镉对大鼠成骨细胞OPG/RANKL表达的影响     

王怡  刘伟  赵鸿雁  代楠楠  顾建红  刘宗平 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2014,(1)

在大鼠成骨细胞体外培养过程中添加不同浓度的镉,利用xCELLigence细胞实时分析系统观察细胞指数、蛋白免疫印迹杂交检测核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)蛋白表达,研究镉对成骨细胞毒性的影响。结果表明:镉暴露可使成骨细胞指数降低,0.5μmol·L-1镉对细胞增殖和存活具有抑制作用,呈剂量-效应和时间-效应关系;随着镉染毒剂量的增加,RANKL蛋白表达量降低(P0.01);1.0μmol·L-1镉暴露组OPG蛋白表达量明显增加(P0.05),镉浓度增大则导致OPG蛋白表达量降低(P0.01或P0.05);OPG/RANKL比值升高(P0.01)。证明镉暴露通过RANKL/RANK/OPG系统调控骨代谢,效应可能与剂量有关。  相似文献   

自噬在骨保护素对破骨细胞及其前体凋亡过程的调控机制     

刘庆羊  孙自强  赵鸿雁  宋瑞龙  顾建红  刘宗平 《畜牧兽医学报》2018,(8)

为了探讨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)对破骨细胞及其前体自噬与凋亡的影响,本研究以RAW264.7细胞诱导分化形成的破骨细胞(osteoclasts,OCs)及其前体(osteoclast precursors,OCPs)为研究对象,通过自噬促进剂雷帕霉素(rapamycin,RAP)或自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)分别预处理1h和30 min后,再添加80ng·mL-1OPG作用细胞6h,试验分为对照组(Con)、OPG、CQ、CQ+OPG、RAP和RAP+OPG组,利用免疫印迹法(Western blot)检测细胞自噬相关蛋白;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率。结果显示,与对照组相比,OPG组OCPs的Atg5和Beclin-1水平极显著或显著上调(P0.01或P0.05),但LC3-Ⅱ无显著差异(P0.05);与OPG组相比,RAP+OPG组OCPs中的LC3-Ⅱ水平极显著上调(P0.01);与对照组相比,OPG组OCs中LC3-Ⅱ、Atg5和Beclin-1水平极显著下调(P0.01);与OPG组相比,RAP+OPG组OCs的Atg5和Beclin-1水平极显著下调(P0.01)。与对照组相比,OPG处理组和RAP+OPG组OCPs凋亡率极显著上升(P0.01),CQ+OPG组凋亡率无显著差异(P0.05);RAP+OPG比OPG组OCPs凋亡率极显著增加(P0.01);与对照组相比,OPG组OCs凋亡率极显著降低(P0.01),CQ+OPG组凋亡率极显著下降(P0.01),RAP+OPG组凋亡率极显著下降(P0.01)。表明OPG能够促进OCPs发生自噬,而自噬的激活促进了OCPs的凋亡;OPG抑制OCs自噬的发生,并且抑制和激活自噬都能抑制OCs的凋亡。  相似文献   

挥发性脂肪酸受体在奶牛真胃中的表达     

刘海霞  刘俊栋  邵春艳  刘宗平  李建基 《江苏农业科学》2012,40(10)

随着奶牛集约化饲养规模的扩大和产奶量的提高,奶牛真胃变位的发病率逐渐升高.结果表明,真胃中VFA(挥发性脂肪酸)能明显抑制真胃平滑肌的收缩,导致真胃弛缓,但其调控机制目前仍不明确.本试验用PCR法检测到在奶牛的真胃壁中存在GPR41和GPR43的表达,且片段的大小和预计的大小相符.  相似文献   

MAPK信号通路在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用     

汪纪仓  刘学忠  顾建红  袁燕  卞建春  刘宗平 《中国兽医学报》2013,33(6)

