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以小鼠脾脏cDNA为模板，用降落PCR扩增IL-1Ra基因片段，IL-1Ra基因片段长约为537 bp。将IL-1Ra扩增片段和原核表达载体pET-30a(+)连接构建重组表达质粒，在37℃诱导表达，重组表达的小鼠IL-1Ra蛋白的分子质量为19 ku。用纯度较好的小鼠IL-1Ra重组蛋白免疫兔子，制备特异性多克隆抗体；测定多克隆抗体的效价达到1∶4 096 000。经Western-Blot鉴定该抗体可与Raw264.7细胞中表达的小鼠IL-1Ra天然蛋白发生特异性结合。利用实时荧光定量PCR和Western-Blot检测表明布鲁氏菌S2弱毒株感染Raw264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞)后小鼠IL-1Ra上调表达。本研究成功制备了小鼠IL-1Ra重组蛋白和兔抗多克隆抗体，为深入探讨小鼠IL-1Ra与布鲁氏菌感染之间的关系提供工具。 相似文献
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为研究IL-1β在布鲁氏杆菌（Brucella）侵染小鼠巨噬细胞过程中的表达情况，首先构建重组小鼠IL-1β原核稳定表达系统，免疫新西兰兔获得多克隆抗体，通过ELISA检测血清效价，并通过Western blot分析其活性，再以感染复数（multiplicity of infection,MOI）为1∶100（细菌∶细胞）建立猪种布鲁氏杆菌S2株侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7的模型，利用RT-PCR检测细菌侵染过程中IL-1β和MyD88 mRNA的变化水平；Western blot分析IL-1β在蛋白水平的变化。结果表明，重组蛋白IL-1β分子质量31 ku，多克隆抗体效价为1∶256 000，并且具有良好的特异性；与对照组相比，感染后IL-1β mRNA和IL-1β蛋白表达上调，胞内细菌数减少。猪种布鲁氏杆菌S2株侵染巨噬细胞IL-1β的表达量随时间变化并影响胞内活菌数。 相似文献
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