阴沟肠杆菌B29菌株脂多糖合成基因（waaL,waaG）缺失突变株的构建及分析     

王金星  费娜  王睿瑞  吴国军  张梦晖  赵立平  张晓君 《广西农业生物科学》2014,(1):1-9

脂多糖（LPS）在革兰氏阴性细菌中的功能作用在不同菌株中已有研究,但尚未有对肠杆菌属LPS结构与功能的报道。本研究试图构建能引起肥胖的阴沟肠杆菌B29菌株waaL和waaG基因的缺失突变株,以了解突变体菌株产生的LPS结构与活性与野生菌株产生的LPS的差异。根据同源重组技术原理,利用广宿主自杀性质粒构建成敲除载体pKNG101△waaL和pKNG101△waaG,转化E.coli SM10菌株,并与B29菌株进行双亲杂交,再以抗生素和蔗糖筛选条件筛选waaL和waaG基因缺失突变株;利用多重PCR、ERICPCR、PCR-DGGE、DNA测序结果均证实突变株B29△waaL和B29△waaG构建成功;最后,对野生菌株B29与两个突变株生物学特性的差异进行了比较。银染实验结果表明野生型B29菌株的脂多糖为光滑型结构,突变株的LPS结构明显缺失O抗原,B29△waaG突变株同时还缺失了外部核心部分;用鲎试剂法检测LPS的内毒素活性显示,突变株的内毒素活性与野生型相比有较大幅度下降;B29△waaL突变株的生长速率与野生型相当,而B29△waaG突变株的生长速率则相对降低。本研究成功构建两种内毒素活性下降的突变株,为下一步利用突变株研究B29菌株在肥胖发生中的机制奠定基础。  相似文献   

马流感病毒(A/Equine/Qinghai/1/94)神经氨酸酶基因的克隆与同源性分析     

杨建德  王文军  薛飞  王晓钧  朱远茂  赵立平  吕晓玲  沈荣显  许景军  相文华 《中国预防兽医学报》2003,25(5):334-337

本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列，设计并合成一对特异性引物，经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株(A／Equine／Qinghai／1／94)NA基因，将片段连接到PGEM—T-easy载体并转化DH5a，提取阳性菌落的质粒经EcRol酶切和PCR鉴定其大小均为1．4Kb左右，对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现，我国马流感病毒青海株与A／Equine／Alaska/1／91、A／Equim／Tennessee/5／86和A／Equine／Algiers/72等关系较近，核苷酸同源率为98．2％—97．4％；与我国马流感吉林株(A／Equine／Jilin／1／89)关系较远，核苷酸同源率仅为72．0％；而与H7N7亚型马流感病毒A／Equine／Prague／1／56核苷酸同源率仅为38．0％。  相似文献   

苹果斑点落叶病流行动态和爆发成因的计算机分析研究     

赵立平 《河北林果研究》2003,18(Z1):279-281

由于苹果品种多不抗斑点落叶病,目前国内外大都依靠化学防治来控制该病.但对其季节流行动态和爆发成因,以及在何种气象条件下使用农药才能获得最佳防治效果,尚缺乏系统研究.本研究以田间试验为主,通过对病害的逐日系统调查,将所得数据借助计算机进行统计分析,旨在明确生长季苹果斑点落叶病的季节流行动态和爆发成因(即病原菌大量侵染的决定性天气条件),为苹果生产提供可行的防治建议并为该病害的预测奠定基础.  相似文献   

土壤微生物在不同纤维素富集条件下的多样性   总被引：2，自引：0，他引：2  

张晶  张晓君  张梦晖  陈小云  赵立平 《农业环境科学学报》2007,26(4):1449-1453

应用PCR-DGGE分子技术并结合聚类分析、主成分分析（PCA）等统计分析方法,对土壤微生物在几种不同的纤维素富集培养条件下的多样性进行分析.结果发现,不同的纤维素富集培养条件对土壤微生物的多样性有不同程度的影响：CMC和PCS两种培养基在50 ℃时所回收的土壤微生物的菌群结构和组成比较相似;纤维素富集培养基（J培养基）同CMC两种培养基所回收的土壤微生物菌群结构和组成却有很大的差异;50 ℃条件下所回收的土壤微生物其菌群结构和组成同28 ℃、37 ℃两个温度相比也相差较大.这一结果表明,组合不同的纤维素富集培养条件,结合分子和统计分析,可以对土壤样品在不同纤维素富集培养条件下微生物的多样性进行检测和评估,同时还可以为分离目标菌时富集培养条件的选择提供很有价值的参考.  相似文献   

