鸡传染性支气管炎病毒的快速检测   总被引：4，自引：0，他引：4  

刘思国  康丽娟  江国托  刘明春  孔宪刚  杨宏伟  刘忠贵  李从寿  宋春青  霍兰享  卢景良 《中国预防兽医学报》2002,24(5):386-390

本试验建立了一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒的通用性PCR方法。通过对纯化后IBV核蛋白基因进行的直接PCR及套式PCR扩增表明，两次PCR产物的大小为0.7kb和0.5kb，与实际设计相符。而对照的NDV主IBDV的PCR扩增产物均为阴性。用IBV HB（华北）株感染SPF鸡后，应用我们所建立的PCR方法去检测不同时期所采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏中的IBV，在SPF鸡感染IBV后的21天仍然能够检测到IBV的基因组，Southern blot杂交试验证明了我们获得的PCR产物为IBV的核蛋白基因。对30份自然感染病料的检测表明，本实验所建立的PCR方法检测阳性数为15份，阳性率为50％（15／30）；鸡胚接种检测的阳性数为17份，阳性率为56．7％（17／30）；IFA检测的阳性数11 ，阳性率为36．7％（11／30）。PVR检测法与鸡胚接种方法的阳性符合率为93．3％（14／15），统计学分析表明，P＞0．05，差异不显著，而PCR检测法与IFA的阳性符合率为60％（9／15）。结果证明本实验所建立的PCR检测方法具有敏感、特异、快速等特点，适用于不同来源及不同血清型IBV的检测。  相似文献   

鸡Th1样淋巴因子mRNA的体外表达   总被引：6，自引：0，他引：6  

刘胜旺  孔宪刚  陈洪岩  张宝山  童光志  马云燕  卢景良 《中国兽医学报》2001,21(2):137-140

应用RT－PCR技术研究了鸡脾细胞在体外受到丝分裂原ConA的刺激后，其Th1样淋巴因子的体外表达动态，结果表明，鸡脾细胸在ConA诱导培养1，2，3，4，8，12，24h后，均表达a-干扰素mRNA,且未经有丝分裂原刺激的脾细胞以及诱导但培养了3，8，48h的脾细胞，也表达a-干扰 素mRNA,r-干扰素在上述诱导培养时，其mRNA均发生表达，未经有丝分裂原刺激的脾细胞培养3，8h时，也表达r-干扰素mRNA, 但培养48h时则未检测到，未受有丝分裂原刺激的细胞不表达r－干扰素mRNA，鸡白细胞介质－2mRNA仅在刺激2，3，4，8，12，24，48h时表达，在其他情况下则未检测到，本研究还发现1种与已报道的鸡a-干扰素序列不同的基因，但基体外的表达动态类似于鸡a-干扰素，上述研究表明，鸡Th1样淋巴子的体外表达类似于哺乳动物，但也存在一定的差异。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其B细胞表位的鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

宋扬  韩宗玺  邵昱昊  孔宪刚  刘胜旺 《中国预防兽医学报》2010,32(5)

为鉴定传染性支气管炎病毒(IBV)B细胞抗原表位,本研究将IBV致弱株CK/CH/LDL97Ⅰ病毒与重组N蛋白作为免疫原,交叉免疫BALB/c小鼠,制备了1株抗IBV N蛋白的单克隆抗体(MAb)6D10。Westernblot结果表明该MAb可特异性的识别IBV CK/CH/LDL97Ⅰ株和重组N蛋白。同时利用噬菌体展示技术对IBV N蛋白抗原表位进行筛选,获得11个阳性噬菌体克隆。序列分析表明,这11个克隆均展示有"FGPRTK"6个氨基酸的序列,对应于IBV CK/CH/LDL97Ⅰ株N蛋白242位～247位氨基酸残基。同时,通过人工合成其编码序列并进行原核表达,利用MAb6D10对表达产物进行western blot分析,反应性良好。由此表明"FGPRTK"6肽为IBV CK/CH/LDL97Ⅰ株的一个线性B细胞抗原表位。表位的保守性分析结果表明,本研究鉴定的表位在各种血清型IBV毒株中均高度保守。本研究结果为进一步研究IBV N蛋白抗原的结构和功能及诊断试剂的研发奠定了基础。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LSD/05 Ⅰ的分离、鉴定及弱毒疫苗对气管的保护     

王钰  李成仁  张晓楠  韩宗玺  邵昱昊  刘胜旺  孔宪刚 《农业生物技术学报》2008,16(6)

