泰勒虫重组抗原Tams1-spag基因原核表达与纯化     

任方  易忠  米晓云  魏婕  马文戈  郭会玲  苗书魁  汪丽群  王延 《动物医学进展》2015,36(6)

为了在低成本的情况下,得到高浓度、高纯度的环形泰勒虫表面重组抗原的融合蛋白,设定表达过程中不同的OD600nm、IPTG浓度与诱导时间,探索最佳表达条件。通过KCl染色法切胶后分别经透析袋电洗脱法与快速离心法回收目的蛋白。对上述试验的蛋白样品进行SDS-PAGE和Western blot检测。结果表明,在OD600nm=1时加入浓度为1mmol/L IPTG,过夜诱导时,重组蛋白的表达量最大。在KCl染色法切胶回收目的条带的基础上,电洗脱法与快速离心法均能得到同等浓度的高纯度目的蛋白,经Western blot检测重组蛋白的生物活性没有改变,仍具有良好的反应原性。  相似文献   

响应面法优化牛血二次发酵条件     

陈宇星  郑玉才  饶开晴  魏婕 《饲料研究》2018,(2)

在牛血二次发酵过程中会产生出更多的小分子蛋白质,有利于提高动物对牛血蛋白质的吸收和利用,提高牛血在饲料中的利用价值。试验在首次发酵牛血的基础上进行二次发酵,利用响应面法更加准确地寻找出高效的二次发酵工艺及最适宜的发酵条件。试验结果表明:在发酵时间为50 h、温度为30℃和黑曲霉接种量为0.3%时,发酵后牛血小肽含量最高,最大预测值为提高7.7%,实测值为提高7.9%,两者基本相符。  相似文献   

IPTG诱导浓度、时间对AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响     

魏婕  易忠  魏玉荣  王海烽  胡尔玛西  符子华  冉多良 《中国畜牧兽医》2009,36(5)

将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21.用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋向,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件.结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大.最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大.  相似文献   

口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达     

王海烽  易忠  魏玉荣  魏婕  胡尔马西  符子华 《中国畜牧兽医》2009,36(10):50-54

针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题,作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、时间等因素均进行了探索,以观察VP1蛋白的可溶性情况。通过PCR技术将VP1基因克隆至pGEM-T载体中,然后将pET-28a(+)和pGEM-T载体分别进行双酶切,构建重组的pET-28a-VP1载体,将重组载体转化至BL21中,诱导后经SDS-PAGE检测可见约29 ku的目的蛋白条带。插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在,上清中的可溶性蛋白甚微。试验结果表明,这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联。  相似文献   

泰勒焦虫重组蛋白 TaSP-Tams1-SPAG1间接ELISA 检测方法的建立     

魏玉荣  易忠  马文戈  郭会玲  向银珍  米晓云  陈智  魏婕  苗书魁  吴国梁  祁巧芬  埃尼瓦尔·太外库力  黄炯 《新疆农业大学学报》2013,(5):360-365

以真核表达的焦虫表面抗原重组蛋白 TaSP-Tams1-SPAG1作为 ELISA 板包被抗原,通过方阵实验确定抗原包被浓度,探索抗原包被时间、温度、一抗及二抗血清稀释度及作用时间,建立牛环形泰勒焦虫表面抗原重组蛋白 ELISA 方法.结果得出 TaSP-Tams1-SPAG1的最佳包被浓度为10μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100, ELISA 阳性反应的临界值为 OD 492nm ≥0．348,重复试验变异系数小于12％,所建立的 ELISA 方法不与牛巴贝斯虫及牛瑟氏泰勒虫血清发生反应.TaSP-Tams1-SPAG1为抗原建立的 ELISA 方法特异性强,敏感度高,重复性好,为牛环形泰勒焦虫病的准确检测及防治提供技术支持.  相似文献   

IPTG诱导浓度、时间对Asia I型口蹄疫病毒VP1蛋白表达的影响     

魏婕  易忠  魏玉荣  王海烽  胡尔玛西  符子华  冉多良 《中国畜牧兽医》2009,36(5):63-65

将口蹄疫病毒VP1基因插入原核表达载体pET-28a中,转化至大肠杆菌BL21。用不同的IPTG浓度与不同诱导时间诱导菌株表达VP1蛋白,分析不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响,以确定最佳表达条件。结果表明,在一定范围内,随IPTG浓度的增高,表达量并不会随之增大;而在菌体对数生长期内,随诱导时间的延长,表达量会随之增大。最后确定当IPTG浓度为3 mmol/L,诱导表达到最长时间9 h时,VP1蛋白表达量最大。  相似文献   

