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用PCR方法从人的基因组DNA中扩增了人血栓调节蛋白（hTM)基因，将其克隆到带有人EF－1α启动子的pEF-neo哺乳动物表达载体上，得到表达质粒pEF-TM。在转染pEF-TM的COS－1细胞中，hTM得到了瞬时表达，并且正确地定位到细胞膜上。用pEF-TM转染猪内皮细胞（PEC），经G418筛先得到稳定转染的克隆。凝血活性测定结果显示，表达hTM的PEC凝血时间明显延长，表明其抗凝血能力增强。通过显微注射方法，得到了1只F0代hTM转基因小鼠。Southern杂交结果表明，该转基因小鼠整合了9个拷贝的pEF-TM DNA,并能将外源DNA遗传给后代。 相似文献
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生发泡移植过程对小鼠卵母细胞体外受精的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为研究生发泡(GV)移植后的重组卵母细胞能充分在体外成熟和发育,本试验比较了GV移植过程及体外成熟对小鼠卵母细胞体外受精的影响。通过透明带切口及GV移植获得的重组GV期卵母细胞的成熟率为87.0%(147/169),体外受精后发育到原核期胚和2-细胞期胚的比率分别为76.2%(112/147)和42.2%(62/147),与仅做透明带切口但不进行GV移植的对照组相似(P>0.05),表明GV移植过程未对卵母细胞体外受精后的早期胚胎发育能力产生不利影响。但与体内成熟的卵母细胞相比,体外成熟卵母细胞的受精率和卵裂率都明显降低,表明其进一步发育的能力受到影响。 相似文献
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将人类促衰变因子 ( human decay accelerating factor,h DAF)基因显微注入 51 7枚猪的受精卵 ,移植到2 6头受体母猪的输卵管内。 2 1头怀孕 ,产仔 93头。产仔后 ,取仔猪的耳或尾组织 ,提取总 DNA。以 5′-TGGCGAGAAGGACTCAGTGATCT-3′和 5′-TGAACTGTTGGTGGGACCTTGGA-3′为引物 ,进行 PCR扩增 ,有 1 8头显示阳性。转基因效率为 3 .5%( 1 8/ 51 7)。对存活的 1 4头转基因猪用免疫荧光法进行检测 ,并采用 MPIAS-50 0多媒体彩色病理图文分析系统进行图像分析 ,其中有 7头的动脉肌肉层中显现有荧光 ,其平均灰度在 1 2 7.3～ 1 70 .6之间 相似文献
4.
[目的]研究在不同条件下小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体的变化,为卵母细胞纺锤体的研究提供参考依据.[方法] 在不同条件下处理小鼠MⅡ期卵母细胞,通过免疫细胞化学方法和激光共聚焦扫描显微镜观察其纺锤体变化.[结果]卵母细胞在25 ℃、20 min时纺锤体异常,25 ℃、30 min或4 ℃、10 min时纺锤体缺失;5、10、20和40 μg/ml细胞松弛素B (CB)作用2 h未对纺锤体产生影响;卵母细胞在20 μmol/L秋水仙素中作用1 h纺锤体异常,40 μmol/L时作用1 h纺锤体缺失;在4%多聚甲醛中4 ℃条件下,卵母细胞纺锤体结构以固定时间为1～12 h效果较好.[结论]小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体对外界环境变化敏感,体外操作时控制外部环境是保持卵母细胞纺锤体正常生理功能的关键. 相似文献
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[目的]研究在不同条件下小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体的变化,为卵母细胞纺锤体的研究提供参考依据。[方法]在不同条件下处理小鼠MⅡ期卵母细胞,通过免疫细胞化学方法和激光共聚焦扫描显微镜观察其纺锤体变化。[结果]卵母细胞在25℃、20 min时纺锤体异常,25℃、30 min或4℃、10 min时纺锤体缺失;5、10、20和40μg/ml细胞松弛素B(CB)作用2 h未对纺锤体产生影响;卵母细胞在20μmol/L秋水仙素中作用1 h纺锤体异常,40μmol/L时作用1 h纺锤体缺失;在4%多聚甲醛中4℃条件下,卵母细胞纺锤体结构以固定时间为1~12 h效果较好。[结论]小鼠MⅡ期卵母细胞纺锤体对外界环境变化敏感,体外操作时控制外部环境是保持卵母细胞纺锤体正常生理功能的关键。 相似文献
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