口蹄疫与经典猪瘟二联RT-PCR诊断方法的建立及其应用     

刘海鹏  刘维全  江禹  夏平安  王本旭  王吉贵  马兴元  王萍  赵玉军 《中国畜牧兽医》2004,31(2):33-36

根据口蹄疫病毒(FMDV)与猪瘟病毒(CSFV)基因组序列高度保守区,设计合成2对引物,以CSFV和FMDV培养物提取RNA并反转录,进行RT-PCR特异性片段扩增,扩增片段大小分别为200 bp、141 bp.结果表明,扩增产物与设计的2对引物之间的序列大小一致.通过特异性与敏感性试验,CSFV与FMDV培养物均可扩增至10-5倍稀释,最终建立的二联RT-PCR方法对上述2种病毒的敏感性亦可达10-4倍稀释,约10 pg的总RNA,证明本法对上述2种病毒具有快速、特异和高度敏感的特点.  相似文献   

小齿短肛棒（虫脩）实验室饲养及断肢再生能力的观察     

江禹  刘维全  金爱军  王本旭  殷震  李华 《吉林农业大学学报》2002,24(4)

以榆树叶片为饲料 ,在室温条件下观察了小齿短肛棒 (Baculumminutidentatum)的发育过程及断肢的再生情况 ,并对虫体总RNA的提取方法进行了尝试。结果表明 :在实验条件下 ,小齿短肛棒整个发育期完成蜕皮 5次 ,7月份开始产卵 ,8月中旬成虫陆续死亡。断肢再生现象伴随蜕皮出现 ,是小齿短肛棒的一种极强的生物特性 ,且第 1次至第 3次蜕皮期间的再生现象明显 ,可能是研究断肢再生机制的理想时期。不同个体的再生能力未见明显差异 ,不同足的再生能力也没有显著差别 ,但伴随第 4次和第 5次蜕皮的再生现象较少出现。为小齿短肛棒的断肢再生机制研究积累了初步数据  相似文献   

禽流感与新城疫二联RT—PCR诊断方法的建立及其应用   总被引：6，自引：0，他引：6  

刘海鹏刘维全  江禹夏平安  王本旭王吉贵  马兴元王萍李晓燕  赵玉军 《中国兽医科技》2003,33(7):39-42

根据禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)基因组序列高度保守区，设计合成了2对引物，以AIV、NDV培养物提取RNA并反转录，进行RT-PCR特异性片段扩增，扩增的片段大小分别为470和320bp。结果，扩增产物与设计的2对引物之间的序列大小一致。通过特异性与敏感性试验，AIV、NDV培养物均可扩增至10^-4，表明本方法对2种病毒具有快速、特异和高度敏感的特点。  相似文献   

日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选     

马丽敏  李琳  胡乐鹏  何晔  李叶  任秀梅  靳朝  夏志平  王本旭 《中国预防兽医学报》2012,34(1):60-63

为筛选日本乙型脑炎病毒(JEV)的E抗原表位,本实验以抗JEV E蛋白的单克隆抗体(MAb)作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体七肽库,挑取噬菌体单克隆培养并采用MAb包被的ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEV E抗原模拟表位的氨基酸序列.设计合成包含该表位的E抗原15肽(E-365GGADSMSMAGMAVSYE-379)cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达质粒,诱导表达重组多肽并进行western blot验证.经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆采用MAb包被进行ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性.对重组多肽进行western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多克隆抗体.本实验成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为开展用JEV抗原表位探索JEV的防制研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要依据.  相似文献   

禽流感病毒、新城疫病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒多联RT-PCR诊断技术的建立   总被引：4，自引：0，他引：4  

刘维全  刘海鹏  江禹  王本旭  王吉贵  杨淑艳  孙绍光  涂长春  刘芃芃 《农业生物技术学报》2005,13(1):92-95

选择禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒（NDV)、猪瘟病毒(CSFV)和口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列高保守区，按照多联PCR引物的设计要求，利用DNAsis计算机软件设计并合成了4对特异性扩增引物，扩增片段大小分别为470、320、200和140bp。以AIV、NDV、CSFV和FMDV的培养物提取RNA并反转录，进行RT-PCR特异性扩增。结果表明，各单项RT-PCR扩增产物与设计的4对引物之间的序列大小一致。在分别建立了各病毒单项RT-PCR及AIV与NDV、CSFV与FMDV二联RT-PCR的基础上，进一步优化各种多联PCR扩增条件，成功建立了上述4种病毒的四联RT-PCR技术。经特异性和灵敏度实验证明，本方法具有高度的特异性和灵敏性，其灵敏度为10pg总RNA。在3h内即可完成样品的检测。  相似文献   

人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf9细胞中的表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

李华  刘维全  江禹  王本旭  殷震  王吉贵  齐顺章  王萍 《中国兽医学报》2001,21(3):258-262

对人胰岛素基因真核表达载体（pCMA／mINS）进行Xho I酶切，回收的含人胰岛素基因组基因的1608bp片段与线性化的杆状病载体pFast Bac I进行连接，获得重组载体pFast/mINS。将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经2次抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组载体Bacmid/mINS。将该载体转染Sf9细胞，获得了重组杆状病毒，经Tricine-SDS-PAGE和Western-blotting检测，重组杆状病毒在Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原，而细胞培养上清中未检测到胰岛素和胰岛素原。  相似文献   

日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选与鉴定     

马丽敏  李琳  任秀梅  李晔  何叶  靳朝  夏志平  王本旭 《中国兽医学报》2012,32(6):866-870

筛选日本乙型脑炎病毒（JEV）的E抗原表位,为开展用JEV模拟表位探索JEV的防治研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要的线索和依据。以抗JEvE蛋白的单克隆抗体作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体7肽库,挑取噬菌体单克隆培养并ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEVE抗原模拟表位的氨基酸序列。设计合成包含该表位的E抗原15肽（GGADSMSMAGMAVSY）cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达载体,诱导表达重组多肽并west-ernblot验证。经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性。对重组多肽进行Western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多抗。应用上述方法成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为下一步研究奠定了基础。  相似文献   

球虫散防治鸡柔嫩艾美尔球虫病试验   总被引：4，自引：0，他引：4  

张西臣  杨举  尹继刚  王本旭  张步武  李建华 《黑龙江畜牧兽医》2001,(9):27-27

试验观察了中药制剂球虫散分别以0．5％、1％和2％添加于饲料中的抗鸡柔嫩艾美尔球虫效力，结果发现将球虫散按1％以上添加于饲料中其抗球虫指数达到180以上，具有高效抗球虫作用。由于中药具有毒性低、残留少等优点，在防治鸡球虫病方面具有很好的应用前景。  相似文献