牦牛KDM4A基因克隆、组织表达谱及其在卵母细胞和颗粒细胞中的表达     

韩杰  熊显荣  蔡雯祎  杨显英  阿果约达  张燕红  李键 《畜牧兽医学报》2018,(2)

本研究旨在阐明牦牛KDM4A基因的表达特性及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞中的作用。采集牦牛心、肝、脾、卵巢、肺、肾、睾丸、小肠、子宫、胃、大脑组织,以GenBank上已发布的黄牛KDM4A基因序列设计引物,利用RT-PCR方法扩增克隆牦牛KDM4A基因及检测其在牦牛各组织中的表达谱,并使用在线软件ExPASY分析KDM4A基因的结构和功能。采用实时荧光定量PCR法检测牦牛不同时期卵母细胞和颗粒细胞中KDM4A基因的表达水平。结果表明,本研究克隆得到牦牛KDM4A基因3 289bp的cDNA序列。牦牛KDM4A核苷酸序列与其它哺乳动物的遗传距离较近,表明KDM4A基因在进化中较为保守。牦牛KDM4A基因CDs区为3 201bp,编码1 066个氨基酸残基,相对分子质量122.48ku。KDM4A蛋白为亲水不稳定的酸性蛋白,无跨膜区和信号肽,二级结构主要包含α-螺旋和无规卷曲,与三级结构分析结果一致。KDM4A基因在所选牦牛组织样本中均有表达,其中在卵巢、脾和睾丸中表达量最高。牦牛KDM4A mRNA在MII期颗粒细胞中表达量显著高于在MI期和GV期颗粒细胞中的表达量(P0.05),GV期卵母细胞中,KDM4A mRNA的表达水平显著高于在MI期和MII期卵母细胞中的表达量(P0.05)。综上表明,本研究成功克隆了KDM4A基因及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞成熟过程中mRNA表达水平的差异,表明KDM4A基因在卵母细胞及颗粒细胞成熟过程中发挥一定作用。  相似文献   

波尔山羊胚胎数量、质量与受体移植妊娠率的关系   总被引：4，自引：0，他引：4  

张红  李键  马保华  邓小东  王波 《四川畜牧兽医》2001,28(11):25-25,27

本文就波尔山羊胚胎数量，质量与受体移植妊娠率的关系进行了探讨。结果表明：胚胎质量优劣是直接影响胚胎移植成功率的关键因素。移植胚胎数量因品种不同有差异。移植双胚，奶山羊受体胚胎成羔率53．4％，明显高于成都麻羊胚胎成羔率36．3％，成都麻羊单胚成羔率为66．7％。  相似文献   

我省最早北移试种成功的一株橡胶树记盈江橡胶母树     

李键 《云南热作科技》1989,12(1):26-33

  相似文献   

17β-雌二醇-ARIS构建及其标准曲线的质量评估     

周乐  史远刚  李键  王建辰 《动物医学进展》2001,22(2):77-79

以 1 7β-雌二醇 -黄素腺嘌呤二核苷酸结合物为标记物 ,以葡萄糖氧化酶为全酶 ,建立了 1 7β-雌二醇脱辅基酶再激活免疫测定系统 (1 7β- E2 - ARIS) ,完成了两条标准曲线的制作 ,通过 logit代换法对两条标准曲线进行了直线回归。两条标准曲线的拟合度 (r)分别为0 .996 7* * 和 0 .9991 * * ,灵敏度分别为 1 1 .5 4pg· m L- 1 (2 . 31 pg·孔 - 1 )和 1 4.88pg·m L- 1 (2 . 98pg·孔 - 1 ) ,平均变异系数(CV% )分别为 4.6 4%和 9.34% ,测定范围为 31 .2 5～ 1 0 0 0 pg·m L- 1 。  相似文献   

17β─雌二醇主动免疫对公兔生殖的影响     

李键  刘智喜  周乐  武浩  贾维贞 《中国兽医学报》1997,(1)

以１７β－雌二醇－６－人血清白蛋白对新西兰公兔进行主动免疫，用ＲＩＡ检测抗体滴度和１７β－雌二醇及睾酮浓度，并检测睾丸重量和间质细胞面积。结果，试验组各兔均不同程度地产生了１７β－雌二醇抗体，其血浆１７β－雌二醇浓度极显著地低于对照组〔（２０．３±２１．６）ｎｇ／Ｌ，（１６７．７±４９．６）ｎｇ／Ｌ，Ｐ＜０．００１〕，睾酮浓度极显著地高于对照组〔（７．３±７．１）μｇ／Ｌ，（０．５２±０．２９）μｇ／Ｌ，Ｐ＜０．０１〕。每侧睾丸重量和间质细胞面积均极显著地大于对照组〔（３．９４±０．９３）ｇ和（２５２．２５±８５．７８）μｍ２，（２．９８±０．７２）ｇ和（１６１．７９±３６．４５）μｍ２，Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．００１〕。提示１７β－雌二醇主动免疫可望成为提高雄性动物生育力的有效途径之一  相似文献   

