斑点叉尾鮰病毒“自杀性”ＤＮＡ疫苗的构建及其体外表达检测     

熊海林  尹殿卯  王卫民  王敏  李莉娟  刘玉林  刘学芹  吴兵  黄锋涛 《水生态学杂志》2011,32(1):84-88

根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到"自杀性"DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1(+)中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰(Ictalurus punc-tatus)"自杀性"DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切鉴定以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。将重组质粒转染人胚肾细胞(293T),间接免疫荧光试验表明ORF6均获得表达,但"自杀性"DNA疫苗的表达效果不如常规DNA疫苗,该研究为这2种疫苗进一步的鱼体试验奠定了基础。  相似文献   

二倍体泥鳅与大鳞副泥鳅及杂交F₁精子结构与活力     

李猛  虞炯莹  王卫民 《水产学报》2022,46(1):41-50

二倍体泥鳅与大鳞副泥鳅杂交能够顺利获得杂交后代,其正反交核型都为（2n=49）,但杂交后代精巢表现出明显的发育迟缓现象,杂交泥鳅自交与回交实验表明,其雄性不可育。为了解二倍体泥鳅和大鳞副泥鳅杂交F₁雄性不育的原因,实验通过计算机辅助精子活力分析系统（CASA）、光学显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞技术分别对二倍体泥鳅（DD）、大鳞副泥鳅（PP）、其正反杂交F₁（DP）和（PD） 4种泥鳅精子的形态结构与活力进行了分析。结果显示,激活30 s时,DD和PP的精子运动率分别为76.50%±0.70%和75.17%±8.60%,极显著高于DP （3.65%±1.75%）和PD （2.68%±0.63%）,且杂交泥鳅的精子的平均运动速度（VAP）、平均曲线速度（VCL）、平均直线运动速度（VSL）等运动参数也极显著低于DD和PP,说明杂交泥鳅精子的活力极其低下。应用流式细胞技术对4种泥鳅精巢内细胞进行倍性鉴定,发现DD和PP精巢内大多为1N精子,而DP和PD精巢内除了正常单倍体精子外,还有大量的2N和4N以及少量的8N细胞。通过扫描电镜和透射电镜...  相似文献   

罗氏沼虾维氏气单胞菌的分离鉴定     

郭莹  郭青松  周淼  李艳和  王卫民 《中国农学通报》2020,36(36):137-143

为了判断罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)幼虾发病死亡的原因,本研究从濒死的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中,分离了一株具有生长优势的菌株,对分离菌株形态学、革兰氏染色、生理生化进行鉴定。结果表明,该分离菌株为革兰氏阴性,氧化酶、赖氨酸脱羧酶、枸缘酸盐、吲哚、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、V-P、纤维二糖为阳性,并对该分离细菌16S rRNA基因进行序列以及系统发育树分析,该分离菌株与维氏气单胞菌聚为一支,其亲缘关系较近,对该分离菌株理化性质和16S rRNA序列综合分析,可判断该分离菌株为维氏气单胞菌（Aeromonas veronii,登录号MN733186）。以浸泡法进行人工感染实验,证明了该分离菌株对罗氏沼虾幼虾具有较强致病性,对分离细菌的药物敏感性进行检测,结果显示,该菌株对头孢曲松、氯霉素、氟苯尼考、多西环素和利福平5种药物高度敏感,对新生霉素和复方新诺明2种药物中度敏感,对环丙沙星、诺氟沙星、红霉素、阿奇霉素、链霉素、卡那霉素、四环素7种药物耐药。本研究实验结果为罗氏沼虾维氏气单胞菌的病原鉴定及药物诊治提供一定的参考和理论基础。  相似文献   

一株分离自团头鲂的嗜水气单胞菌病原学及其与ST251型菌株的全基因组比较   总被引：1，自引：0，他引：1  

王超杰  王至诚  康兴宇  黎洁  刘乃瑜  王卫民  罗毅 《中国水产科学》2021,28(4):503-516

为确定湖北仙桃一团头鲂(Megalobrama amblycephala)专养池塘的发病病原体及病原特征, 并从全基因组层面初步分析该病原菌的毒力和耐药特征, 本研究从患病团头鲂的肝脏分离得到一株病原菌 LHW39, 经理化性状及 16S rRNA 鉴定, 表明 LHW39 为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。多序列分型结果显示 LHW39 属于嗜水气单胞菌 ST251 型克隆群, 该克隆群是导致中国和美国地区鱼类暴发气单胞菌败血症(motile Aeromonas septicemia, MAS)的流行菌株群。回归感染实验证实菌株 LHW39 是引起本次团头鲂患病的病原菌; LHW39 对斑马鱼(Danio rerio)的半致死剂量为 1.55×105 CFU/尾, 表明 LHW39 为高毒力菌株。药敏实验显示, LHW39 对头孢噻吩耐药。全基因组测序结果发现, LHW39 全基因组大小为 5099855 bp, GC 含量为 60.80%, 共预测到 4572 个编码序列(CDS), GenBank 登录号 CP050012。基因组毒力基因比较分析结果显示: LHW39 与其他 ST251 型菌株相似, 基因组中含有丰富的毒力基因, 并且含有 VI 型分泌系统(T6SS); 此外, 聚类热图暗示 ST251 克隆群中菌株毒力相关基因的进化可能与菌株分离的地理位置和感染的宿主存在关联。基因组原噬菌体预测结果显示, LHW39 基因组中含有一个长度为 30.2 kb 的完整原噬菌体 phAhLHW39, 其在 ST251 型菌株中相当保守、并且是 ST251 型菌株所特有。耐药基因分析结果表明, LHW39 中含有抗磺胺类、喹诺酮类、四环素类、头孢类和碳青霉烯类等抗生素的相关基因, 这些基因在 ST251 型菌株中高度保守。本研究对致病性嗜水气单胞菌 LHW39 进行了病原学及全基因组比较分析, 为防控鱼类嗜水气单胞菌感染提供了一定的参考依据。  相似文献   

