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101.
102.
表达破伤风毒素C片段的重组鼠伤寒沙门菌的构建与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
为构建表达破伤风毒素C片段基因的减毒鼠伤寒沙门菌,将编码破伤风毒素C片段的基因插入到asd^+的组成型表达载体pYA3333,转化asd基因突变的E.coli X6212。获得重组质粒pYA3333-TetC,再将重组质粒通过电穿孔法转入宿主菌,构建成表达破伤风毒素C片段基因的平衡致死的鼠伤寒沙门菌X4550(pYA3333-TetC)。免疫印迹试验证实,该重组菌表达的蛋白与预期的目的蛋白一致。重组菌X4550(pYA3333-TetC)的稳定性试验表明,在体外培养100代后,随机挑选的重组菌落全部都能生长,重组菌X4550(pYA3333-TetC)的生长曲线测定表明,X4550(pYA3333-TetC)和X4550(pYA3333)的生长状态基本一致。动物试验证明,该重组菌是安全的,破伤风毒素攻击后能提供良好的保护作用。 相似文献
103.
鸡白细胞介素2分子单克隆抗体的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
以含有鸡白细胞介素2(ChlL-2)基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1-ChlL-2免疫6周龄BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14融合,应用间接ELISA筛选阳性克隆。共获得2株特异性分泌抗鸡IL-2分子的杂交瘤细胞株,分别命名为1H10和1E6,其腹水ELISA效价分别为1:6400和1:3200,亚类鉴定结果均为IgM。重组质粒pcDNA3.1-ChlL-2转染COS-7细胞,以上述单克隆抗体(mAb)检测表达产物,结果表明,2株mAb均能与表达产物反应;Western blot分析结果显示,2株mAb均与原核表达鸡IL-2蛋白发生特异性反应。本研究所制备的抗鸡IL-2分子mAb可为建立简单、快速的鸡IL-2检测方法提供可能,并为鸡IL-2生物学特性和禽类细胞免疫机理的研究提供材料。 相似文献
104.
猪肺炎支原体特异性蛋白P36基因的克隆与表达 总被引:4,自引:0,他引:4
根据Genbank中猪肺炎支原体P36基因序列设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体ZCF23株特异性蛋白P36基因序列,经测序确认后,克隆人原核表达载体pGEX 6p-1的EcoR I和Xho I位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性克隆用IPTC诱导,通过SDS-PAGE电泳进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了表达,这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断提供了重要条件. 相似文献
105.
为了建立一种动物粪便样品中快速、特异、敏感的沙门菌检测方法,根据沙门菌肠毒素stn基因设计一对引物,对不同血清型的沙门菌和非沙门菌进行PCR检测,并对该PCR方法进行反应的灵敏度、模拟粪便样品的最低检出限测定及粪便样品的检测。运用该方法对250份粪便样品进行检测,同时用传统方法进行验证。结果表明,设计的引物特异性好,能专一性扩增出约260 bp条带;该引物灵敏度高,能进行有效检测的核酸最低起始量为43.85 pg,纯菌检测灵敏度达1 cfu/mL。接种沙门菌到粪便样品中,当粪便样本中菌量达103cfu/mL以上时,不需要增菌,沙门菌可立即检出,增菌后检出限可以达到1 cfu/mL。PCR检测250份样品共检出18份阳性,同时传统细菌培养方法证明结果正确。该方法可用于粪便样品的检测。 相似文献
106.
不同禽源和不同毒力新城疫病毒对鸭的感染性 总被引:1,自引:1,他引:0
为探讨不同禽源和不同毒力的新城疫病毒(NDV)株对鸭的感染性、致病性以及鸭在家禽新城疫(ND)流行中的意义,本研究选用7个NDV株进行了雏野鸭的人工感染试验,对感染鸭的临床症状、增重、抗体反应、排毒以及组织器官中病毒分布进行了观察。结果表明,鸭源强毒株JSD0812和标准强毒株F48E8对鸭具有强的致病性,感染鸭的发病率和死亡率高达100%,病毒广泛分布于感染鸭的多种组织器官中。鸽源强毒株JSP0204、鸡源强毒株JSC0804、鹅源强毒株JSG0210以及疫苗毒株Mukteswa和LaSota对鸭不具有致病性,感染鸭未出现临床症状,生长发育也未受到影响。它们在鸭体内存在时间也较短。所有感染鸭均有排毒现象,排毒时间和排毒途径因病毒株毒力不同而异。结果表明NDV在进化过程中对鸭的致病性有逐渐增强的趋势。 相似文献
107.
108.
以小鼠炎症因子流式蛋白定量(cytometric bead array,CBA)检测试剂盒为参考,分别从降低试剂用量和缩短孵育时间两个方面进行优化,然后以沙门菌感染小鼠为模型,动态分析小鼠血清中炎症因子的分泌情况。结果表明,试剂用量由50μL降至20μL、孵育时间由2h缩短至30min仍然可以得到较好的检测效果。沙门菌感染小鼠后,利用该方法动态分析了小鼠血清中炎症因子的变化情况,并且发现炎症因子的早期分泌与沙门菌在小鼠体内的定殖呈正相关。通过CBA技术的优化和初步应用,为其推广应用提供了重要数据。 相似文献
109.
110.