IL-2和绵羊梅迪-维斯纳病病毒核心蛋白Gag核酸疫苗联合免疫小鼠的免疫应答     

丁忠庆  沈荣显  相文华  赵丽荣  赵立平 《中国预防兽医学报》2007,29(3):204-207

构建绵羊梅迪-维斯纳病病毒（MVV）核心蛋白Gag核酸疫苗并与IL．2联合免疫小鼠，为评价其诱导的体液和细胞免疫应答。将MVVgag基因与羊IL-2基因分别插入到核酸疫苗载体质粒pcDNA5．0中，构建真核表达质粒pcDNA5．0-Gag和pcDNA5.0-IL-2，并经酶切以及测序鉴定。分别用阳性质粒pcDNA5．0-Gag、空载体pcDNA5．0及pcDNA5．0-Gag和pcDNA5．0-IL-2共免疫BALB／C小鼠，采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体以及IFN-γ和IL-4水平，用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖。结果表明pcDNA5．0-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IFN-γ、IL-4水平高于pcDNA5．0-Gag免疫组，与空载体pcDNA5．0对照组相比有显著差异（P〈0．01）。且pcDNA5．0-Gag单独免疫组及与IL-2联合免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数均高于空载体pcDNA5．0对照组。因此，构建真核表达质粒pcDNA5．0-Gag和pcDNA5．0-IL-2，用其联合免疫BALB／C小鼠所诱导的免疫反应以特异性细胞免疫应答为主，同时可产生体液免疫，且IL-2发挥了免疫佐剂的作用，为进一步将其用于MVV的防治奠定了基础。  相似文献   

马传染性贫血病毒第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA全基因序列分析     

全滟平  赵立平  韩秀娥  沈楠  吕晓玲  沈荣显  相文华 《中国预防兽医学报》2007,29(7):487-491,518

不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDDV在基因水平上的差异,本实验对无免疫保护效果的第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA进行了全基因序列测定,并与已测序的疫苗毒株进行序列比较。第19代和第26代FDDV全基因核苷酸序列同源性高达99.5%,与疫苗毒株全基因核苷酸序列的同源性分别为96.9%、96.7%。LTR是EIAV在细胞传代中变异最显著的区域,第19、26代FDDV的LTR与疫苗毒的LTR同源性仅为89.6%、89.3%。马传贫病毒的gag基因高度保守,第19、26代FDDV与疫苗毒株的gag基因推导氨基酸序列仅有2个氨基酸不同。第19、26代FDDV与疫苗毒株的pol基因、env基因的推导氨基酸序列的同源性分别为98.9%、98.8%、93.7%、93.6%。由序列比较结果可以推断,第19代、第26代FDDV不具有免疫保护效果的主要原因可能是由于LTR和env基因的变异,导致病毒复制能力下降或免疫原性丧失,不能诱导机体产生良好的免疫反应。  相似文献   

