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1.
鸡白介素18基因原核表达质粒构建 总被引:7,自引:0,他引:7
根据已发表的江西土鸡白介素 -1 8(Ch IL-1 8) c DNA编码基因序列设计引物 ,用PCR技术从 p MDCh IL-1 8质粒扩增出编码鸡IL-1 8成熟蛋白基因 ,重组于 p BV2 2 0表达载体上 ,将重组质粒转化大肠杆菌 JM1 0 9(DE3 ) ,转化子经温度诱导的表达产物 ,SDS-PAGE电泳鉴定约 2万 ,N端开头 1 5个氨基酸序列测定分析 ,证明获得了鸡 IL-1 8成熟蛋白 ,为今后深入研究鸡 IL -1 8的生物学特性及其临床应用打下了基础 相似文献
2.
用PCR方法从人的基因组DNA中扩增了人血栓调节蛋白(hTM)基因,将其克隆到带有人EF-1α启动子的pEF-neo哺乳动物表达载体上,得到表达质粒pEF-TM。在转染pEF-TM的COS-1细胞中,hTM得到了瞬时表达,并且正确地定位到细胞膜上。用pEF-TM转染猪内皮细胞(PEC),经G418筛先得到稳定转染的克隆。凝血活性测定结果显示,表达hTM的PEC凝血时间明显延长,表明其抗凝血能力增强。通过显微注射方法,得到了1只F0代hTM转基因小鼠。Southern杂交结果表明,该转基因小鼠整合了9个拷贝的pEF-TM DNA,并能将外源DNA遗传给后代。 相似文献
3.
禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索 总被引:1,自引:0,他引:1
应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C州成熟外膜蛋白H基因(ompm H),将ompm H片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得了重组表达质粒pGEX-ompm H。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),当转化菌的D600nm值达到0.6~0.8时,对异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GST-ompm H表达的最适条件。结果,当细菌的D600nm值为0.6~0.8时,IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol/L,最佳诱导时间为4h,最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测。结果显示表达的融合蛋白GST-ompm H能与C48-1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应,证明pGEX-6p-1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。 相似文献
4.
禽大肠杆菌外膜蛋白基因C(ompC)的序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
根据 Gen Bank中人源大肠杆菌 K- 12外膜蛋白基因 C(omp C)的核苷酸序列设计引物 ,应用 PCR方法从禽大肠杆菌 O2 、O78株及它们的融合双价弱毒菌株 O2 ,78(Norr Chlr)中分别扩增得到 omp C基因 ,序列测定及分析比较发现 ,3个菌株的 om p C基因均由 170 2 nt组成 ,核苷酸序列完全相同 ,只有 1个大的开放性阅读框 (ORF) ,长 10 92 bp,编码由 36 3个氨基酸组成的前 Om p C蛋白 ,前 2 1个氨基酸残基组成信号肽 ,成熟的 Omp C蛋白由 342个氨基酸残基组成 ,Mr为 4 0 0 0 0。其氨基酸序列也完全相同。从基因水平上证明了禽大肠杆菌 O2 、O78株及融合双价弱毒菌株 O2 ,78(NorrChlr)存在相同的外膜蛋白 C抗原 ,从而为进一步研究 Omp C蛋白的免疫原性奠定了基础 相似文献
5.
一、训练观念和方法的差异。香港警犬训练队主张从犬出生3周后开始训练,主要是带犬熟悉环境,培养犬的工作欲望,规范犬的行为。这部分工作,我们通常称之为“幼训”,实践证明,经专业培训的人员进行“幼训“能有效提高犬的整体素质。 相似文献
6.
为了分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)近年在河南省的流行情况,本研究于2014年1月至2015年12月收集河南省不同地区的200份PED疑似病料进行S基因和ORF3基因检测,通过RT-PCR扩增、克隆测序及序列分析,显示15株河南流行株S基因和ORF3基因的部分氨基酸和核苷酸不同于参考株,发生了变异。其中15个毒株的S基因和ORF3基因变化显示,PEDV河南毒株和其他参考株均可分为两个群,基于S基因扩增的15株则独立成群,与其他参考毒株亲缘较远;基于ORF3基因扩增的15个毒株与国内分离株、美国株及韩国株均有较近的亲缘关系;同时,对于S基因和ORF3基因在整个进化关系中,本试验中的15个河南株均相对独立成群,与经典毒株CV777及国内所使用的疫苗株,亲缘关系较远。结果表明,PEDV有变异和进化的趋势,应从当前流行毒株中选用有效的疫苗才能更好地控制本病的发生。 相似文献
7.
8.
用全自动微生物鉴定系统(VITEK-32)鉴定了临床分离鸡致病菌,并分别进行了超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,并用试管两倍稀释法测定了各种抗生素对非产酶菌、产ESBLs菌的抗菌活性。结果表明,鉴定分离的33株致病菌有大肠埃希氏菌30株、阴沟肠杆菌1株、铜绿假单胞菌1株、法氏柠檬酸杆菌1株。在这些菌株中,首次从鸡中检测出法氏柠檬酸杆菌,所分离的33株致病菌中产ESBLs8株。产酶菌株对抗生素的耐药性严重,而抗生素与抑制剂联用能降低药物对细菌的最低抑菌浓度(MICs)。 相似文献
9.
多重PCR检测猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
根据GenBank上已发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)的VP2基因序列和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的gH基因序列,设计合成了两对特异引物,分别建立了PPV和PRV的单项PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了PPV和PRV的复合PCR诊断方法,即利用一次PCR反应,可同时扩增PPV的751bp和PRV355bp的特异性片段,而扩增猪圆环病毒Ⅱ型(PCV.2)及相应的培养细胞(PK-15)核酸结果均为阴性,对PPV和PRV的最低检出量分别为100Pg和10Pg的DNA。该方法适合对PPV和PRV的联合检测和鉴别诊断。 相似文献
10.