线粒体凋亡途径在玉米赤霉烯酮致大鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用   总被引：1，自引：1，他引：0  

朱启航  司梦雪  李茜  刘双双  邹辉  顾建红  袁燕  刘学忠  刘宗平  卞建春 《中国畜牧兽医》2019,(5)

为探讨玉米赤霉烯酮(zearalenon,ZEA)雄性生殖毒性作用机理,研究ZEA诱导大鼠睾丸支持细胞(sertoli cell,SC)的凋亡途径,试验选取大鼠原代SC为研究材料,用不同浓度ZEA(0、5、10、20μmol/L)处理SC 24 h后,采用实时荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2 mRNA表达水平;用Western blotting法检测Bax、Bcl-2等线粒体凋亡途径相关蛋白表达;同时检测了20μmol/L ZEA联合Caspase-8抑制剂(Z-IETD-FMK)处理对SC凋亡率和线粒体凋亡相关蛋白的影响。结果显示,与对照组相比,20μmol/L ZEA组细胞Bcl-2转录水平显著下降(P0.05),Bax转录水平显著上升(P0.05);10、20μmol/L ZEA组Bax/Bcl-2比值及Cyto-CytC、Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3表达量极显著上升(P0.01),而Mito-CytC表达量极显著下降(P0.01);与ZEA组相比,ZEA与Z-IETD-FMK联合处理可使ZEA诱导的SC凋亡率极显著下降(P0.01),tBid/Bid、Bax/Bcl-2、Cyto-CytC、Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase9蛋白表达显著或极显著下降(P0.05;P0.01),而Mito-CytC表达量极显著上升(P0.01)。综合试验结果,ZEA能够通过线粒体途径诱导大鼠SC发生凋亡。  相似文献   

苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

项自来  王玲  夏苏干  邹辉  顾建红  袁燕  刘学忠  刘宗平  卞建春 《中国畜牧兽医》2019,46(3):849-857

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R^2=0.990),其IC₅₀为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。  相似文献   

镉致鸡胚胫骨软骨发育不良的研究     

王果帅  刘丹  沈小兰  张雪晴  李雅文  袁燕  邹辉  卞建春  刘学忠  刘宗平  顾建红 《畜牧与兽医》2022,(1):112-117

为了研究镉对鸡胚胫骨软骨发育的影响,选取体重相近的SPF鸡胚120枚随机分为4组,每组30枚,孵化6 d后在鸡胚气室打孔,其中对照组向卵黄囊注射PBS50μL,其他3组分别向卵黄囊注射0.05、0.1和0.2 mg/mL醋酸镉50 μL,处理10d,通过石蜡切片HE染色、阿利新蓝染色观察胫骨软骨发育情况;扫描电镜观察软...  相似文献   

镉对原代培养大鼠肝细胞的损伤作用   总被引：7，自引：1，他引：6  

王捍东  邢华  卞建春  刘学忠  任建新  王宗元 《中国兽医学报》2000,20(6):580-583

用活体肝脏灌注、胶原酶消化法分离大鼠肝细胞并作原代培养,以CdCl2(0～250或500umol/L）处理,测定培养上清液中LDH、ALT、ARG和细胞内GSH-Px、GSH、MDA等的含量,探讨镉对肝细胞的损伤作用和脂质过氧化状况。结果当Cd≥10和5umol/L时,细胞内LDH、ARG泄漏分别明显增加,GSH-Px活力显著受到抑制,GSH含量和MDA产生随着镉的剂量增大而增加（Cd≥50 umol/L）。认为镉对肝细胞的损伤和对细胞膜完整性的破坏,与脂质过氧化有关;镉处理后细胞中GSH增加可能与镉抑制了还原型谷胱甘肽向氧化型谷胱甘肽的转化有关。镉可直接抑制ALT本身的活性,因而认为以细胞内ALT泄漏作为镉诱导细胞损伤的评价指标时要予以注意。  相似文献   

乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响及其机理研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘学忠  薛彬  袁燕  卞建春  刘宗平 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2008,29(4)

在大鼠肝细胞培养液中加入不同浓度乐果,染毒12、24 h后,检测肝细胞凋亡率、细胞内Ca^2＋浓度、活性氧（ROS）及线粒体膜电位（Δψm）变化,并观察凋亡细胞。结果表明：染毒后肝细胞出现了凋亡变化;细胞凋亡率明显升高,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异显著,且呈时间-剂量效应;3μmol.L^-1组细胞内Ca^2＋浓度极显著高于对照组,之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca^2＋浓度逐渐下降;ROS水平为3-100μmol.L^-1时随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而300μmol.L^-1组略有下降,除3μmol.L^-1组外,其余各处理组与对照组相比差异均极显著;Δψm除24 h 300μmol.L^-1组外其余各处理组均持续下降。表明低剂量乐果可诱导肝细胞凋亡,细胞内Ca^2＋、ROS和Δψm也可能参与这一过程。  相似文献   

破骨细胞的形成和活化     

顾建红  刘俊栋  刘学忠  刘宗平 《江苏农业学报》2008,24(1):85-88

破骨细胞(Osteoclast,OC)是一种高度分化的多核巨细胞。其形成和活化受RANKL/RANK/OPG和TNFα/IL-1两种机制的调控。1,25-(OH)2-D3作用于成骨细胞(Osteoblast,OB)表面受体,促进核因子κB受体活化子配体(Receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达,从而刺激OC的生成和活化。而骨保护素(Osteoprote-gerin,OPG)通过与OC表面核因子κB受体活化子(Receptor activator of NF-κB,RANK)竞争性地结合RANKL,阻断RANKL介导的OC分化和骨吸收,从而对调控和维持骨骼正常代谢发挥作用。此外,中、高浓度的钙、磷对OC的生成和活化也具有抑制作用。  相似文献   

