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通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小为501bp,编码167个氨基酸,前23个AA为信号肽,与GenBank上发表的犬IFNγ((NM001003174.1)比较,序列的同源性为99.4%。构建了原核表达载体pET-30a-IFNγ,转化BL2L,IPTG诱导后表达约23Kd的重组蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后,纯度达90%以上;利用抑制病毒噬斑法测定重组藏獒犬γ干扰素的生物学活性,结果显示纯化的蛋白具有一定的抗病毒活性,本研究结果为进一步研究犬γ干扰素的抗病毒活性奠定基础。 相似文献
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用已构建好的重组表达载体pET30-IL2转化BL-21E.coli,挑取单克隆,利用诱导剂IPTG诱导表达;通过改变诱导剂的浓度、诱导的时间来摸索最佳诱导条件,在最佳诱导条件下大量表达,并利用镍层析柱纯化重组蛋白,用MTS法测定其生物学活性。结果表明,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出25ku的融合蛋白,表达产物主要以包涵体的形式存在,最佳的诱导剂浓度为0.1mM,最佳的诱导时间为4h;对表达产物的包涵体处理后,用镍琼脂糖凝胶FF纯化,所得蛋白的纯度约在90%以上。通过透析除去部分尿素,复性后在体外利用MTS法检测其生物学特性,结果表明其仍具有较好的生物学活性,这为进一步大量制备和研究猪IL-2重组蛋白奠定了基础。 相似文献
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摘要;水是重要的自然资源,水利、水电工程是综合利用水资源发展国民经济的重要手段,是保障经济建设和人民生命财产安全的重要措施,是国家和人民的宝贵财富。在科学发展观的指导下,加强对水利、水电工程的管理,使其发挥更大作用,为经济发展和人民生活做出更大贡献,是新时期发展建设的重要课题。对此,本文做粗浅探讨。 相似文献
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随着我国现代化建设的迅速发展,水利水电工程项目越来越多,相关工程的结构类型也日趋多样化。为了提高建设水利水电工程的质量,必须加强政府对_Y-程质量的监管,努力维护国家和公众的利益,建立相关的施工项目管理方法来进行项目的施工管理。 相似文献
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采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,进一步探索了酵母菌表达猪IL-18的发酵工艺.结果表明,摇瓶发酵时,诱导最佳时间为72 h,甲醇最适浓度为20 g/L,最适pH范围为6.0~8.0,最适接种量1∶1.与单纯甲醇诱导相比,甘油/甲醇诱导后的表达量明显提高. 相似文献
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为了掌握兰州市城区犬细小病毒病的流行情况及特点,为有效防控犬细小病毒病提供依据,项目组对2015年10月至2016年9月兰州市城区甘肃农业职业技术学院宠物门诊、安居宠物门诊、伊宝康动物医院等十家宠物医院前来就诊的4 052只患犬进行了犬细小病毒病的诊断,经检测有1 028只患细小病毒病,对1 028只患犬进行了流行病学调查。结果表明:兰州市城区犬细小病毒病1岁以内的犬最易感,其中主要以1月龄到3月龄的幼犬最易感;公犬较母犬易感染;未免疫犬比免疫犬易感;一年四季均可发生,冬春季节发病率相对较高。 相似文献
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将猪白介素18(Porcine interleukin18,PIL-18)基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建了重组表达质粒pEGFP-PIL-18,利用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR检测技术确定目的蛋白的表达情况.结果在转染重组质粒24 h4、8 h后的BHK细胞中均观察到绿色荧光,转染的BHK细胞经G418筛选14 d后,用RT-PCR法检测目的基因,并扩增到长576 bpd的目的cDNA片段。表明在BHK细胞中成功地表达了PIL-18与EGFP的融合蛋白,这为下一步建立稳定表达PIL-18的细胞系奠定了基础. 相似文献
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为研究兰州市城关区犬弓形虫病的流行情况,本试验采用宠物用弓形虫抗体快速检测卡和/或弓形虫间接血凝试验(IHA),对城关区3家宠物诊所就诊犬和兰州市流浪动物救助站流浪犬共计439只进行检测分析。结果表明:3家宠物诊所就诊犬感染率分别为7.1%、6.9%、6.5%,均低于平均感染率7.5%,流浪动物救助站流浪犬感染率较高,为10.2%;犬弓形虫的感染率随着年龄的增长也在增加,调查中1岁犬感染率3.2%,1~3岁和3~6岁年龄段分别为5.6%和6.0%,6岁犬感染率11.34%;但不同性别犬对弓形虫的感染差异不显著。 相似文献
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本文结合工作经验，对常用的各种防渗处理方式、方法进行总结整理，并结合小型水利水电枢纽工程的现状提出当前适用性较高的防渗方法。 相似文献