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为研制一种用于快速检测鸡毒支原体(MG)的胶体金免疫层析试纸条,采用直径20nm的胶体金颗粒标记纯化的MG多克隆抗体,硝酸纤维素膜检测线和质检线分别喷加纯化的MG多克隆抗体和兔抗鸡IgG抗体,制作胶体金试纸条。试纸条检测MG阳性显示两条红色反应条带;阴性为一条红色反应带。本试纸条可检测到1∶1 280倍稀释的MG抗原,即颜色变化单位为8×104 CCU/mL,具有高度的灵敏性。用试纸条检测衣原体、滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡大肠埃希菌和鸡白痢沙门菌等均呈阴性,表明该试纸条具有较好的特异性。对试纸条检测呈MG阳性的38只病鸡进行MG培养验证,所得结果一致;同时对MG培养检测的另外95份病鸡样品进行试纸条测试比对,符合率为96.84%,证明该试纸条具有很高的准确性。该胶体金免疫层析试纸条检测MG操作简单,灵敏度、准确度、特异性等均符合要求,可以用于养殖场批量MG的检测。 相似文献
2.
从临床症状、组织病理学变化、病原形态学鉴定等方面对一起鸡棘沟赖利绦虫病进行诊断。结果表明,病鸡生长缓慢,消化道增粗、肿大,肠内充满大量黄褐色液体。十二指肠有凸起的白色结节和散在出血斑,HE染色显示肠黏膜层脱落并伴有大量红细胞浸润。病鸡十二指肠、空肠和回肠发现大量绦虫虫体,体长5cm~10cm,头节四周有4个圆形吸盘,中央有1个突起的顶突,顶突上分布有两圈小钩。颈节节片生殖系统未发育成熟,染色不明显。成节节片有一组生殖系统,生殖孔交替开口于节片外缘上1/3处。雄茎囊位于排泄孔外侧,睾丸数目30个~40个。孕节子宫退化,被大量卵囊所取代,散在分布于节片中,每个卵囊内有1个已胚化的六钩蚴。综合以上结果判定病鸡所患寄生虫病为棘沟赖利绦虫病。 相似文献
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虽然H3、H9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)是低致病性禽流感病毒,但其具有跨宿主感染哺乳动物的能力,对社会公共卫生安全具有重大的潜在危害,因而对这些亚型病毒的监测极其重要。通过比对GenBank上H3、H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了分别针对H3 AIV和H9 AIV的特异性探针。特异性试验和标准曲线试验的结果显示,这两个探针仅分别特异性识别H3、H9亚型AIV,且具有较好的扩增效率。通过重组质粒pMD19-T-H3HA和pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板,进行敏感性实验。结果表明,本研究所建立的荧光定量PCR方法能检测到100个DNA拷贝数H3 AIV和10个DNA拷贝数的H9 AIV,比传统PCR方法敏感性分别提高了100倍和1000倍。此外,本方法还能检测到10 EID50的H3亚型AIV或H9亚型AIV,比传统PCR方法检测敏感性均提高了1000倍。批间和批内试验的变异系数均小于3%,表明本研究建立的方法具有较好的重复性。此外,与传统PCR方法相比,用H3、H9亚型AIV双重荧光定量PCR方法检测人工感染动物的肺组织时,针对H3 AIV的敏感性提高了10~100倍,针对H9 AIV的敏感性提高了100倍。综上所述,本研究所建立的H3、H9亚型禽流感病毒双重荧光定量PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对H3、H9亚型禽流感病毒监测具有重要的应用价值。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的分离与鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
从山西各地区疑似鸡传染性支气管炎(IB)的病料中,分离到5株鸡传染性支气管炎病毒(IBV)分离株,并对分离病毒进行了病毒形态观察、对鸡新城疫病毒(NDV)的干扰、鸡胚致病性试验、动物回归试验、血凝特性试验、病毒理化特性测定等生物特性鉴定及IBV N基因特异性片段的检测.电镜观察,可见直径为60~120 am,有囊膜及纤突呈冠状排列的病毒粒子;对NDV有明显的干扰作用;分离株的传代物均有明显的致鸡胚矮小化作用;动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大、花斑肾现象,输尿管内充塞大量尿酸盐;无直接血凝性,经1%胰酶处理后可凝集鸡红细胞;分离株对乙醚和氯仿敏感;采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对分离毒株进行扩增,结果均扩增出特异N基因核酸片段. 相似文献
