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来源于Selenomonas ruminantium的高比活植酸酶基因在毕赤酵母中的高效表达 总被引：6，自引：1，他引：6
应用酶解效率更高的高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的有效途径。根据毕赤酵母对于密码子的选择偏向,对来源于原核瘤胃微生物Selenomonasruminantium的高比活植酸酶基因phyS进行了密码子优化,将优化后的植酸酶基因phyS(m)与未优化的phyS插入到毕赤酵母转移载体pPIC9中,转化毕赤酵母得到重组子,在摇瓶水平上,phyS(m)的表达水平比phyS高10倍。在5L发酵罐中,优化后的植酸酶基因phyS(m)其蛋白表达量达到4mgml-1发酵液,效价达到1.6×106I 相似文献
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阿魏酸酯酶广泛应用于食品、药品、饲料及造纸等行业,挖掘适用于工业化的阿魏酸酯酶至关重要。从嗜热真菌Thermoascus crustaceus JCM12803中克隆得到一个阿魏酸酯酶基因FAE-2515,经基因序列分析,FAE-2515 cDNA全长为1 581 bp,编码526个氨基酸和1个终止子,理论分子量大小为57 kDa,等电点为5.08。将FAE-2515成功地在毕赤酵母中实现高效异源表达,通过对重组蛋白进行酶活测定,比活为（53.653±3.451）U/mg,Kcat/Km值为1.423,最适pH为6.0,最适温度为55℃,60℃处理1 h之后还能保持60%的酶活,热稳定性较已报道的同类酶更为稳定。以阿魏酸甲酯为底物时酶活表现为最高,以硝基苯棕榈酸酯为底物时几乎没有酶活。金属离子K+、Ca2+、Na+对该酶有显著的促进作用,Fe3+、Zn2+对该酶有轻微抑制作用,Mn2+、Cu2+对该酶有显著的抑制作用。综上,该酶在造纸工业和动物饲料制备工业中具有一定优势。 相似文献
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分泌型巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）作为高效表达宿主菌已被广泛应用,通过高密度培养工艺用于多种酶制剂(如植酸酶、甘露聚糖酶等)的规模生产。然而,在生产过程中产生的大量菌体利用率低,多数被废弃掩埋,或只能作为廉价的菌体蛋白,造成大量的资源浪费。为提高酵母发酵副产物的利用率,向毕赤酵母宿主菌GS115中导入来源于红发夫酵母（Xanthophyllomyces dendrorhous）β-胡萝卜素合成途径中的关键基因(idi、crtE、crtYB和crtI),获得了胞内高产β-胡萝卜素的工程菌株P. pastoris GS115-CARO,实现工业生产中的菌体蛋白的高附加值利用。同时以来源于嗜热篮状菌（Talaromyces leycettanus JCM12802）的甘露聚糖酶基因Man5T作为参照,验证了宿主菌P. pastoris GS115和P. pastoris GS115-CARO在表达外源蛋白的差异。结果表明：Man5T基因的导入并没有影响,两株宿主菌的甘露聚糖酶表达量（分别为280 U/mL和286 U/mL,P>005）,但宿主菌P. pastoris GS115-CARO胞内β-胡萝卜素产量高达到31.27 mg/g(菌体干重dry cell weight,dcw)。构建的工程菌株不仅可以实现外源酶制剂的高效表达,有效地提升酵母菌体资源的利用价值,同时也在一定程度上了解决了发酵菌体对环境的污染问题。 相似文献
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碱性蛋白酶作为广泛应用的蛋白酶之一,具有重要的工业应用价值。发掘优质的碱性蛋白酶基因,实现其高效表达,有助于更好的满足工业应用需求。分别将Cordyceps fumosorosea和Beauveria bassiana来源的碱性蛋白酶基因pa1及pa2与表达载体pPIC9连接,并在毕赤酵母GS115中实现高效表达。对于纯化后的重组蛋白PA1及PA2的酶学性质进行测定,二者最适pH均为8.5,最适温度均为60 ℃,与同类酶相比具有一定的优势;PA1及PA2的温度稳定性较好,50 ℃下酶活保持稳定,60 ℃下处理10 min,二者均保持70%左右的酶活;PA1及PA2的pH耐受范围宽泛,在pH 4.0~11.0的环境中处理1 h,均能保持80%以上的活性。此外,PA1及PA2对于表面活性剂和还原剂也表现出一定的耐受性。这些性质都表明PA1及PA2是具有工业应用潜力的优质碱性蛋白酶。 相似文献