探讨MAPK通路在镉诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用.采用两步灌流法获得大鼠肝细胞,经过24 h培养,用醋酸镉、醋酸镉与MAPK抑制剂(p38抑制剂SB202190、JNK抑制剂SP600125、ERK抑制剂U0126)共同处理肝细胞.用MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态和凋亡,免疫组织化学法检测p38蛋白表达.结果表明,镉可极显著提高肝细胞磷酸化p38的表达量(P＜0).01),而SB202190能极显著降低其表达(P＜0.01).SB202190可以显著或极显著提高镉处理组细胞的存活率(P＜0.05或P＜0.01),减少变形细胞和凋亡细胞数量,但SP600125和U0126作用相反.说明镉暴露导致肝细胞p38 MAPK途径激活而引起细胞凋亡.  相似文献   

低钙对蛋鸭血清钙、磷及破骨细胞活性的影响     

朱达文  许静  顾建红  刘俊栋  蒋杉杉  闫汶  王世涛  刘宗平 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2009,30(4)

将120只600日龄产蛋山麻鸭随机分为正常日粮组、1/2石粉组和1/4石粉组,自动生化分析仪测定更换饲料前1 d及更换饲料后1、3、5周血清钙、磷水平,观察缺钙日粮对蛋鸭血清钙、磷的影响.分离山麻鸭破骨细胞(OC),在此基础上添加不同浓度钙离子(2、3、5、7 mmol·L~(-1)),倒置显微镜观察体外培养OC形态,培养1、3、5、7 d进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP),7 d后扫描电镜观察象牙片吸收陷窝.结果表明:钙缺乏可导致蛋鸭血清钙、磷水平升高,降低钙磷比例.高浓度钙和较低浓度钙显著抑制OC生成及骨吸收活性.结果说明缺钙可诱导OC生成并发挥骨吸收功能,最终导致骨代谢性疾病.  相似文献   

玉米赤霉烯酮对Leydig细胞凋亡及caspase-9、caspase-3蛋白表达的影响     

王亚军  刘青  郑王龙  卞晓娇  顾建红  袁燕  刘学忠  刘宗平  卞建春 《中国兽医学报》2014,(1):131-135

以不同浓度的玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig)细胞进行染毒,采用噻唑蓝比色法观察了ZEA对Leydig细胞活力的影响;流式细胞术分析检测了ZEA对细胞的凋亡率、线粒体膜电位变化的影响;Western blotting等技术检测了Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP蛋白的表达情况。结果显示,ZEA可明显抑制睾丸Leydig细胞的活力(染毒各组与对照组比较P<0.05),40mg/L染毒组相对活力为40.67%;与对照组比较,5、10、20mg/L ZEA染毒组睾丸Leydig细胞凋亡率均极显著升高(P<0.05),呈明显剂量关系;线粒体膜电位变化测定显示,各染毒组与对照组比,线粒体膜电位均下降(P<0.05),且有明显的剂量关系;Western blotting分析显示,与对照组比较,5、10、20mg/L ZEA染毒组Bax、caspase-9、caspase-3、PARP蛋白表达均上调,bcl-2蛋白表达均下调。结果表明,ZEA能诱导大鼠睾丸间质细胞发生凋亡,Bax、Bcl-2、caspase-9、caspase-3等基因参与ZEA诱导Leydig细胞凋亡的调控。  相似文献   

DON、ZEA及其联合作用对小鼠T淋巴细胞活化及MAPK信号通路的影响     

王珺  孙凯  郑豪  邹辉  袁燕  顾建红  刘学忠  刘宗平  卞建春 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2020,41(1):7-15