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设计套式引物,内套引物含有BamHⅠ/XhoⅡ酶切位点,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(UEV)结构蛋白基因ORF2部分片段,长度为634bp,将其克隆于PGEX-T载体,测序结果表明插入的片段属于戊型肝炎病毒ORF2部分,将该片段插入PproEXHTb表达载体,经酶切鉴定证实获得了重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1mmol/L IPTG诱导,得到表达,表达蛋白分子量为27Ku,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。 相似文献
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猪群HEV血清抗体调查及一株新的猪HEV ORF2部分基因序列分析 总被引:5,自引:2,他引:5
戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)主要引起人的戊型肝炎,新近研究发现猪在病毒传播中可能发挥重要作用.本研究对我国部分省区HEV感染血清学调查,在被检的1 138份血清中,有666份(57.5%)为HEV抗体阳性,猪群抗体阳性率随着月龄增长而升高.通过RT-PCR方法从一份猪粪中扩增并克隆了HEVORF2 N端主要抗原决定区339bp基因片段,序列分析显示,该段基因与我国人群HEV基因4型毒株核苷酸序列同源性为85.9%,但氨基酸序列完全一致.这一结果提示我国猪群存在广泛的HEV感染,并在一定程度上与人群HEV毒株密切相关. 相似文献
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为研究细胞外脂肪酸结合蛋白Ex-FABP对胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡血清中凋亡因子B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)的影响,试验采用连续2 d饲喂含有福美双的日粮来诱导构建肉鸡TD模型,共设置4组正常日粮组(健康组)、4组添加福美双日粮组(福美双组)和1组空白对照组,然后注射Ex-FABP蛋白。结果表明,福美双组和健康组分别注射重组Ex-FABP蛋白后,血清中Bcl-2蛋白浓度相比福美双对照组、健康对照组和空白对照组显著升高。重组鸡Ex-FABP蛋白可能通过刺激机体血清中Bcl-2蛋白的表达,从而抑制软骨生长板细胞凋亡,以发挥治疗TD的作用。研究结果可为TD肉鸡的治疗提供新的思路和方法。 相似文献
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猪戊型肝炎病毒结构蛋白片段的表达及其在ELISA中的初步应用 总被引:6,自引:0,他引:6
为建立一种快速的猪戊型肝炎病毒抗体检测方法,根据已克隆的戊型肝炎病毒株DQ1结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计一对引物,上游引物和下游引物分别带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,用PCR方法扩增,获得369bp大小的相应片段,位于ORF2128—497bp处。将扩增片段克隆到pET-32a构建了原核表达载体pET32a—D001,经测序证明该片段正确插入。将pET32a—D001转化BL21并诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达蛋白大小为33ku,Western-blot结果表明表达的蛋白质具有生物活性,将表达蛋白作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立了ELISA诊断方法。 相似文献
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一株鸡传染性支气管炎病毒地方分离株膜蛋白基因的遗传变异分析 总被引:1,自引:0,他引:1
摘要:对从山西省分离到的1株IBV (IBVSX16)的膜蛋白基因片段进行序列测定及分析,结果发现, IBVSX16株膜蛋白基因含有一个长681bp的ORF,编码226个氨基酸残基组成的多肽,与疫苗株H120和我国分离株LX4推导的氨基酸序列比对发现,存在基因突变现象,未发现缺失和插入现象,变异主要发生在2~l7位。系统进化关系显示19株IBV毒株分属于5个群。IBVSX16株位于第II群,我国IBV分离毒株主要集中在第III群和第Ⅳ群,具有较明显的地理区域性,可见IBV分离株在基因进化关系上形成了自己较为独立的进化群。关键词:鸡传染性支气管炎病毒;M基因;遗传变异 相似文献