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应用RT-PCR技术从FCV的F81细胞培养物中获得了该病毒的衣壳蛋白编码基因,再用一对特异性的引物,扩增其内所需的目的基因将其亚克隆到pET-28a载体,构建pET-FCV表达载体.经酶切,PCR及测序鉴定为FCV的特异序列.将阳性重组表达质粒转化E. Coli BL-21(DE3)菌,经IPTG诱导,表达产物用SDS-PAGE及Western-blot检测,显示表达产物以包涵体的形式存在,可与FCV阳性血产生特异性反应,表明表达产物具有良好的免疫反应原性. 相似文献
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采用RT-PCR和重组PCR扩增了猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)CH-GD株的全基因,并进行了序列测定,用DNAStar软件对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比较分析。结果表明,首次分离于中国广东的CH-GD株与各参考毒株有较大的差异。CH-GD株与各参考毒株之间的同源性仅为75.4%~77.1%,明显低于各参考毒株之间的同源性(78.9%~99.9%)。同时遗传进化树显示,14个分离株形成两大分支,CH-GD株独自在一分支,各分离株无明显的地域性差异。对FCV衣壳蛋白6个区(A~F)的分析结果发现,CH-GD株中A~F区的特点与报道的相符。此外还发现,CH-GD株有3个区域的3个连续的氨基酸发生了变异,与参考毒株相比,CH-GD株在这3个区域的抗原性和亲水性也都发生了相应的变化。 相似文献
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反向遗传操作作为一种新兴技术在RNA病毒的研究中发挥着重要作用,本文介绍了RNA病毒反向遗传学的研究方法以及RNA病毒反向遗传技术的最新研究进展和应用前景. 相似文献
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