为揭示脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEA)及其联合作用的免疫抑制机制,试验研究霉菌毒素DON、ZEA单独及联合染毒对小鼠离体脾脏淋巴细胞活性、T淋巴细胞活化及其MAPK信号通路的影响。以小鼠原代混合淋巴细胞为材料,以刀豆蛋白A (Con A)为混合淋巴细胞活化刺激剂,设ZEA、DON单独及联合染毒组, CCK-8法检测不同毒素组处理细胞24 h后细胞活性的变化;流式细胞术检测T淋巴细胞活化标识分子CD25以及共刺激分子CD278(ICOS)的表达情况; Western blot检测T淋巴细胞内MAPK通路相关蛋白ERK、JNK、p38等表达情况。结果表明:与细胞对照组相比, Con A组混合淋巴细胞相对存活率极显著上升;与Con A组相比, ZEA或DON单染组及联合染毒组细胞相对存活率显著或极显著下降。与对照组相比, Con A组CD4~+CD25~+/CD4~+及CD4~+CD278~+/CD4~+比例均极显著上升;与Con A组相比, ZEA、DON及联合染毒组CD4~+CD25~+/CD4~+比例均极显著下降, CD4~+CD278~+/CD4~+比例均不同程度下降,染毒浓度越高下降越明显。此外,不同浓度毒素处理组对T淋巴细胞MAPK通路相关蛋白ERK、JNK、p38等表达均有促进作用。这一研究提示, DON、ZEA及其联合可通过抑制CD25、CD278(ICOS)的表达来干扰T淋巴细胞的活化过程, DON、ZEA及其联合作用通过对MAPK信号通路的影响调控T淋巴细胞的存活。  相似文献   

内质网应激在骨保护素抑制破骨细胞黏附结构及功能中的作用     

宋瑞龙  曹莹  马勇刚  冉迪  贺双江  仝锡帅  刘宗平 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2020,41(6):46-50,56

  相似文献   

维生素D介导鸡BMSCs和BMMs共培养体系中破骨细胞的形成     

顾建红  闵雯嫣  周佳桦  赵玉田  卞建春  刘学忠  袁燕  刘宗平 《畜牧兽医学报》2019,(7)

为探究1α, 25-(OH)_2D_3对鸡骨髓间充质干细胞(BMSCs)和骨髓单核巨噬细胞(BMMs)体外共培养体系中破骨细胞(OC)形成的影响,笔者对1α, 25-(OH)_2D_3处理后的细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)、骨吸收功能鉴定、OC标志基因mRNA和蛋白表达的检测。结果表明:1α, 25-(OH)_2D_3能够上调BMSCs中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达,下调骨保护素(OPG)的表达。1α, 25-(OH)_2D_3处理共培养细胞5 d,OC数目较对照组明显增多,骨吸收活性较对照组极显著增强,基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Ⅱ型碳酸酐酶(CAⅡ)、组织蛋白酶K(CtsK)及TRAP等标志性蛋白的mRNA和蛋白表达极显著高于对照组(P0.01),其中10~(-8) mol·L~(-1) 1α, 25-(OH)_2D_3效果最明显。结果表明,10~(-8) mol·L~(-1) 1α, 25-(OH)_2D_3能够介导鸡BMSCs和BMMs共培养体系中OC的形成,该OC具有骨吸收活性,为进一步研究OC在家禽骨骼及钙磷代谢紊乱性疾病中的作用机制奠定基础。  相似文献   

日粮能量蛋白水平对7～8周龄肉仔鸡生产性能和屠宰指标的影响     

石天虹  阎佩佩  张桂芝  刘雪兰  井庆川  刘宗平 《饲料工业》2012,33(6):10-14

为获得最佳效益的日粮代谢能(ME)和粗蛋白(CP)水平,采用3×4(ME×CP)随机交叉试验设计,研究了玉米-豆粕型日粮中能蛋水平对7～8周龄肉仔鸡生产性能和屠宰指标的影响。结果表明:体增重、料重比与日粮能蛋水平有显著的二元曲线回归关系(P<0.05),随能蛋水平的提高,体增重增大、料重比减小,为了获得较高的体增重和饲料效率,7～8周龄肉仔鸡需要高能高蛋白日粮;空肠指数与日粮能蛋水平也有显著的回归关系(P<0.05),但这种关系对7～8周龄肉仔鸡没有明显的经济意义;利用生产性能与日粮能蛋水平关系模型,通过对生产性能指标的选择和饲料成本的核算,可以得到最佳效益的日粮能蛋水平。  相似文献