鸡贫血病病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及其特性   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘岳龙  秦爱建  金文杰  叶建强  吉荣  崔治中  段玉友 《中国兽医学报》2003,23(1):30-32

将鸡贫血病病毒（chicken anaemia virus,CAV)VP2基因克隆入表达性载体PGEX-5X-3，在大肠杆菌以谷胱甘肽转移酶（GST）融合蛋白的形式获得了表达。以此表达产物免疫小鼠，制备抗CAV VP2的多克隆抗体。通过对CAV感染的MSB1细胞作间接免疫荧光试验（IFA）检测，结果为阳性，这表明表达产物保留了CAV相关的抗原特性，本研究为进一步探索CAV VP2的生物学特性奠定了基础。  相似文献   

雏鹅暴发鸭瘟病毒病     

贝怀国  冯连虎  张万红  刘岳龙 《养禽与禽病防治》2005,(12)

2004年6月,某养殖户的鹅群发生了以高热、流泪、排绿色粪便、两腿麻痹为特征的疾病,后经调查、诊治、病毒分离鉴定,确诊为雏鹅感染鸭瘟病毒。现将病例情况报道如下。1发病情况2004年6月某养殖户在饲养了1000只35日龄高邮鸭的同时,又购进隆昌鹅雏鹅700只,全群注射了抗小鹅瘟血清0.5m l/只。先是鸭群开始发病,鸭群发病后的第8天,鹅群(19日龄)也开始发病,并迅速波及到全群,先后用抗生素、磺胺类药物、抗小鹅瘟血清等治疗无效。发病至第6日送诊,已死亡506只,发病率80%,死亡率72.3%。2临床症状病程急,发病死亡快。主要表现为高热、食欲大减至不食…  相似文献   

鸡传染性腔上囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

李迎晓秦爱建  刘红梅邵红霞金文杰  刘岳龙 《中国兽医科技》2005,35(12):933-936

为了深入研究鸡传染性腔上囊病病毒（IBDV）VP2基因的结构和功能,利用Bac-to-Bac系统研制出含有VP2基因的重组杆状病毒rBac-VP2,将rBac-VP2感染Sf9细胞,并用抗IBDV VP2特异性单克隆抗体经间接免疫荧光试验检测,证实感染重组病毒Sf9细胞能高效表达IBDV VP2基因产物;Western-blotting分析结果表明,VP2基因表达产物的分子质量约为40 ku.  相似文献   

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究     

李娜  秦爱建  邵红霞  金文杰  刘岳龙 《农业科学与技术》2008,9(1):60-63

禽流感（AI）是由A型禽流感病毒（AIV）引起的一种发生于禽类的病毒性传染病。笔者以杂交瘤技术研制抗AIV共同抗原的特异单克隆抗体,旨在建立一种双抗体夹心ELISA方法快速检测AIV,以便为A型AIV的快速诊断技术的研究提供理论依据。  相似文献   

抗A型禽流感病毒核蛋白特异性单克隆抗体研究   总被引：6，自引：4，他引：2  

李娜  秦爱建  邵红霞  金文杰  刘岳龙 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(1):9-12

利用禽流感H9亚型病毒(AIV-H9)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经免疫荧光试验(IFA)检测,以研制抗禽流感病毒(AIV)单克隆抗体。结果获得了5株特异性抗AIV核蛋白(NP)的单克隆抗体细胞株,分别命名为AIV-NP-2C3、AIV-NP-6A5、AIV-NP-3H9、AIV-NP-7B4、AIV-NP-2H4。这5株单克隆抗体能与所有试验的AIV-H9病毒反应,Western blotting方法鉴定结果表明,单克隆抗体仅识别60 ku的蛋白抗原,而不与新城疫病毒、禽网状内皮组织增殖症病毒、传染性法氏囊病毒等反应。初步应用结果显示,以这些单克隆抗体建立的间接免疫荧光试验或ELISA方法可迅速检测出禽流感病毒,这些单克隆抗体在禽流感的预防监测中将发挥重要的作用。  相似文献   

徐州地区鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定及药敏试验   总被引：16，自引：0，他引：16  

