镉对体外培养大鼠大脑皮质神经元钙稳态的影响     

袁燕  江辰阳  孙娅  刘学忠  顾建红  卞建春  刘宗平 《中国兽医学报》2013,33(3):450-453,471

选用原代培养大鼠大脑皮质神经元为模型,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体经免疫组织化学染色技术鉴定神经元.用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒大鼠大脑皮质神经元12h,利用流式细胞仪检测细胞内[Ca2-]i,ATPase酶试剂盒测定Na-K+ ATPase和Ca2-Mg2--ATPase活性的变化,荧光定量PCR法测定钙调蛋白(CaM) mRNA转录水平.结果表明,免疫组化染色证实培养细胞呈现NSE阳性染色,证明是神经元.与对照组相比,各镉染毒组细胞内[Ca2+]i显著或极显著升高(P＜0.05或P＜0.01),Na--K--ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),20 μmol/L组CaM mRNA转录水平极显著降低(P＜0.01).说明镉可能通过影响CaM的转录水平与维持钙稳态相关的酶(Na+-K-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤.  相似文献   

原代大鼠肝细胞分离培养方法改良     

张义冉  王玲玲  王家晶  姚路连  顾建红  刘学忠  刘宗平 《中国兽医学报》2013,33(2):292-295

改进传统的两步原位胶原酶灌流法,调整灌流液及灌流条件,梯度离心纯化肝细胞.结果表明,分离出的大鼠肝细胞产量、纯度、活力均较高.该方法为一高效实用的原代大鼠肝细胞分离技术.  相似文献   

2种方法诱导形成的破骨细胞特性比较     

付应霄  顾建红  王世涛  王怡  赵鸿雁  刘伟  仝锡帅  刘宗平 《中国兽医学报》2013,33(1):94-97,101

采集ICR小鼠骨髓单核细胞在体外培养过程中加入25.0 μg/L M-CSF+50.0 μg/L RANKL诱导形成破骨细胞,同时选择RAW264.7细胞培养过程中添加100.0 μg/L RANKL诱导分化为破骨细胞.通过检测抗酒石酸碱性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色阳性数及骨吸收陷窝,比较小鼠骨髓单核细胞和RAW264.7细胞株诱导形成的破骨细胞活性.结果显示,小鼠骨髓诱导的细胞TRAP阳性数显著低于RAW264.7细胞株(P＜0.05),而小鼠骨髓诱导的破骨细胞所形成骨吸收陷窝的面积显著大于RAW264.7细胞株(P＜0.05).结果表明,2种方法均可诱导形成具有典型特征的破骨细胞,骨髓单核细胞诱导形成的破骨细胞活性更强,但破骨细胞的数量和纯度明显低于RAW264.7细胞株.  相似文献   

奶牛S100A12基因克隆、原核表达及体外抗菌活性分析     

曹随忠  雍康  姚学萍  崔亚飞  杨德英  余树民  刘宗平 《中国兽医学报》2013,33(6)

克隆奶牛S100A12基因并在大肠杆菌中高效表达.采用RT-PCR扩增奶牛外周血白细胞中S100A12基因,构建原核表达载体pCold TF-S100A12,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达并纯化.SDS-PAGE和Westernblotting分析显示S100A12基因以融合蛋白形式表达,表达量占菌体总蛋白的46.7％,纯化的重组蛋白(80 mg/L).琼脂扩散法测定重组蛋白对乳腺炎主要致病菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性.结果显示:重组蛋白对大肠杆菌有抗菌活性,而对金黄色葡萄球菌无抗菌活性.本研究为S100A12蛋白抗体制备及基因功能研究奠定了基础.  相似文献   

免疫荧光染色质量影响因素分析     

宋瑞龙  周子彦  徐天祺  潘士锋  刘宗平 《安徽农业科学》2019,47(16)

免疫荧光技术是标记免疫技术中应用最为广泛的一项技术,具有特异性强、灵敏度高、速度快和便于观察等特点。影响免疫荧光染色质量的因素多种多样,从荧光染料、抗体、样品前处理、染色过程等几个重要的方面入手,就如何提高免疫荧光染色质量,以获得一张高分辨率的图片做了详细的介绍。该研究有利于提高免疫荧光染色质量,为生命科学研究提供了有力帮助。  相似文献   

苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立     

项自来  王玲  夏苏干  邹辉  顾建红  袁燕  刘学忠  刘宗平  卞建春 《中国畜牧兽医》2019,(3)

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R~2=0.990),其IC_(50)为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。  相似文献   

紫云乡猕猴桃产业发展现状与对策     

刘宗平 《四川农业科技》2014,(9):52-53

<正>四川省广元市紫云乡辖6村33个社,耕地面积4 365亩,农业人口为4 737人,农业劳动力3 315个。紫云乡发展猕猴桃起始时间为1992年,当时种植的"川猕",1995年改种海沃德,后因市场需求不足,销售不畅,使主要分布于紫云村三社的果农心灰意冷。1998年根据市场发展前景并结合本地独特的小环境优势,通过多方协商引进了苍溪"红心果"猕猴桃,到2004年全乡共种植红心果猕猴桃327亩,由于当时技术未成型、水利设施、管理水平未跟上,销售渠道不畅,产品不为人们所知,仅  相似文献   

马麝呼吸系统疾病病原学研究     

路浩  黄有德  刘宗平 《中国兽医学报》2008,28(1):45-47

采用病毒、真菌、细菌学及血清学等检验方法,对甘肃兴隆山马麝以出血性肺炎或纤维素性-化脓坏死性肺炎为主要特征的呼吸系统疾病的病原进行了系统研究。结果表明,马麝的呼吸系统疾病是由巴氏杆菌（P.multocida）单独感染或与大肠杆菌（E.coli）、绿脓杆菌（P.aeruginosa）混合感染的一种普通传染性疾病。药敏试验表明,这3种细菌均对苄星青霉素、硫酸链霉素、复方磺胺甲噁唑片、酒石酸泰乐菌素敏感,而对麦迪霉素不敏感。  相似文献   

番鸭破骨细胞骨髓诱导培养体系的建立     

刘俊栋  顾建红  刘海霞  段修军  刘宗平 《中国兽医学报》2008,28(1):72-75

无菌分离、冲洗7日龄内番鸭长骨骨髓,收集、培养破骨细胞（Osteoclasts,OC）。培养过程中对照组不添加钙、磷因子,试验组加入不同浓度比例的钙磷双因子（Ca∶P分别为2∶1、1∶1、1∶2）,进行破骨细胞骨髓诱导培养。倒置显微镜观察细胞形态,于培养1、3d进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）计数,培养7d后扫描电镜观察象牙片吸收陷窝。结果显示,培养3d时试验组TRAP阳性细胞均多于对照组,差异极显著（P〈0.01）;试验2∶1组与1∶1组差异不显著（P〉0.05）,其余各组间均差异极显著（P〈0.01）;扫描电镜观察,象牙片吸收陷窝程度与钙磷比例大小（2∶1、1∶1、1∶2）成反比。当钙磷比例为1∶2时,破骨细胞数量最多,功能活跃。结果表明,鸭破骨细胞骨髓诱导培养体系已成功建立。  相似文献   

江苏省扬泰地区犬细小病毒分子流行病学调查     

王海燕  谢静  王涛  刘静  管远红  张斌  徐亚亚  曹明凤  崔乐遥  刘宗平 《中国动物检疫》2019,36(10):27-31

犬细小病毒（CPV）自1978年被首次分离到以来,已由CPV-2演化出CPV-2a、CPV-2b和CPV-2c 3种新抗原型。为了解江苏省扬泰地区的CPV分子特征和基因型,2015年5月至2016年12月在扬州和泰州地区宠物医院,根据患病犬临床症状以及CPV快速检测试纸条初步诊断结果,收集可疑病例的肛门棉拭子或粪便作为检测样品,扩增样本中CPV的VP2基因片段并对扩增产物进行测序和分析。结果显示：在48份样品中,4份被鉴定为CPV-2型,24份被鉴定为CPV-2a型,20份被鉴定为CPV-2b型,并未发现CPV-2c型。结果表明,该期间CPV-2a 型与CPV-2b型成为扬泰州地区的优势基因型,需开展这些新基因型的深入研究和防控。  相似文献