口蹄疫病毒VP1基因的原核可溶性表达     

王海烽  易忠  魏玉荣  魏婕  胡尔马西  符子华 《中国畜牧兽医》2009,36(10)

针对重组原核表达载体表达目的蛋白以包涵体形式存在的问题,作者对影响外源蛋白表达的IPTG的浓度、温度、时间等因素均进行了探索.以观察VP1蛋白的可溶性情况.通过PCR技术将VP1基因克隆至pGEM-T载体中,然后将pET-28a(+)和pGEM-T载体分别进行双酶切.构建重组的pET-28a-VP1载体,将重组载体转化至BL21中,诱导后经SDS-PAGE检测可见约29 ku的目的蛋白条带.插入的外源目的蛋白主要以包涵体的形式存在,上清中的可溶性蛋白甚微.试验结果表明,这可能与蛋白本身的氨基酸组成有重要关联.  相似文献   

环形泰勒虫表面抗原Tams1-Spag1串联表达及其蛋白的生物信息学分析     

任方  易忠  米晓云  魏婕  马文戈  郭会玲  苗书魁  汪立群  王延  薛英  黄炯  魏玉荣 《畜牧与兽医》2015,(3):14-18

为了研究环形泰勒虫表面抗原特性,以原核表达系统串联表达表面抗原Tams1-Spag1基因,并对其蛋白进行生物信息学分析。通过PCR技术扩增Tams1-Spag1基因片段后构建重组质粒p ET-28a-Tams1-Spag1,IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE与Western-blot检测显示,得到大小与预期分子量相当的目的蛋白;生物信息学分析发现,此串联重组蛋白Tams1-Spag1具有219个氨基酸,属于非分泌型亲水性蛋白,分别具有13个与11个可能的糖基化与磷酸化位点,存在两个低复杂性的结构域,一个NOT的结构域,预测有6个B细胞表位优势区段与10个T细胞表位优势区段,存在两段交叉反应性表位肽。本研究为深入探讨串联重组蛋白的免疫原性提供理论依据。  相似文献   

狂犬病病毒SRV9株N、P、G和L蛋白基因的克隆及表达载体构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

魏玉荣  易忠  符子华  马素贞  王晓萍  简子健  魏婕  王海烽  朱晶晶 《新疆农业科学》2009,46(2):354

以狂犬病病毒RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆获取N、P、G及L蛋白编码基因核苷酸序列,应用定向克隆技术,构建真核表达载体 pcDNA3.1-N、pcDNA3.1-P、pcDNA3.1-G及pcDNA3.1-L.经测序鉴定证实获取的N、P、G及L蛋白区全长核苷酸序列与文献报道的一致,并成功构建了其真核表达载体.  相似文献   

利用乙肝核心抗原展示口蹄疫病毒2C蛋白表位     

魏婕  魏玉荣  薛英  米晓云  苗书魁  易忠  马文戈  郭会玲  薛晶 《新疆农业科学》2014,51(12):2274

[目的]利用乙肝核心蛋白(Hepatitis B virus core protein,HBc)自我组装的能力将口蹄疫病毒(Foot and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白2C的抗原表位插入到HBc的主要免疫优势区(Major immunodominant region,MIR),使2C的表位展示在衣壳表面,鉴定其是否具有免疫反应性.[方法]人工合成筛选的2C蛋白表位序列,将其插入HBc的MIR区,构建原核表达质粒p△HBc2C,室温条件下,1mM IPTG过夜诱导表达蛋白,诱导物离心后SDS-PAGE凝胶电泳分别检测沉淀和上清是否有蛋白表达,Western-blot鉴定表达蛋白是否具有免疫反应性.[结果]SDS-PAGE和Western-blot鉴定,沉淀中25 kD处有特异性条带出现,与预期的23 kD蛋白相符,证明2C蛋白具有免疫反应性.[结论]利用HBc自我组装空衣壳的能力展示筛选的2C蛋白抗原表位具有免疫反应性.  相似文献