许金俊  范海峰  金文杰  刘岳龙  秦爱建 《中国预防兽医学报》2006,28(5):503-506

从徐州地区临床疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中分离到细菌21株，通过细菌形态、培养特怔、生化试验和动物试验，鉴定为鸭疫里默氏杆菌菌株，对不同地区分离到的21株菌进行了24种常用抗菌药物的药敏试验，结果该24个菌株对头孢类药物、红霉素、链霉素、妥布霉素、新霉素、氯霉素、泰乐菌素、痢特灵等几种药物敏感性较高，对喹诺酮类、强力霉素、丁安卡那霉素、林肯霉素、庆大霉素、氟苯尼考、利福平、复方新诺明等均不同程度地产生了耐药性。不同地区分离到的鸭疫里默氏杆菌对不同抗菌药的敏感程度存在较大差异性，研究结果为该地区鸭传染性浆膜炎的药物防治提供了很好的理论依据.  相似文献   

牛γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达     

许金俊  秦爱建  金文杰  刘岳龙 《中国兽医学报》2006,26(6):626-630

应用RT-PCR技术从经植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛-γ干扰素基因(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)cDNA,并克隆到pGEM-T easy载体中,经过限制性酶切分析和测序证实,所克隆到的基因编码区序列与已报道的序列完全一致.将含信号肽的BoIFN-γ基因整个编码区cDNA亚克隆到杆状病毒转座载体pFastBac Ⅰ中,构建了转移载体pFastBac 1-BoIFN-γ,转座到宿主菌DH10 Bac中,在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的KGTIX LB平板上筛选白色菌落,提取DNA获得重组穿梭载体Bacmid-BoIFN-γ质粒,与脂质体共转染Sf9细胞,产生有感染力的重组杆状病毒reBac-BoIFN-γ.重组病毒经过传代扩增感染Sf9细胞,通过IFA试验、Western-blot和抗病毒活性测定证实,BoIFN-γ基因在感染的昆虫细胞和上清中得到了表达,上清中活性可达2.651×105U/mL.表达条件优化结果表明,不同MOI对rBoIFN-γ的表达产量影响不大,上清中干扰素活性在感染后5 d达到高峰.  相似文献   

表达马立克氏病病毒gI基因重组鸡痘病毒的免疫原性   总被引：2，自引：1，他引：2  

陈志琳  崔治中  秦爱建  张志  吉荣  刘岳龙  金文杰 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2002,23(2):10-12,16

以鸡痘病毒为载体，构建含马立克氏病病毒（MDV）gI基因的重组鸡痘病毒（rFPV)，并在鸡胚成纤维细胞（CEF）中表达gI基因，用重组FPV（命名为rFPV-MDV648gI）感染CEF，结果显示：rFPV-MDV648gI能在CEF中稳定复制。进一步用rFPV-MDV648gI接种无特定病原（SPF）鸡皮下组织，结果表明：鸡对rFPV-MDV648gI具有抗体反应性。  相似文献   

重组马立克病病毒CVI988/Rispens的构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘红梅  秦爱建  叶建强  陈鸿军  金文杰  刘岳龙 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2005,26(4):1-4

根据Ⅰ型马立克病病毒（MDV）强毒GA株基因序列,设计两对引物,用PCR方法扩增出CV1988／Rispens株的US10及其侧翼序列,分别克隆入pUC18载体中。经测序检测正确后,进一步插入含CMV启动子的绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达盒,获得了含EGFP报告基因的转移载体质粒pPUC18-US10-EGFP。通过同源重组,成功地筛选出表达EGFP的重组病毒rCV1988-EGFP,经传代证明重组rCV1988-EGFP在感染的CEF细胞中能稳定表达EGFP。结果表明：构建的重组转移载体质粒正确,US10是MDV复制非必需片段,为进一步利用US10区构建重组MDV多价基因工程疫苗奠定了基础。  相似文献   

禽源性大肠杆菌HPI irp2基因序列的扩增及比较   总被引：5，自引：1，他引：4  

金文杰  郑志明  王倩倩  秦爱建  刘岳龙  邵红霞 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2005,26(3):5-7

从养殖场发病家禽中分离到多株禽源性大肠杆菌（Escherichia coli）,用其中YZG040515、NTLFC040402、CHZ031016菌株提取细菌高致病性染色体DNA,根据耶尔森菌高致病性毒力岛（HPI）irp2基因设计引物,用PCR扩增出278 bp基因片段。将PCR产物克隆到pGEM-T-easy中,经EcoR I酶切鉴定为阳性者进行序列测定。结果表明：该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPI irp2基因的同源性高达98％以上。证明禽源性大肠杆菌中具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列,结合临床发病情况和流行病学,提示该毒力岛与日趋严重的家禽大肠杆菌病可能有一定的相关性。  相似文献