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摘要:将原核表达的重组马-干扰素成熟蛋白(mEIFN-)免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以昆虫杆状病毒表达系统获得的重组马-干扰素作为检测抗原进行间接ELISA检测,共筛选到15个阳性细胞株。分别经过3轮亚克隆后,最终得到了12株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株。利用间接免疫荧光(IFA)实验对12株单克隆抗体进行鉴定,结果证实所获得的12株细胞分泌的抗体均为针对马-干扰素的特异性抗体。单克隆抗体亚型鉴定结果显示,4株为IgG1、2株为IgG2a、3株为IgG2b、3株为IgM,而且所有单克隆抗体的轻链均为链。将此12株单克隆抗体分别与用原核系统分节段表达的重组马-干扰素GST-mEIFN-(1-84)、GST-mEIFN-(80-146)蛋白进行特异性ELISA检测,结果表明有7株单克隆抗体识别GST-mEIFN-(1-84),而另5株单克隆抗体与GST-mEIFN-(80-146)发生反应,说明所获得的12株单克隆抗体至少针对两个或两个以上不同的抗原表位。这将为今后建立马-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。 相似文献
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PRRSV Nsp2高变区基因的表达及免疫学特性鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
本研究分别扩增从"高热病"猪体内分离株(TA-12)及美洲经典株ATTC-VR2332 PRRSV Nsp2基因的高变区,亚克隆至表达载体pET-28a中,转化至E.coli BL21中,在IPTG的诱导下进行表达.用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定.表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,对其免疫原性进行研究.建立了以纯化的重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA,确定了临界值,用建立的ELISA方法并对400份猪血清进行了检测和应用.结果表明,成功的表达了分离株TA-12及ATTC-VR2332 Nsp2基因的高变区.表达蛋白纯化分别免疫小鼠后,获得多克隆抗体,其抗体效价均为1∶100000.优化的ELISA条件为:包被缓冲液为磷酸盐缓冲液,800 ng/孔,血清样品稀释浓度为1∶100.临界值为0.4.血清检测结果表明以两种蛋白为包被抗原均为阳性的血清最多,占到总数的58.5%,前者阳性后者阴性的血清阳性率28%,前者阴性后者阳性的血清阳性率8.75%,二者均为阴性的占到4.75%.为建立区别两种毒株的鉴别诊断间接ELISA试剂盒奠定基础. 相似文献
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20 0 2年 9月 ,山东荷泽某猪场饲养的 3 2 0头 95日龄育肥猪发生以高热、呼吸困难、皮肤发绀为主要症状的疾病。1 发病情况该批猪开始长势良好 ,90日龄开始见少数猪呼吸困难 ,体温升高 ,5d后大群出现类似症状。开始怀疑一般细菌感染 ,用青、链霉素治疗基本无效 ,治疗过程中共死亡 46头 ,死亡率 14 4%。其他治疗效果不明显的提前淘汰 ,造成较大的经济损失。2 临床症状病初体温升高到 40 5~ 42℃ ,稽留不退。精神萎顿 ,食欲减退、便秘。呼吸困难 ,为腹式呼吸 ,有的呈犬坐式。耳后、背部及腋下皮肤呈紫红色 ,指压不褪色。体表淋巴结尤其… 相似文献
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1病原禽传染性脑脊髓炎病毒属于小RNA病毒科,肠道病毒属。其病毒粒子具有六边形轮廓,无囊膜,直径24~32纳米。本病毒对氯仿、酸、胰酶、胃蛋白酶、DNA酶有抵抗力,双价镁离子保护其不受热影响。该病毒的不同毒株间无血清学差异,但野毒株和鸡胚适应毒株之间有明显的生物学区别。2流行病学该病可感染鸡、雉鸡、火鸡,各种日龄鸡均可感染,但一般雏禽才出现明显症状。病毒通过肠道感染,经粪便排毒后,病毒在粪便中可存活较长时间。本病以垂直传播为主,也可能通过接触进行水平传播。本病流行无明显的季节性,一年四季均可发生。该病可通过皮下、皮… 相似文献
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高致病力传染性法氏囊病野毒致弱株回传SPF鸡致病性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
vvIBDV致弱株经4周龄SPF鸡传代培养过程中,对接种鸡的法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体等免疫器官进行病理组织学检查,并分析主要免疫器官指数.发现随传代次数的增加,法氏囊和胸腺萎缩及脾脏肿大的程度逐渐加重;法氏囊、胸腺、脾脏和盲肠扁桃体内淋巴细胞崩解、坏死及脾脏内网状巨噬细胞增生的程度逐渐加深.试验结果表明,在传代过程中vvIBDV致弱株的毒力又逐渐恢复. 相似文献
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旨在进一步了解山东省猪流感的流行情况及其病原特征,笔者于2019年春季,在山东省泰安某屠宰场采集130份猪鼻拭子,进行病毒分离鉴定;并对分离病毒进行全基因组测序和分子特征分析;用禽H9N2亚型标准抗原联合血凝抑制方法检测2018—2019年从山东省8个地区猪场采集的1 527份猪血清样品中的猪流感病毒抗体。结果显示:分离到1株H9N2亚型流感病毒,命名为A/swine/Shandong/TA009/2019(H9N2)。分离病毒与A/environment-air/Kunshan/NIOSH-BL20/2018(H9N2)和A/environment-air/Kunshan/NIOSH-BL25/2018(H9N2)遗传关系最近,其基因片段的核苷酸相似性均在99.5%以上。分离病毒的HA和NA基因属于Y280-like分支,PB2和M基因属于G1-like分支,PB1、PA、NP和NS基因属于SH/F98-like分支。分离病毒HA蛋白裂解位点处的氨基酸序列为“PSRSSR/GL”,符合低致病性禽流感病毒的分子生物学特性。HA蛋白的216位为L,具有结合人源唾液酸α 2,6-Gal的能力。血清学分析结果显示,9份血清中H9N2抗体呈阳性,其总阳性率为0.59%。综上:本研究分离到1株猪源H9N2亚型流感病毒,并在猪血清中检测到H9N2抗体,提示应加强对猪流感的流行情况及其病原特征的持续监测。 相似文献