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重组牛γ-干扰素单克隆抗体的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
为制备针对重组牛γ-干扰素(rBoIFN-γ)的单克隆抗体(mAb),以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BOIFN-γ为免疫原,用纯化的rGST-BoIFN-γ为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIFN-γ的mAb.结果获得13株稳定分泌抗BoIFN-γ mAb的细胞株,命名为1C12、1F7、1G5、3E6、4D5、5E11、5G4、6F8、6G6、7E9、8D3、8F8和9G11.腹水的效价除单抗9G11外,其余效价都在1:80000以上;除5G4 mAb亚类为IgG2b外,其余均为IgG1.Dot-ELISA结果表明,所得单抗只与融合蛋白rHis-BoIFN-γ和rGST-BoIFN-γ反应,而不与其它重组细胞因子和对照细菌反应,显示其良好的特异性.Western blot显示所获单抗能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性务带.同时所获单抗均能与牛IFN-γ标准品反应.13株单抗均为针对rBoIFN-γ的特异性mAb,为进一步研究rBoIFN-γmAb在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定基础. 相似文献
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以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增复活促进因子E(rpfE)基因,并将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,重组表达质粒pET32a-rpfE转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示目的蛋白在细菌裂解上清和沉淀中均有表达,进一步对可溶表达的蛋白通过镍柱亲和纯化,获得高纯度的重组蛋白。Western-blotting试验结果表明:重组RpfE蛋白能与兔抗H37Rv多抗血清发生特异反应,具有良好的反应原性。这为探索RpfE蛋白在结核病疫苗开发和新型诊断试剂研制等奠定基础。 相似文献
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当前,因地制宜发展玉米生产,有利于词优粮食结构,提高农业种植效益。近年来,金华县玉米呈现稳步增长趋势,1999年全年种植面积已达到3万亩(1亩=667平方米,下同)左右。但长期以来,由于对玉米生产技术改良重视不够,良种更新缓慢,目前生产上应用的当家品种丹玉13已有15年历史,品种老化、退化,制约着玉米生产水平的进一步提高。为尽快寻找替换品种,金华县种子公司于1999年引入玉米新品 相似文献
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弯曲菌的公共卫生危害及其控制策略 总被引:1,自引:0,他引:1
近20年来,弯曲菌是重要的食源性人兽共患病原菌,由于弯曲菌严格的微需氧环境,通常难以确诊,如在美国和其它国家,空肠弯曲菌已成为食源性疾病的首要病原菌,每年有250万例弯曲菌感染,其中13000例需住院治疗。另外,特定血清型空肠弯曲菌引起的肠炎是导致GB综合症的重要前提。"一、 相似文献
98.
破伤风毒素C片段基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 总被引:1,自引:0,他引:1
应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株基因组中扩增出1356bp的破伤风毒素C片段基因,该片段是与靶细胞起结合作用的重链C端基因,经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank上登陆的序列AFl54828的同源性达到99.2%。将此基因克隆入大肠杆菌融合表达载体pET-30a(+),构建成重组表达质粒pET—TetC,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,经SDS—PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物约为50000的重组蛋白,其表达量占菌体总蛋白的33.5%,经免疫印迹试验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原。动物试验证明,此重组抗原具有良好的免疫原性,能保护动物免受破伤风毒素的攻击。 相似文献
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根据禽流感病毒(AIV)核蛋白(NP)和血凝素(HA)基因序列,设计1对用来鉴定A型AIV特异性引物(NP—F,NP—R)和2对用来鉴定AIV H5和H9不同亚型特异性引物(H5-F,H5-R;H9-F,H9-R),建立了多重RT—PCR快速检测方法。该方法能同时从一种病毒扩增出2条核酸带。分别为型(NP:330bp)和亚型(H5A:550bp,或H9A:490bp)。通过对105份样品进行检测。并与病毒分离及琼脂扩散(AGP)血清学方法作平行对比,两者之间符合率达100%;试验灵敏度为10^2ELD50。结果表明,建立的多重RT—PCR为检测H5、H9亚型AIV提供了一种快速、经济、易行的技术。 相似文献
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