浅谈北部高寒区大豆亩产300公斤的攻关技术     

刘全江  刘学忠 《大豆科技》1998,(5):21-22

良种、良法结合是获得高产的重要因素。１９９７年讷河市孔国乡双发一屯史洪学,用１公斤北垦９４－１１大豆新品系的种子,进行稀植高倍繁殖,竟获得亩产２０５公斤的产量,充分说明了这一论点。他采用的主要措施：破垄夹肥,亩夹过圈粪１３吨,二铵９公斤,尿素５公斤...  相似文献   

山东省苹果生产效益影响因素分析     

梁岩岩  孟子恒  刘学忠 《河北农业科学》2023,(5):95-98

基于山东省烟台、威海、青岛、临沂和滨州地区386份有效调查问卷数据,运用多元回归模型分析生产成本、社会经济、政策环境、市场因素对苹果效益的影响,结果显示：(1)核心解释变量中,种苗投入(X₅)负向影响苹果生产效益,化肥农药投入(X₁)、劳动力投入(X₂)、土地面积投入(X₃)、机械投入(X₄)、将销售渠道(X₆)和价格变动程度(X₇)显著正向影响苹果生产效益,即化肥农药每增加1(劳动力投入每增加1、土地面积投入每增加1、机械投入每增加1),苹果生产效益增加0.286 (0.256、0.330、0.079);销售渠道每增加1(价格每提高1),苹果生产效益增加0.357 (0.257)。(2)控制变量中,是否外出打工(X₁₂)负向影响苹果生产效益,文化程度(X₁₁)和从业年限(X₁₃)在0.1水平上显著正向影响苹果生产效益,即文化程度越高、从业年限越长,越利于提高苹果生产效...  相似文献   

玉米赤霉烯酮对小鼠T淋巴细胞活性氧及线粒体膜电位的影响     

张心怡  吴云平  蔡国栋  邹辉  袁燕  顾建红  刘学忠  刘宗平  卞建春 《畜牧与兽医》2018,(8)

为揭示霉菌毒素玉米赤霉烯酮(ZEA)免疫抑制作用的机制,试验研究了ZEA对小鼠离体刀豆蛋白(Con A)活化T淋巴细胞内活性氧及线粒体膜电位水平的影响。采用免疫磁珠分选高纯度小鼠T淋巴细胞后,以Con A(5μg/m L)作为T细胞的特异性活化剂,以不同浓度ZEA染毒处理细胞24 h后,设立细胞空白组(只有细胞)、Con A组(细胞+Con A)、20μmol/L ZEA组(细胞+Con A+20μmol/L ZEA)、40μmol/L ZEA组(细胞+Con A+40μmol/L ZEA),利用流式细胞术检测了小鼠T淋巴细胞活性氧及线粒体膜电位的水平。结果:细胞在活化培养24 h后,与阳性对照组相比,空白组细胞的活性氧(ROS)水平很低,ZEA在40μmol/L时,与空白组相比ROS水平显著上升(P0.05)。此外,细胞在活化培养24 h后,与空白组相比,ZEA在40μmol/L时细胞内线粒体膜电位极显著下降(P0.01)。研究表明,玉米赤霉烯酮可以影响小鼠T淋巴细胞的正常氧化还原,进而影响T淋巴细胞的正常功能。  相似文献   

PERK在玉米赤霉烯酮诱导TM4细胞凋亡中的作用     

冯楠楠  王冰洁  郑王龙  司梦雪  邹辉  顾建红  袁燕  刘学忠  刘宗平  卞建春 《中国兽医学报》2018,(7)

以TM4细胞(小鼠睾丸支持细胞株)为材料,用不同浓度的玉米赤酶烯酮(zearalenone,ZEA)染毒,利用透射电子显微镜(设0,5,10,20μmol/L ZEA浓度组),流式细胞仪、Western blot等技术检测了细胞超微结构、凋亡率、凋亡相关调控蛋白以及内质网应激相关蛋白的变化(设0,0.1,1,10,20μmol/L ZEA浓度组);通过转染PERK(蛋白激酶R样内质网激酶)siRNA,沉默PERK基因后检测了ZEA诱导TM4细胞凋亡率和凋亡相关蛋白的变化。结果显示:与对照组相比,20μmol/L浓度组损伤最为严重。随着ZEA浓度的增加,细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的值逐渐升高,cleaved caspase 9、cleaved caspase 3蛋白表达量均呈升高趋势,1μmol/L以上染毒组均较各自对照组有极显著差异(P0.01);内质网应激相关蛋白BIP、CHOP的表达量也呈升高趋势,10μmol/L以上染毒组BIP、0.1μmol/L以上染毒组CHOP的表达量均较对照组有显著或极显著差异(P0.05或P0.01);PERK通路蛋白含量在10μmol/L时最高,20,30μmol/L时逐渐降低,但各染毒组与对照组相比呈显著或极显著差异(P0.05或P0.01);TM4细胞caspase3的活性和凋亡率均呈升高趋势,10μmol/L以上染毒组caspase3的活性较对照组均有极显著差异(P0.01),各染毒组细胞的凋亡率较对照组均有极显著差异(P0.01)。与10μmol/L ZEA处理组相比,siRNA PERK+10μmol/L ZEA组细胞凋亡率呈显著下降(P0.01),Bax/Bcl-2比值、cleaved caspase 3、cleaved caspase 9表达量均下降(P0.05或P0.01)。结果表明,ZEA可触发TM4细胞内质网应激,通过PERK-eLF2α-ATF4信号通路诱导细胞发生凋亡,PERK信号通路在ZEA诱导TM4细胞凋亡中发挥重要作用。  相似文献