从2005~2006年中国部分地区鸡场疑似鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus)感染鸡分离到12株鸡传染性支气管炎病毒,并对其部分生物学特性及基因型进行了研究。发现其中11株病毒分属于LX4和CK/CH/LSC/99Ⅰ型。通过S1基因比较、进化树分析、BLAST搜寻和动物试验研究发现,CK/CH/LSD/05Ⅰ是一株新型变异毒株。动物感染试验表明,CK/CH/LSD/05Ⅰ感染鸡的肾脏病变不明显,仅有20%的感染鸡肾脏病毒分离呈阳性,但100%感染鸡呼吸道病毒分离阳性,表明该病毒不是中国普遍流行的肾型毒株,而其对呼吸道具有较强嗜性。同时,实验应用弱毒疫苗H120和本实验室致弱的3株异种毒株进行了动物保护试验,结果显示,用CK/CH/LSD/05Ⅰ攻毒后,这4株异种传染性支气管炎病毒的免疫对气管的保护率很低。初步揭示该毒株可能属新的血清型病毒。  相似文献   

重组马传染性贫血病病毒核心蛋白抗原在 A GID 和ELISA中应用的评价     

孔宪刚  陶伟英  刘永刚  张宝山  刘胜旺  卢景良 《中国预防兽医学报》1999,(4)

用昆虫杆状病毒表达系统获得的马传染性贫血病病毒（ Ｅ Ｉ Ａ Ｖ） 核心蛋白（ Ｇａｇ） 和 Ｐ２６ 蛋白, 作为免疫琼脂双扩散（ Ａ Ｇ Ｉ Ｄ） 和酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 抗原。对７６ 份已知马传贫非特异性血清进行检查, 同时与市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒作比较。证明, 用表达蛋白作抗原的 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测结果均为阴性反应, 而用市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 试剂盒检查有５４ 份马血清出现非特异性反应, 市售 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒检查也出现了非特异性反应, Ｏ Ｄ 值比表达抗原 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 高３５ 倍。初步证明在 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法中, 表达抗原优于常规马传贫病毒抗原。  相似文献   

马传染性贫血病免疫中的细胞免疫作用   总被引：2，自引：0，他引：2  

卢景良  何兆忠  林秀英  刘俊浦  孔宪刚 《中国农业科学》1981,14(5):83-89

马传染性贫血病(简称马传贫)盼免疫性质,各国学者从不同角度试图予以解决。在早期,由于特异性血清学诊断未被突破,不能证明有抗体存在,则认为感染马传贫病毒的宿主,对侵入的病毒缺乏免疫学反应。近年来,马传贫补体结合反应和琼脂扩散反应等研究表明,这种概念是错误的。继之,我所报道了马传贫的免疫试验结果,马传贫耐过后有79.2%的马和83.5%的驴能抵抗强毒的再攻击。注射马传贫弱毒疫苗的马有79%、驴有97%的保护率。为了阐明这种保护机理,我们进行了马传贫免疫中细胞免疫作用的探讨。  相似文献   

我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株生物学特性的研究   总被引：22，自引：3，他引：19  

贺秀媛  刘胜旺  王玮  刘丽玲  孔宪刚  王建华 《中国预防兽医学报》2002,24(5):349-353

从我国新疆维吾尔自治区某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的病鸡有出血点病变的腺胃组织中分离病毒，在9－11日龄SPF鸡胚上连续传代9次，通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态观察、病毒在鸡胚中的增殖动态变化、病毒在CEF中的增殖特性、凝集鸡红细胞的特性以及动物回归试验等来研究我国鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的生物学特性。结果表明，该毒株的第一代尿囊液对鸡胚无肉眼可见的致病作用，当继代到第5代后，胚体严重病变；电镜观察该病毒为典型的冠状病毒；病毒在鸡胚中随着接种病毒时间的延长，其效价增高，96小时可达到48小时的1倍，该毒株可在CEF上生长，但不能形成明显的蚀斑；并且经1％胰酶处理后可疑集鸡红细胞；鸡胚的第4代尿囊液病毒回归动物体，可致鸡病变病死鸡肾脏病变尤为明显，呈典型的花斑肾，腺胃则未见肉眼可见的病变，接种鸡、同居鸡和对照鸡之间NDV疫苗免疫后其HI抗体水平无明显差异，但从发病症状来看，IBV对ND疫苗具有干扰作用。  相似文献   

马传贫弱毒疫苗免疫马诊断盒的研制     

孔宪刚  刘滨东 《中国畜禽传染病》1992,(4):26-27

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马传贫强、弱毒血清抗体鉴别诊断法在古巴的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

孔宪刚  宁希德 《中国预防兽医学报》1994,(1)

应用中国抗马传染性贫血驴白细胞弱毒抗原株系特异性的单克隆抗体酶结合试剂，以免疫斑点试验与琼脂免疫双扩散试验相结合的方法，对古巴二省疫苗接种地区的２５６匹马进行了马传贫弱毒疫苗接种马和马传贫自然病马鉴别诊断．结果，检出自然病马２３匹．弱毒疫苗接种马２０９匹，健康马２４匹．表明，本法可用于区别古巴马传贫病马和马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马．  相似文献   

四株新城疫病毒NP基因的克隆与序列分折     

刘培欣  刘怀然  石跃  刘胜旺  孔宪刚 《黑龙江畜牧兽医》2010,(8)

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