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旨在获得山羊肉毒碱棕榈酰基转移酶Ⅰ肝脏亚型CPT1A(Carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)基因序列,分析其生物学特征,阐明其组织及细胞分化时序表达规律,同时揭示CPT1A基因在背最长肌、股二头肌、臂三头肌中与肌内脂肪含量(IMF)的关系。选取7只1周岁健康简州大耳羊为试验动物,屠宰后迅速采集心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、股二头肌、臂三头肌、皮下脂肪和腹间脂肪组织样品,利用TRIzol法提取总RNA。采用RT-PCR法克隆山羊CPT1A基因,进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术检测CPT1A基因在不同组织中的表达水平以及CPT1A在山羊前体脂肪细胞分化过程中的时序表达。使用皮尔逊相关系数进行CPT1A基因表达量与IMF含量相关性分析。通过克隆得到CPT1A基因序列(MH345735)为2 380 bp,包含CDS全长2 319 bp,5′UTR 38 bp和3′UTR 23 bp,编码773个氨基酸。组织表达结果显示,CPT1A在简州大耳羊肝脏和肾脏中的表达水平极显著高于其他组织(P0.01)。细胞时序表达定量结果显示,CPT1A在诱导分化0～5 d逐渐升高,在第5天表达量最高(P0.01),5～9 d逐渐下降。CPTA基因表达量与IMF含量相关性分析结果显示,CPT1A基因表达量与各肌肉组织肌内脂肪含量均显著正相关。结果表明,CPT1A可能在肌内脂肪沉积过程中具有重要调控作用,为进一步研究CPT1A调控山羊脂质代谢的机理研究提供参考。 相似文献
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文章旨在开发一种适用于组装维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)胶体金快速检测试纸条的胶体金标记抗体。试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,按柠檬酸三钠加入体积（75、100、150、200μL）分为1~4组,作为试验组,另设空白对照组。5支试管混合液分别水浴加热后肉眼观察胶体金颜色,计算胶体金粒径,进行抗体标记浓度筛选和pH优化。结果显示,组别3胶体金的颜色呈酒红色,最大吸收波长为524nm,胶体金粒径为22.10nm,符合胶体金最佳标准。当兔抗-Lam B抗体的加入浓度为7μg/μL,pH为8.5时具有最大吸光度为0.6439。可见,该研究胶体金标记兔抗-维氏气单胞菌Lam B多克隆抗体制备中柠檬酸三钠与氯化金四水合物的最佳比例为150μL:10mL,兔抗-Lam B多克隆抗体的最佳浓度为7μg/μL,反应体系最佳pH为8.5。 相似文献
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