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[目的]实现在体外对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和 TaqMan探针,构建分别包含 PCV2 ORF1和 ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,建立2种检测PCV2的分别基于 PCV2 ORF1和 ORF2的TaqMan荧光定量PCR方法。[结果]所建立的2条标准曲线的 Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系,相关系数 R均在0.99以上,扩增效率均在90%~110%;重复性好,组内变异系数均小于5%;特异性强,以猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为模板时均无扩增;敏感性高,ORF1方法可达1.0×101 copies/μl,ORF2方法可达1.0×102 copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较,结果表明,其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致,有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测,证明这8份样品中确实存在 P1的感染。[结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确,可用于PCV2的快速诊断和定量检测。 相似文献
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对6年生滨梅实生后代的结实性状进行调查与分析,结果发现,滨梅实生后代变异较大,其中果实成熟期从6月底7月初至9月上中旬,最多相差2个月左右,平均果重2.458±0.635 g,株产量1.18±0.88kg,折合单位面积产量0.54±0.34 kg/m2,果肉含量86.81%±3.13%,可溶性固形物含量12.86%±1.14%,有机酸含量0.95%±0.27%,固酸比14.55±4.31,色价1.04±0.48,除了果肉含量的变异系数小于5%、可溶性固形物含量(TSS)的变异系数小于10%,其他性状指标的变异系数都在20%以上,最高达到74.58%。根据平均果重、产量、可溶性固形物含量、固酸比以及综合性状指标,初步筛选出了18株滨梅优良种质,并确定了1-9、2-37、7-4、7-10和9-25作为最优单株,建议进行扩繁研究。 相似文献
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【目的】克隆蓝莓（Vaccinium spp）生长素酰胺水解酶基因VcILR1，分析该基因在蓝莓花、叶、茎、果和根中的表达模式和经过赤霉素处理的青果和成熟果两个时期的表达情况，为进一步探究该基因功能和蓝莓胚珠败育的机制提供依据。【方法】以蓝莓果实的cDNA为模板克隆得到VcILR1基因，利用ProtParam等工具对VcILR1进行生物信息学分析，利用qRT-PCR方法对VcILR1基因在蓝莓不同组织及赤霉素处理的青果和成熟果中的表达量进行分析。【结果】成功克隆到蓝莓VcILR1基因，该基因含976 bp的开放阅读框（ORF），编码325个氨基酸，有两个保守结构域，分别是Peptidase＿M20和M20＿dimer；编码蛋白的分子质量35 364.20 kDa，理论等电点5.67，不稳定系数43.57，脂肪系数88.55，亲水性平均值-0.054，属于不稳定亲水性蛋白。系统进化树分析表明蓝莓VcILR1基因与山茶科植物的茶树（Camellia sinensis）生长素酰胺水解酶（IAA-Leucine Resistant 1-like,ILL）基因亲缘关系较近。qRTPCR分析结果显... 相似文献