鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的研究进展   总被引：8，自引：1，他引：7  

贺秀媛孔宪刚  刘胜旺王建华 刘丽玲 《动物科学与动物医学》2001,18(2):36-38

  相似文献   

马传染性贫血驴强毒gp90基因的克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘永刚  张宝山  孔宪刚  杨威  刘胜旺  贾永清 《中国预防兽医学报》2003,25(4):244-248

以EIAV驴强毒株D-AmRNA为模板，利用RT-PCR技术，扩增了约1．4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序。测序结果表明所扩增的1338个核苷酸片段含有完整的gp90基因全序列。核苷酸和氨基酸序列比较分析结果表明：D-A EIAV与国内分离株辽系强毒L株差异率仅有1．8％，而与国外毒株(克隆1369，WENVl7、WENVl6、PSPEIAVl9)核苷酸差异率在35．5％～37．2％之间；D-A株与国内分离株L株氨基酸水平差异率在2．9％，而与国外毒株氨基酸水平上的差异率在42．6％—46．0％；D-AEIAV有19个N-连接糖基化位点，L株、WENVl7和WENVl6是18个，克隆1369、WENVl6和WENVl7亲本毒株PSPEIAVl9是12个。  相似文献   

单抗夹心ELISA法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究     

刘滨东  孔宪刚 《中国畜禽传染病》1997,(1):36-39

利用常规法建立分泌抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的单抗细胞株，选其中特异性强、稳定性好、分泌抗体效价高的两株单抗２（１）和２（４），用于建立单抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＢＶ，该方法仅与ＩＢＶ，呈阳性反应，而与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊炎病毒、禽腺病毒、鸡传染性喉气管炎、鸡支原体等病原体均呈阴性反应。１４日龄ＳＰＦ鸡接种ＩＢＶ后，用本方法对其两周内的口腔棉拭样品进行跟踪检测，结果检出率为８０％。将  相似文献   

抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用     

严隽端  王秀荣  石忠舫  刘明  刘晓东  江国托  刘滨东  孔宪刚 《中国预防兽医学报》1997,(4)

鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化，电镜观察。以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６、９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞。特异性试验表明它们与鸡的传染性支气管炎、痘病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得的三株单抗建立单抗夹心－ＥＬＩＳＡ法基础上，首次建立了快速检测喉气管炎感染的ＥＬＩＳＡ试剂盒，对ＩＬＴＶ纯病毒的最小检出量为３１．０ｎｇ／ｍｌ病毒蛋白。以该试剂盒对黑龙江省哈尔滨地区、辽宁省沈阳、大连地区、山东省济南及上海等地６５６５份喉部株拭样品进行检测，共检出阳性１１５４头份。对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行平行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１１２／１１２），阴性符合率为９５％（３８／４０）。研究表明，该试剂盒特异性强，重复性好。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平检测提供了新的可靠方法。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒DB株核蛋白基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

高磊  王玮  刘胜旺  谷守林  孔宪刚  蔡红 《中国预防兽医学报》2002,24(3):168-171

利用PT－PCR方法扩增鸡传染性支气管炎病毒（IBV）DB株的核蛋白基因，并对其序列进行了测定，DB株IBV的核蛋白基因长度为1230bp，编码蛋白由409个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较，发现DB株与澳大利亚群毒株的亲缘关系最为密切。同时构建了杆状病毒重组转移载体pBlue-DB-N，将其与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞，经过3轮蚀斑纯化和聚合酶链式反应（PCR）鉴定，获得重组杆状病毒rBac-DB－N。SDS－PAGE分析和Western blot检测的结果表明DB株IBV核蛋白基因基因在重组杆状病毒感染原Sf9昆虫细胞内获得表达，融合蛋白最大表达量占细胞蛋白总量的19．4％左右。  相似文献   

新城疫及其检测方法研究进展     

刘怀然  孔宪刚 《畜牧兽医科技信息》2008,(10)

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病,被国际动物卫生组织(OIE)列为危害禽类的两种A类传染病之一,因此也是SPF禽类病毒学检测的一个重要指标。自1926年首次发现新城疫至今,NDV在其宿主范围、致病性、基因型、毒力等方面不断发生变化,给NDV的检测增  相似文献   

应用反转录聚合酶链式反应检测鸡Th1样淋巴因子mRNA表达的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘胜旺  孔宪刚  陈洪岩 《中国预防兽医学报》2000,22(1)

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5匹马外周血单个核细胞表达MHC-Ⅰ类分子的差异分析     

马建  郭巍  沈楠  孔宪刚  沈荣显  周建华 《畜牧兽医学报》2007,38(12):1414-1420

基于RT-PCR方法，扩增了用于马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus，EIAV）减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC—I类分子的大部分基因，具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因，并进行了PCR产物的克隆和测序。试验马匹外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMC）的总RNA提取物经RT-PCR扩增，并将所得产物进行T-A克隆。从每匹马的所有克隆中，分别随机挑取鉴定为阳性重组质粒的21～23个克隆用于测序分析。研究结果表明，5匹试验马匹各自具有3～5个等位基因，由于MHC-Ⅰ分子等位基因表达的共显性特征，可以推测马的基因组内可能存在2～3个基因座对应于这些等位基因，这与国外已有研究结论基本一致。另外，不同马匹PBMC表达的MHC-Ⅰ类分子的差别水平不一致。除了6号与7号和10号马之间MHC-Ⅰ类分子的差异较大，无相同或高度相近的经典MHC-Ⅰ类分子序列外，各马匹间均表达具有1个或1个以上的相同或高度同源的对应经典的MHC-Ⅰ类分子的mRNA。以上研究结果既可作为正在开展的EIAV减毒疫苗株CTL表位研究的基础性、支持性数据，又可进一步丰富国内马的经典MHC-Ⅰ分子多态性方面的相关研究。  相似文献   

高致病禽流感时空分布规律研究——温度对我国禽流感传播影响的时空模式分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

崔尚金  王靖飞  吴春燕  李曦  符芳  童光志  孔宪刚 《畜禽业》2005,(11):7-9

为研究温度对禽流感传播的影响,本文根据禽流感传播最适温度6～16℃确立了风险分析标准,以中国各个气象站的各月平均气温为基础数据,运用本实验室二次开发的地理信息系统软件绘制了风险图。研究结果显示风险区域随时间变化而转移,其时空模式为:1-5月,风险区域从南向北迁移;6-8月,除青藏高原外,全国基本处于低风险;9-12月,从北向南迁移。其时空转移规律与2004年第一季度的禽流感疫情扩散趋势基本吻合。  相似文献   

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型7型25-4株ApxⅡCA基因的克隆和基因缺失   总被引：2，自引：0，他引：2  

王春来  刘思国  王牟平  彭永刚  宫强  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2004,26(2):94-97

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型7型25-4株ApxIICA基因用特异性引物进行PCR扩增并克隆到T载体上,构建重组质粒pMD18-ApxIICA,将pMD18-ApxIICA转化到E.coli JM83中并测序.序列分析表明血清型7型25-4株ApxII CA与其它血清型(5型和9型)核苷酸序列同源性达98%以上,氨基酸序列同源性达90%以上.利用ApxIIC基因内部单一的SpeI位点,设计特异性的引物,利用PCR技术在ApxIIC基因内部缺失165bp的核苷酸片段,PCR产物再用SpeI进行酶切,并体外连接构建得到含有ApxIIC缺失基因的重组质粒pMD18-ApxII△/CA.  相似文献