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随着极端微生物及极端酶的广泛研究，嗜酸酶因其在极端酸性环境中具有高的酶活性和稳定性而倍受关注，并取得了较大的研究进展。嗜酸糖苷水解酶是嗜酸酶中最重要的一类，在生物能源、饲料、食品等工业中具有重要的应用前景。综述了重要嗜酸糖苷水解酶，包括嗜酸淀粉酶、嗜酸纤维素酶、嗜酸木聚糖酶和甘露聚糖酶在基因的挖掘、表达、分子改良嗜酸机制研究以及应用等方面国内外的研究进展，展望了嗜酸糖苷水解酶未来可能的研究方向和发展前景。 相似文献
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鲎素抗菌蛋白及在饲料工业中的应用前景 总被引：1，自引：0，他引：1
一、前言 我国年产饲料7000万t,因其中的有害微生物造成的饲料变质而使营养物质流失达到15％～20％,每年造成的直接损失高达10亿元以上;而有害微生物引起的动物中毒造成的损失更高,达30亿元以上。 饲料中富含蛋白质、糖类等多种营养,易于畜禽消化吸收,同时也有利于病原腐败菌的生长。在饲料中添加防腐剂、防霉剂等饲料保存剂,是解决、延长保质期的有效措施之一,但这些饲料保存剂主要是化学药剂,存在残留的问题,被畜禽吸收到体内并有一定程度的累积,这种累积 相似文献
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来源于橄榄绿链霉菌（Streptomyces olivaceoviridis）A1的木聚糖酶XYNB是一性质优良的高比活性木聚糖酶，已在饲料中作为添加剂应用。本研究利用携带双35S启动子和AMV增强子的表达载体，在烟草中高效表达了XYNB。转基因烟草及其子代植株基因组PCR检测证实xynB基因已整合到转基因烟草的基因组中, ELISA和SDS-PAGE以及Western blotting分析确证了xynB基因的高效表达, 木聚糖酶活性分析证实了表达酶具有正常的生物学活性。表达的XYNB约占叶片总蛋白含量的6%， 转基因烟草表现的最高酶活性约为170 IU/g鲜叶片(23 IU/mg总蛋白)。表达酶蛋白分子量为20.8 kD, 与理论分子量相当。转基因植株可以正常生长和繁殖，T1子代植株表现了与亲代相似的酶活性，具有较好的遗传稳定性。 相似文献
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葡萄糖氧化酶(GOX)已广泛应用于各种工业生产中。目前,除了曲霉和青霉属来源的GOX外,鲜有新型GOX被报道。经基因克隆和序列同源性分析,Cladosporium tianshanense SL19来源的葡萄糖氧化酶基因CtgoxB是一个新基因,该基因全长1 707 bp,无内含子,编码568个氨基酸,N-端第1～16个氨基酸为信号肽,与已报道的GOX序列最高一致性为35%。CtgoxB在毕赤酵母中实现异源表达,但重组蛋白CtGOXB未检测到GOX活性。通过序列和结构分析,同源重组构建的突变体CtGOXB-C1最终恢复了GOX活性。经SDS-PAGE鉴定,重组蛋白CtGOXB-C1表观分子量约为120 kDa,大于理论分子量(61.6 kDa)。经酶学性质测定,CtGOXB-C1比活为123.8 U/mg,在pH 8.0和30℃条件下具有最高的酶活,且在10℃时依然维持65%的酶活,具有嗜低温特性。CtGOXB-C1在pH 6.0～9.0条件下保温1 h后,剩余酶活维持在80%以上,可以在中碱性条件下维持较高酶活,并且对表面活性剂SDS具有较强的抗性。这些性质表明CtGOXB-C1在水产饲料和洗涤剂等行业中具有良好的应用潜力。 相似文献
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食品加工副产物富含果胶类物质，果胶酶可以将其降解为果胶低聚糖，不仅可以有效控制果胶低聚糖的聚合度及结构，还能实现食品加工副产物废弃资源的再利用，创造新的经济效益。从嗜酸真菌Bispora sp. MEY-1克隆获得一个碳水化合物第8家族的果胶甲酯酶基因Pem8A，将其连接到表达载体pPIC9上，在毕赤酵母 GS115 中实现高效异源表达。对纯化后的重组蛋白PME8A的酶学性质进行测定，发现其最适温度为60 ℃，在55～80 ℃可保持80%以上的酶活；最适pH为3.5，在pH 2.5～5.0范围内维持50%以上的酶活，是真菌来源中少数的嗜酸果胶甲酯酶。用PME8A处理苹果渣、橘皮果胶粗提物后，去甲基化效果明显，使得Achaetomium sp. Xz8来源的内切多聚半乳糖醛酸酶PG8fn酶活分别提高了8.5倍和1倍，表现出很好的协同效应。研究证明果胶甲酯酶PME8A可以应用于从食品加工副产物生产果胶寡糖，为果胶低聚糖的获取提供了新的方法。 相似文献