犏牛和牦牛ESCO2基因的序列特征及其在睾丸中的表达对比分析     

闵星宇  杨丽雪  杨满珍  胡宇磊  于海玲  杨璐瑜  李键  熊显荣 《畜牧兽医学报》2021,52(11):3126-3136

旨在克隆犏牛和牦牛姐妹染色单体内聚建立蛋白2（establishment of sister chromatid cohesion N-acetyltransferase 2,ESCO2）基因,并分析其在不同发育阶段睾丸中的表达与定位,为进一步解析ESCO2在减数分裂过程中的作用机制提供理论依据。本研究以健康雄性犏牛及牦牛为试验动物,根据年龄分为胎牛组（5~6月龄）、幼年组（1~2岁）和成年组（3~4岁）,每组各3头。通过RT-PCR技术克隆犏牛和牦牛ESCO2基因并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR （quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测ESCO2基因在犏牛不同组织中的表达谱,比较分析ESCO2在犏牛和牦牛不同时期睾丸中的表达规律,利用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）技术检测ESCO2蛋白的细胞定位和表达差异。结果显示,犏牛ESCO2基因（GenBank登录号：MW198470） CDS区为1 833 bp,编码610个氨基酸,与牦牛相比,犏牛ESCO2序列第301~319位多19个氨基酸,另有3个氨基酸突变;犏牛ESCO2蛋白序列与黄牛的同源性高于其他哺乳动物;ESCO2可能与SMC3、SMC1A、PDS5A、PDS5B、STAG2等蛋白相互作用,互作蛋白功能与姐妹染色单体凝聚、减数分裂细胞周期、DNA修复、细胞分裂和染色体重构等生物学过程相关。ESCO2在犏牛各组织中均有表达,但在睾丸中的相对表达水平显著高于其它组织（P<0.05）;在犏牛睾丸中的表达随年龄增长呈上升趋势,幼年和成年时期犏牛睾丸中ESCO2的表达显著低于同时期牦牛（P<0.05）;IHC染色结果发现,雄性犏牛减数分裂阻滞于初级精母细胞,ESCO2蛋白在犏牛初级精母细胞中无表达并与牦牛存在差异。本研究结果表明,犏牛与牦牛的ESCO2基因、蛋白序列差异较大,且在睾丸发育过程中的表达模式差异显著,这可能是引起雄性犏牛减数分裂阻滞及不育的原因之一,其具体作用机制有待进一步研究。  相似文献   

应用MTT法检测兔腹腔巨噬细胞的增殖效应     

许生成  李键 《青海畜牧兽医学院学报》1997,14(2):7-9

应用ＭＴＴ法检测兔腹腔巨细胞的增殖效应。结果表明：免疫增殖组兔吸光值（ＯＤ）为９．４３４±０．０３２，刺激指数（ＳＩ）为３．５９±０．２７，增长指数（ＧＩ）为２．６５±０．４３，对照组兔ＯＤ为０．２２５±０．０３３，ＳＩ为１．８７±０．２８，ＧＩ为１．１４±０．１０，两组差异明显。拟提示此法可以作为检测巨噬细胞免疫力的方法之一。  相似文献   

矿区弃土的发育     

Janm.  D 李键 《水土保持应用技术》1990,(2):33-35,30

我们对8个矿区的弃土进行了研究,目的是决定今后如何使土壤尽快的发育.这8个矿区分别地处伊利诺斯州的东南西部,开采年限在5到64年之间.每个矿区采样坑用手工挖掘,每层土进行取样在实验室进行分析.经分析发现矿区废弃土最明显的变化是所有矿区的A层土得到了发育并由于有机质的存在颜色已变黑.  相似文献   

牦牛G蛋白信号转导调节因子2克隆及序列分析     

李雪峰  王利  李键  字向东  文勇立  钟金城  江明锋  兰道亮  熊显荣 《黑龙江畜牧兽医》2015,(3):18-21

为了初步探讨牦牛RGS2基因的结构和功能,试验采用RT-PCR方法及TA克隆法得到麦洼牦牛RGS2基因,并运用不同的生物信息学软件对序列进行分析。结果表明:牦牛RGS2基因系列含1个540 bp的开放阅读框,共编码178个氨基酸,Gen Bank数据库中登录号为FJ786041。编码Phe的密码子UUU、编码Leu的密码子UUG、编码Ile的密码子AUU等20种密码子为该基因的偏好性密码子,确定的27种最优密码子均以G或C结尾。RGS2氨基酸序列与普通牛、绵羊、山羊相似性分别为99.5%、96.3%、96.1%。系统发育树上,牦牛与普通牛聚在一起,亲缘关系最近。  相似文献   

奶牛X性控冻精的卵胞质内精子注射研究     

徐红强  李键  马保华  郜勇  刘闯  赵晓娥 《农业生物技术学报》2010,18(5)

探讨奶牛X性控冻精的卵胞质内单精子注射(ICSI)技术的可行性及显微操作条件对奶牛X性控冻精ICSI效果的影响.结果表明,注射运动性控冻精ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率均高于不运动组,但差异不显著(P>0.05).分别用5%、8%和10%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的精子操作液处理性控冻精,进行ICSI操作,ICSI卵的卵裂率差异不显著;但PVP在5%和10%时,正常卵裂率分别是78.4%和69.1%(P<0.05),囊胚率分别是29.7%和20.4%(P<0.05).精子显微注射时,将卵母细胞的极体调整在相当于时钟6点与12点的位置时,所获ICSI卵的卵裂率差异不显著,但正常卵裂率(76.4%,66.7%)和囊胚率(28.6%,19.0%)明显提高(P<0.05).结论认为,进行奶牛X性控冻精ICSI操作时,应选用运动精子,并用含5%PVP的精子操作液进行处理,而且注射在卵母细胞极体置于6点的位置,有利于ICSI卵体外发育.  相似文献