麦穗鱼的组型分析和DNA含量测定     

杨坤  王子健  祝东梅  方礼豹  王卫民 《华中农业大学学报》2012,31(3):371-375

采用PHA和秋水仙素活体注射、肾细胞短期培养和空气干燥制片法,对麦穗鱼染色体数目和核型进行研究;以麦穗鱼外周血细胞为样本,鸡血细胞DNA为标准(2.30pg),使用美国贝克曼库尔特公司Cell LabQuanta SC流式细胞仪测定了麦穗鱼二倍体细胞的DNA含量。结果显示:麦穗鱼染色体数目2n=50,未观察到次缢痕及性染色体,亦未发现有随体,核型公式为18m+22sm+10st,NF=90;麦穗鱼二倍体细胞DNA含量为鸡血对照的1.38倍,绝对含量为3.18pg。  相似文献   

团头鲂雌核发育后代的微卫星标记分析     

张新辉  夏新民  罗伟  高泽霞  钱雪桥  王卫民 《华中农业大学学报》2012,31(6):737-743

采用松浦镜鲤(Cyprinus carpio Songpu carp)的紫外线遗传灭活精子刺激团头鲂(Megalobrama amblycephala)卵子后冷休克抑制卵子第二极体释放方法,获得团头鲂雌核发育个体。流式细胞仪检测雌核发育个体的DNA含量与正常团头鲂二倍体的DNA含量并没有显著性差异,表明雌核发育个体为二倍体。通过引物优化,筛选父母本具有特异性的8对微卫星引物,对雌核发育后代进行检测,结果表明雌核发育个体的遗传物质均来自母本,没有父本的遗传物质渗入。筛选出母本为杂合的10对微卫星引物对子代的纯合性进行评价,结果显示雌核发育后代在TTF-EST46、TTF-EST61、TTF-EST851位点全部为纯合,而TTF-EST12座位上的重组率为86.4%,其他6个位点的重组率为100%,这10个位点的平均重组率为68.64%。试验结果表明,通过抑制第二极体并不能获得纯合性较高的团头鲂雌核发育个体,但具有与母本较高的遗传同质性,可以作为良好的育种材料使用。  相似文献   

海阳市冬季高密度暂养日本对虾技术探讨     

王卫民  张晓霞  包华军  纪玉娥  任永秋  孙鹏飞 《河北渔业》2011,(10):35-35,38

<正>近几年,日本对虾市场需求量不断增加,价格不断攀升,尤其冬季暂养的对虾,反季节上市,利润颇丰,经济效益可观。现将近几年海阳市冬季高密度暂养日本对虾技术整理介绍如下,供大家参考。  相似文献   

柳州淡水螺产业现状及发展对策     

宋烨佳  李威锋  文衍红  罗福广  王卫民  李艳和 《养殖与饲料．饲料世界》2020,(5):136-140

淡水螺是螺蛳粉的重要原材料。柳州作为螺蛳粉的发源地,在螺蛳粉产业大力发展的同时也面临着淡水螺养殖产量不足的难题。本文对柳州淡水螺产业链的养殖、运输、餐饮等环节进行了分析,概括了柳州淡水螺养殖存在的主要问题:供求关系矛盾、食品安全存疑、运输问题难解、天灾敌害难除、地理位置劣势、技术水平较低,提出了针对性的发展建议:加强对养殖户的技术指导、加大对当地淡水螺养殖的推广、加大对质量检测技术的研发、努力创建品牌效应、加大对螺蛳粉的宣传力度,以期促进柳州螺蛳粉产业能够发展得更稳、更快、更远。  相似文献   

灰色多维综合隶属度评估方法在小麦品种评价中的应用   总被引：7，自引：0，他引：7  

关立  张志民  祁国宾  郭鹏飞  王卫民  王新平  韩勇 《河南农业大学学报》2006,40(2):117-121

结合2001—2002年度河南省小麦品种区域试验安阳试点实例,运用作物灰色育种原理与方法,介绍了灰色多维综合隶属度评估方法在小麦品种评价中的应用.在此基础上,讨论了这种方法的可行性和优越性,认为这种方法可综合考虑多个性状,对品种的评价更客观、合理和科学.  相似文献   

鱼类人工雌核发育   总被引：12，自引：0，他引：12  

杨桂军  王卫民  郝汉舟 《江西农业大学学报》2004,26(1):134-137

对鱼类人工雌核发育，包括其原理、技术以及雌核发育鱼的识别，子代的性别、能育性、纯合度和应用价值进行了总结，同时分析该技术存在的问题并提出了解决方法。  相似文献