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肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立肠致病性大肠杆菌(EPEC)的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。 相似文献
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禽流感已成为国际上广泛关注的公共卫生事件,因此,加强对流感状况的认识和了解将有助于人们有效地防控流感。本文对禽流感病毒的流行现状及对辽宁省畜牧业的影响进行综述,旨在为有效防制禽流感提供理论依据。 相似文献
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利用基因工程技术制备的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因原核表达产物重组N蛋白作为抗原诊断试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂建立了间接竞争性ELISA检测细胞培养物中的TGEV病原的方法,并确定了间接竞争性ELISA操作流程中的最佳反应条件。在间接竞争性ELISA中,最佳抗原包被量为0.25卢g/孔;竞争抗原与单克隆抗体作用的最适时间为1h,反应温度为37℃;选择1h作为酶标抗体作用的最佳时间;底物液最佳作用时间为10min;选择样品的抑制率50%为其临界值;所用封闭液0.5%的聚乙烯醇PBS溶液在4℃冰箱中可密封保存6个月,封闭时间为120min;特异性试验表明与猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道腹泻性病毒均无交叉反应。本试验建立的间接竞争性ELIsA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为TGEV的疫情监测、及时而准确的诊断奠定了基础。 相似文献
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鸡源性大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶基因型分布 总被引:1,自引:1,他引:0
摘要: 检测鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型并了解辽宁省鸡源性大肠杆菌产ESBLs基因型分布。对大连4个地区不同鸡场临床分离32株产ESBLs鸡大肠杆菌分别用TEM、OXA、CTX-M和SHV等4种通用引物进行PCR扩增确定其基因型。结果显示32株鸡大肠杆菌均检出TEM型基因、12株检出CTX-M型基因、2株检出OXA型、未检出SHV型;TEM+CTX-M双阳性检出11株、TEM+OXA双阳性检出2株。TEM基因亚型占检出比例最高(100%)。结论:目前辽宁省产ESBLs鸡大肠杆菌基因亚型以TEM为主,其次为CTX-M型,未发现SHV型;以TEM+CTX-M双阳性检出率最高(34.4%)。 相似文献
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为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VP toxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为4.9 CFU/mL,利用该检测方法对采集的150份样品进行检测,共计检出3份VP阳性样品,与国标法(GB 4789.7-2013)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。 相似文献
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单核增生性李斯特杆菌(L.monocytogenes)的主要毒力基因hly与融合表达载体pGEX-6P-1相连,转化大肠杆菌BL-21。在摇床条件下,利用异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)为诱导剂,分析比较不同IPTG浓度对表达产物的影响,以确定最佳的IPTG浓度。结果表明,在装有LB培养基的三角瓶中,在37℃情况下,当IPTG终浓度为0.6mmol.L-1时,hly基因的表达量最大。当再增加IPTG的浓度时,抑制重组蛋白的表达。Western-blot分析,所表达的蛋白具有抗原特异性。实验为重组李氏溶血素的工业化生产提供依据。 相似文献
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为了研究欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)辽宁分离株的遗传变异情况及分子生物学特征,根据欧洲型PRRSV标准毒株LV设计15对引物,对LNEU12毒株全基因分段进行扩增并测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因,然后进行序列的比对分析。结果表明:LNEU12毒株基因全长为15 398 nt(不含3'尾端序列),与LV毒株同源性为90.1%,其中NSP2和ORF3/4重叠区域缺失21 nt,ORF6、ORF7较为保守。根据基因变异特点和遗传进化亲缘关系推测LNEU12辽宁分离株为欧洲型PRRSV变异毒株。 相似文献
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2011年从辽宁省采集以多发性纤维素性浆膜炎为主要特征的病猪肺脏、心包液、血液等病料,通过分离培养、生化试验和PCR检测等方法确认分离到1株副猪嗜血杆菌Hps LN111013,同时应用多种药物对该菌株进行了药物敏感性试验及分析;结果表明该菌株在形态、培养特性和生化试验等方面与国内其他地区所分离到的菌株基本一致,纸片法药敏试验证明本菌对氟苯尼考、头孢噻呋、洛美沙星最为敏感。本研究为进一步确认辽宁省副猪嗜血杆菌流行菌株的血清型和基因型,查明其传染来源和遗传变异情况奠定了基础,为制定辽宁省副猪嗜血杆菌病防控措施提供依据。 相似文献
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一种“高性价比”切胶纯化原核表达蛋白的方法 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:建立一种低成本高效率的纯化表达蛋白的新方法。方法:在保证不改变原有蛋白生物活性的前提下,以NaAc染色切胶纯化方法为参考,通过以KCl取代NaAc染色目的蛋白、反复冻融后快速离心等操作步骤取代原来的电泳后过夜透析等实验步骤。结果:最终使原实验时间至少缩短2/3,而且所得目的蛋白不存在浓度和纯度降低的问题。结论:为许多条件有限的实验室进行纯化原核表达蛋白的研究提供了一种“性价比”更高的实用方法。 相似文献