马传染性贫血病毒弱毒株LTR点突变型嵌合感染性克隆的构建     

左咏梅  吕晓玲  赵立平  李庆章  郝艳红  沈荣显  相文华  王晓钧 《中国预防兽医学报》2007,29(8):569-574

马传染性贫血病毒（Equine infectious anemia virus,EIAV）长末端重复序列（Long terminal repeat,LTR）是基因组中高度变异区之一,EIAV LTR的变异对于指导病毒的复制和病毒致病性具有重要的生物学意义。为了阐明我国马传染性贫血病毒弱毒疫苗毒力致弱的分子机制,由马传贫强毒至弱毒致弱过程中不同代次毒株LTR序列的分析,以驴胎皮肤弱毒株疫苗全长感染性克隆pLGFD3-8为父本,选取LTR R区的TAR起始碱基,poly（A）附加位点,采用反向遗传操作对其位点进行PCR体外定点突变,将弱毒序列构建的逆向点突变型全基因克隆转染到驴胎皮肤细胞（FDD）并在FDD上传代,通过逆转录酶活性（RT）检测、RT-PCR方法及real-time RT PCR检测并验证其感染性。检测结果为构建的逆向点突变型感染性克隆在FDD上被拯救,其衍生病毒感染的FDD上出现明显的细胞病变;细胞培养上清可检测到RT酶活性和RT-PCR阳性;电镜下可见大量典型的EIAV颗粒pLGFD-M点突变型嵌合克隆衍生病毒与其父本克隆衍生病毒pLGFD3-8复制水平相似。此结果为进一步深入研究LTR对马传染性贫血病毒复制水平和毒力的影响奠定了基础。  相似文献   

马流感A/马/京防/74-1(H7N7)毒株HA基因的序列分析   总被引：6，自引：0，他引：6  

王秀荣  杨建德  许景君  李冬梅  赵立平  邓国华  相文华 《中国预防兽医学报》2004,26(5):332-335

流感病毒(Influenza Virus)根据血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种表面抗原蛋白分为不同的亚型,马流感I型(H7N7)和Ⅱ型(H3N8)是其中比较重要的两个亚型.本研究应用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖马流感病毒A/马/京防/74-1(H7N7)毒株,TRIzol LS Reagent提取病毒RNA,RT-PCR扩增HA基因全片段,克隆到PMD18-T载体上,并进行了鉴定和序列测定.所获得的HA基因片段长1 727 bp,编码563个氨基酸残基.根据推导的氨基酸序列进行预测,有7个潜在的糖基化位点和16个半胱氨酸残基,通过序列分析推断,A/马/京防/74-1(H7N7)株病毒的HA来源于禽类,是一株通过基因重排出现的重组病毒.  相似文献   

蜂疗小经验     

何海涛  叶结成  陈越  赵立平  郑庚智 《中国蜂业》2004,55(1):21-21

▲蜂针治疗显神效2 0 0 2年 2月 1 4日 ,苟老汉神情忧郁来找我 ,说他的手上长了一个恶疔 ,有点发烧 ,问我能不能用蜜蜂螫刺治疗。我让苟老汉伸出左手 ,只见虎口部位长了一只芝麻粒大的小疙瘩 ,中间有个小白点儿。我用手指一碰 ,苟老汉直喊痛。到蜂箱巢门口捉两只蜂 ,先用一只螫  相似文献   

异源Harpin对软腐欧氏杆菌与植物互作关系的影响     

张晋丹  李艳琴  申泉  赵立平 《植物病理学报》2001,31(4):330-335,341

 本文通过三亲交配将带有梨火疫欧文氏杆菌功能完整的hrp基因簇的重组粘粒pCPP430转移到了胡萝卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovora) Se9R中。从接合子中提纯的质粒与pCPP430的大小、酶切图谱相同;以该质粒为模板,用针对hrpN序列的引物经PCR扩增得到与hrpN大小相同的片段;用地高辛标记的hrpN作为探针进行Southern blotting分析,在接合子中的质粒上得到预期的杂交带。接合子可以在烟草叶片上稳定地引起过敏反应。另外,接合子可以在寄主马铃薯叶片上引起过敏反应样枯斑,表明异源harpin的表达及功能不受软腐菌的抑制。该接合子在体外产生的果胶酸裂解酶活性与受体菌Se9R无明显差别。低浓度的接合子在马铃薯块茎上的软腐症状明显低于受体菌Se9R。外源harpin表达可能不改变软腐欧氏杆菌的致病力、而是通过诱导马铃薯抗性达到减轻发病的作用。  相似文献