中国2005年～2006年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析   总被引：5，自引：1，他引：4  

马亚珍  韩宗玺  邵昱昊  张庆霞  刘胜旺  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2008,30(6):420-424

本研究应用RT—PCR方法扩增到我国2005年-2006年8个省市12株IBV病毒核蛋白基因,并将其进行了克隆、序列测定及分析。以疫苗株H120作为参考毒株,对12株IBV分离株核蛋白基因序列进行分析。结果发现我国分离株的N基因及其局部功能区序列存在广泛的氨基酸替代现象。同时还发现毒株CK／CH／LSD／05I与疫苗株H120同源性最高（93.4％）。与GenBank中的11个IBV参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,发现本研究分离的大部分毒株（9株）分布于第1群中,可见我国主要的IBV分离株在N基因进化关系上形成了自己独立的进化群。通过与S1基因系统发育进化树比较发现,毒株CK／CH／LSD／05I存在基因重组现象。以上结果表明我国2005年-2006年IBV毒株存在基因突变和基因重组现象。  相似文献   

2003年～2006年东北地区新城疫病毒部分分离株分子遗传学特征   总被引：2，自引：1，他引：1  

孙敏华  刘怀然  孔宪刚  刘培欣  刘胜旺 《中国预防兽医学报》2008,30(5):354-358

本研究从2003年-2006年我国东北地区收集的疑似新城疫病毒感染的鸡源病料中,分离鉴定出12株可在鸡胚成纤维细胞上产生病变的新城疫病毒,并对其进行了蚀斑纯化。应用RT-PCR方法扩增含病毒融合蛋白基因47nt～420nt片段,并进行序列测定及分析。结果表明,12株NDV分离株F蛋白裂解位点序列均为^112R-R-Q-K-R-F^117。重要中和位点、糖基化位点及半胱氨酸残基高度保守。与GenBank中30株NDV参考毒株F基因序列比较和分析后,发现12株NDV分离株均为基因VIId亚型毒株,为我国目前优势流行毒株;与不同地区及宿主来源的参考毒株比较的结果表明本次分离于东北地区的毒株没有明显宿主及地域特征。  相似文献   

接种La Sota疫苗雏鸡外周器官中CD4+T细胞的来源及其作用     

刘胜旺  陈洪岩  李一经  陈立君  孔宪刚  卢景良 《中国兽医学报》1999,19(3):212-214

切除胸腺的２日龄雏鸡,接种抗鸡Ｔ细胞表面分子ＣＤ４的单克隆抗体,于１２日龄时以ＬａＳｏｔａ疫苗免疫。然后,在不同的日龄分别用ＦＡＣＳ,ＭＴＴ及间接ＥＬＩＳＡ测定脾脏和外周血中ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ淋巴细胞亚类数量,脾Ｔ淋巴细胞转化功能及病毒特异的血清ＩｇＧ抗体的动态变化。  相似文献   

SARS冠状病毒PUP5蛋白的表达、纯化及鉴定     

王红霞  孟庆文  刘永刚  施建忠  孔宪刚  冉多良  吴东来 《中国预防兽医学报》2006,28(4):457-460,465

经RT-PCR扩增了SARS冠状病毒（SARS-CoV）BJ01株的PU5基因（putative uncharacterized gene5）的cDNA，将其克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中，命名为pGEX-PU5，测序正确后将阳性质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达，表达的融合蛋白命名为pGEX-PuP5，并用Glutathione Swpharose^TM 413亲和层析柱对表达产物进行纯化，然后用PreScission^TM Protease酶对融合蛋白进行解离，获得PUP5蛋白，用抗SARS-CoV卵黄抗体IgY和GST-tag单克隆抗体分别对表达的目的蛋白做Western blot鉴定，证明所表达的蛋白具有免疫学活性。本研究应用原核表达系统表达了PUP5蛋白，为进一步解析该蛋白功能奠定了基础。  相似文献