进行测序,再将测序正确的阳性重组质粒转化BL21表达菌,经扩大培养及IPTG诱导后获得以包涵体形式存在的重组E0蛋白,经亲和层析法纯化后进行Western-blot检测,同时以纯化的E0蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并对E0多克隆抗体进行了中和试验和免疫荧光检测。结果表明:E0蛋白具有良好的反应性;E0多克隆抗体的病毒中和试验测定其中和抗体效价达到1∶128,具有良好的反应性和特异性。说明制备的重组E0蛋白多克隆抗体可以用于BVDV的检测。  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

高欲燃  朱远茂  康健  史鸿飞  李娇  任宪刚  冯军科  于作  薛飞 《中国预防兽医学报》2011,33(3)

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。  相似文献   

猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用   总被引：6，自引：0，他引：6  

赵宇军  许冬梅  朱远茂  薛飞  相文华 《畜牧兽医学报》2006,37(11):1198-1201

为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法，根据已克隆的戊型肝炎病毒株DQ1结构蛋白基因（ORF2）的抗原性及水溶性分析，在其序列上设计一对引物，上游引物和下游引物分别带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点，用PCR方法扩增，获得369bp大小的相应片段，位于ORF2128—497bp处。将扩增片段克隆到pET-32a构建了原核表达载体pET32a—D001，经测序证明该片段正确插入。将pET32a—D001转化BL21并诱导表达，SDS-PAGE结果显示表达蛋白大小为33ku，Western-blot结果表明表达的蛋白质具有生物活性，将表达蛋白作为诊断抗原，对反应条件进行优化，初步建立了ELISA诊断方法。  相似文献   

Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备     

朱远茂  任宪刚  史鸿飞  高欲燃  于作  冯军科  相文华  薛飞 《中国预防兽医学报》2010,32(4)

本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。  相似文献   

牛呼吸道合胞体病毒研究进展     

冯军科  薛飞  朱远茂  任宪刚  史鸿飞  高欲燃 《中国奶牛》2010,(9):1-4

<正>牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原之一。本病早在1968年就有记载,1970年BRSV首次从患有呼吸道疾病的牛体中分离到[1]。其危害性在于BRSV感染发病率很高,达到60%～80%,死亡率在一些爆发中也能达到20%以上[2,3]。本病多发于秋冬季节,主要感染  相似文献   

我国主要猪病毒性腹泻疾病的现状和对策     

冯力  佟有恩  李伟杰  朱远茂 《畜牧市场》2009,(3):33-35

在引起猪腹泻病的各种病因中,病毒性腹泻的危害是最为严重的,它可以引起仔猪的死亡,成猪的掉膘,饲料报酬的降低,增加人工费和药费的开支等危害,是危害养猪业的重要传染病。  相似文献   

马传染性贫血病毒基质蛋白p15单克隆抗体的制备     

张萍  于在江  韩秀娥  王雪峰  朱远茂  周建华  魏萍 《中国预防兽医学报》2009,31(9)

为制备抗马传染性贫病毒(EIAV)的单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的重组EIAV基质蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了抗EIAV基质蛋白p15抗体的杂交瘤细胞.应用重组p15和EIAV总蛋白为抗原建立的ELISA以及EIAV感染细胞的间接免疫荧光法,对杂交瘤细胞进行了有限稀释法筛选,获得了7株稳定分泌抗p15抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为:1F12、1E2、1E3、4B10、4H7、5E5、4G5.这些抗p15 MAb均能与感染驴胎皮肤细胞的EIAV和经SDS-PAGE分离的EIAV总蛋白中的相应蛋白结合.抗体效价叠加实验表明,这7株MAb中含有至少3种识别不同抗原决定簇的抗体.这些p15 MAb的获得有助于对EIAV和慢病毒的深入研究.  相似文献   

我国主要猪病毒性腹泻疾病的现状和对策   总被引：1，自引：0，他引：1  

冯力  佟有恩  李伟杰  朱远茂 《养猪》2001,(4):37-39

在引起猪腹泻病的各种病因中 ,病毒性腹泻的危害是最为严重的 ,它可以引起仔猪的死亡 ,成猪的掉膘 ,饲料报酬的降低 ,增加人工费和药费的开支等危害 ,是危害养猪业的重要传染病。1　引起病毒性腹泻的主要病毒猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒是我国流行性病毒性腹泻的主要病原 ,同时其他病毒如肠病毒感染、猪腺病毒感染、星状病毒、杯状病毒、诺瓦克病毒、细小病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒也可以引起猪只的腹泻 ,可以说 ,病毒性腹泻的病因是十分复杂的 ,应引起足够的重视。2　我国流行的主要病毒性腹泻病及其特点2 1　猪传染性胃肠…  相似文献